Effects of temperature on growth and total gypenosides accumulation in Gynostemma pentaphyllum and Gynostemma pentagynum

温度是影响绞股蓝生长发育和总皂苷积累的重要环境因子之一.将绞股蓝和五柱绞股蓝幼苗置于10、15、20、25 ℃和30 ℃的光照培养箱中处理40 d,检测其形态指标和总皂苷含量.结果表明:在25 ℃条件下,绞股蓝的叶面积、叶柄长、茎长、新萌叶片数、生物量和总叶绿素含量均为最高,五柱绞股蓝的生长发育也具有类似的规律,因此推断25 ℃是绞股蓝和五柱绞股蓝生长发育的适温条件.绞股蓝和五柱绞股蓝的总皂苷含量则以30 ℃下最高.绞股蓝的生物量和总皂苷含量决定了总皂苷产量,25～30 ℃最有利于提高绞股蓝的总皂苷产量,30 ℃则是提高五柱绞股蓝总皂苷产量的最适温度.     

动态连续逆流提取绞股蓝皂苷的研究

本文在中试条件下,通过单因素试验和正交试验考察不同因素对绞股蓝皂苷提取得率的影响,从而探讨动态连续逆流提取绞股蓝皂苷的最佳工艺。结果表明:动态连续逆流提取绞股蓝皂苷最佳条件为:提取溶剂温度为80℃,料液比为1∶35(g/mL),提取时间为50 min。在此条件下,绞股蓝提取物平均提取得率为33.95%,皂苷得率为8.9%;动态连续逆流提取绞股蓝皂苷具有生产连续性好、皂苷提取得率高、产品纯度高等优点。     

超滤膜纯化绞股蓝皂苷的工艺

探讨采用超滤膜分离纯化绞股蓝总皂苷的工艺。以固形物得率和绞股蓝总皂苷含量为评价指标进行正交试验,对操作压力、溶液温度和膜的规格等因素进行优选。发现最佳工艺条件为选择截留相对分子质量为3×104的超滤膜,在溶液温度40℃、操作压力2.0×106Pa条件下纯化效果较好;所选择的超滤膜纯化绞股蓝皂苷的工艺操作简单可靠,所得产品纯度高。     

连续逆流提取机及其在绞股蓝皂苷提取工艺中的应用

简述了中草药连续逆流提取机的基本结构和工作原理.以水为溶媒、绞股蓝为原料,进行绞股蓝有效成分的提取试验.以绞股蓝水溶出物和总皂苷为目标物,考察提取温度、液料比和提取时间等因素对提取得率的影响,并通过L9(33)正交实验设计,对提取工艺进行优选.采用中草药连续逆流提取机提取绞股蓝有效成分的最佳工艺条件:提取溶剂温度80 ℃,料液比1:35(g/mL),提取时间50 min;所得提取物得率为33.95%,总皂苷得率为8.9%.     

纯化的绞股蓝皂苷的抗氧化活性研究

目的:比较经不同纯化条件纯化的绞股蓝皂苷样品的体外抗氧化能力,方法:通过清除DPPH自由基,羟自由基,抑制脂质过氧化的能力,还原力来检测样品的抗氧化能力。结果:对DPPH自由基清除率最高的是总皂苷A,达86.08%;对.OH的清除率最高的总皂苷A’,为53.49%;对脂质过氧化的抑制率最高的是总皂苷A,为54.08%,还原力大小排序为总皂苷A>总皂苷A’>总皂苷B。结论:总皂苷A的抗氧化能力最强。     

不同居群五柱绞股蓝叶形变异及总黄酮含量分析

以不同生境的五柱绞股蓝为材料,对4个不同来源的五柱绞股蓝的叶片性状、裂叶数进行了统计,并以芦丁为对照品,采用分光光度法对4个居群五柱绞股蓝的总黄酮含量进行了测定。结果表明,五柱绞股蓝的叶型变异较大,其复叶具有3-9裂叶型类型,以7裂叶型和5裂叶型为主。相关性统计显示,野生型五柱绞股蓝黄酮含量高,与7裂叶型极显著相关,家种型五柱绞股蓝黄酮含量低,与叶型无关,环境因子可能是影响其黄酮含量的主要因子。在引种时,7裂叶型的五柱绞股蓝可作为优选资源引用。     

福建绞股蓝真菌转化及其产物抗癌活性研究

研究黑曲霉和构巢曲霉两种真菌对福建绞股蓝皂苷的微生物转化。在37 ℃条件下液体发酵2 d后,HPLC分析表明,微生物转化后成分发生明显变化;利用MTT法测定抗癌活性,比较绞股蓝皂苷微生物转化前后活性变化,结果表明,转化前绞股蓝皂苷转化底物无抗癌活性,两种真菌转化产物有显著的抗癌活性。构巢曲霉和黑曲霉的转化产物对肝癌细胞SMCC7721增殖的72 h半抑制率IC₅₀值分别为92.00、40.60 mg·mL^-1;对肝癌细胞Bel7402增殖的72 h半抑制率IC50值分别为49.06、125.38 mg·mL^-1。说明两种真菌对绞股蓝皂苷微生物转化产生具有抗癌活性的成分,为从绞股蓝中筛选和分离活性成分提供新的研究思路。     

超声波协同酶法提取绞股蓝皂苷的工艺研究

目的:探索超声波协同酶法用于提取绞股蓝总皂苷的可行性.方法:分别采用常规水浴法、单一酶法、单一超声波法、超声波协同酶法等试验方案进行处理结果:超声波和纤维素酶对总皂苷的提取都有明显的促进作用,而采用超声波协同酶法促进效果更为明显,其中酶解后超声波处理比先超声波后酶解的处理方法,绞股蓝总皂苷的提取率更高,达到7.494%,比常规水浴法、单一酶法、单一超声波法分别提高了79.28%、34.37% 、43.04%.结论:超声波协同酶法能显著提高绞股蓝总皂苷的提取率.     

