氨溴索对粘液型铜绿假单胞茵生物膜藻酸盐作用的体外研究

目的探讨氨溴索对铜绿假单胞菌临床分离株形成的生物膜（biofilm，BF）主要成分藻酸盐的干预作用，研究其对藻酸盐合成过程中起重要作用的基因表达和合成过程中限速酶活性的影响，以及其对藻酸盐降解的影响。方法建立铜绿似单胞菌临床分离株BF体外模型，培养7d后得到成熟BF。将BF内的细菌振荡下来后，用疏酸-苯酚法检测氨溴索对藻酸盐含量的影响；RT-PCR检测藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA表达；分光光度计检测合成过程中限速酶——GDP-甘露糖脱氢酶（guanosine diphospho-D-mannose dehydrogenase，GMD）的活性，并检测藻酸盐的降解情况。结果在氨溴索3．75mg／ml作用下，藻酸盐含量（mg／g）由86．4024±0．8588下降到59．9199±0．5803（F=66．2，P〈0．01）；其合成重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达分别由1．2994±0．0173、1．0488±0．0457、0．9888±0．0267和0．8731±0．0336变化为1．0253±0．0265、0．9594±0．0106、0．8536±0．0179和1．0770±0．0503（F=91．9，41．1，88．4和56，9，P均〈0．05）；其合成限速酶GMD活性由0．0989±0．0055下降到0．0558±0．0016（F=121．2，P〈0．01）；藻酸盐的降解量（△mg／g）由1．4122±0．0073变化为1．4175±0．0019（F=21．81，P〉0．05）。1．875mg／ml氨溴索作用下，有同样的趋势但效应不如高浓度明显。结论氨溴索可以降低铜绿假单胞菌BF藻酸盐的含量，影响藻酸盐合成过程中重要基因algD、algU、algR和mucA的mRNA的表达，降低藻酸盐合成限速酶GMD活性，但对藻酸盐的降解无影响。