UPLC-Q-TOF-MS快速鉴定黄山野生绞股蓝中皂苷类物质

为鉴定黄山野生绞股蓝中皂苷类成分,为黄山野生绞股蓝的开发利用提供理论基础。实验选取超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS),采用waters Acquity HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正离子模式下采集数据,首先选取4种具有达玛烷型结构的皂苷标准品进行分析,总结达玛烷型皂苷类物质质谱裂解规律及特征离子碎片信息,再依据这些规律快速鉴定黄山野生绞股蓝中的皂苷类物质。从黄山野生绞股蓝中共鉴别出25种皂苷类物质,其中有6个化合物在该植物中属首次发现。     

乙烯对绞股蓝皂苷生物合成关键酶基因表达和皂苷含量的影响

以药食两用植物绞股蓝为材料,研究了植物激素乙烯对绞股蓝皂苷生物合成关键酶基因表达及皂苷含量的影响。该文采用荧光定量PCR技术,检测了乙烯利处理后绞股蓝不同器官中皂苷生物合成关键酶基因GpFPS、GpSS和GpSE的表达水平; 采用分光光度法及HPLC技术,测定了乙烯利处理对绞股蓝总皂苷和皂苷单体Rb₁、Rb₃和Rd含量的影响。结果表明:(1)外施乙烯利能够不同程度地上调GpFPS、GpSS和GpSE基因的表达水平,且3个基因的表达模式在不同器官间不同,而在同一器官中相似。(2)在乙烯利处理后3 d,所测各器官中的总皂苷含量与对照相比均有所上升,其中根、成熟叶和幼叶达到显著水平,但3个皂苷单体在不同器官中的增加或降低并不一致,以Rb₃含量最高。该结果为探索利用植物激素调控绞股蓝皂苷次生代谢提供了参考。     

绞股蓝属三种植物的POD、EST和SOD同工酶研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对绞股蓝属的五柱绞股蓝、广西绞股蓝和绞股蓝3种植物的POD、EST和SOD同工酶进行了比较研究。结果表明,3种绞股蓝的3种同工酶谱带不同。3种同工酶在广西绞股蓝上表现最强。3种同工酶在同一物种不同器官中的表达具有一定差异,以叶中的表达最强,茎次之,根最弱。由同工酶推断的3种绞股蓝的亲缘关系为绞股蓝与广西绞股蓝亲缘关系较近,与五柱绞股蓝亲缘关系较远。     

The direct release of nitric oxide by gypenosides derived from the herb Gynostemma pentaphyllum.

Herbal medicines are increasingly being utilized to treat a wide variety of disease processes. Gypenosides are triterpenoid saponins contained in an extract from Gynostemma pentaphyllum and are reported to be effective in the treatment of cardiovascular diseases; however, the mechanism underlying the therapeutic effect is not known. We tested the hypothesis that gypenosides extracted from G. pentaphyllum elicit vasorelaxation through the direct release of endothelium-derived nitric oxide. Nitric oxide production in bovine aortic endothelial cells grown under standard tissue culture conditions was quantitated using a chemiluminescence method. Arterial vasomotion was assayed using isolated porcine coronary artery rings under standard isometric recording conditions. The extract of G. pentaphyllum at 0.1-100 microg/ml elicited concentration-dependent vasorelaxation of porcine coronary rings that was antagonized by the nitric oxide synthase inhibitor N(G)-nitro-l-arginine methyl ester. Indomethacin had no significant effect on G. pentaphyllum-induced relaxation. The G. pentaphyllum extract elicited a concentration-dependent increase in nitric oxide production from cultured bovine aortic endothelial cells. At the concentrations utilized, there was no morphological evidence for cellular toxicity. These results demonstrate that extracts of G. pentaphyllum directly stimulate nitric oxide release, but not prostanoid production. Nitric oxide production in response to gypenosides may be one mechanism whereby this herbal medicine elicits its therapeutic effects.     

绞股蓝营养器官各发育阶段结构与总皂甙含量相关性的研究

应用组织化学定位技术及植物化学方法,研究了不同发育阶段绞股蓝茎叶的结构与其中人参皂甙分布积累和总皂甙含量的关系。绞股蓝内的人参皂甙通过特定的显色剂能显示从紫红到浅红的颜色反应,颜色深浅与人参皂甙含量呈正相关。结果表明,叶内的皂甙主要分布在叶肉组织内,未分化的叶肉组织比成熟组织含量高,衰老的叶片不含皂甙。茎内的皂甙主要分布于维管束的外生韧皮部薄壁细胞中,表皮、同化组织、厚角组织及周皮的栓内层也有少量分布,木质部和髓薄壁组织无皂甙积累;幼茎所含总皂甙高于发育成熟的茎和老茎,含量最高的则是具有贮藏功能的根状茎。在绞股蓝全草中,叶的总皂甙含量高于相应发育阶段的茎,而以当年生根状茎的含量最高。提出了皂甙在叶内积累、茎内运输和地下茎内贮藏的观点及科学采收绞股蓝的建议。     

绞股蓝人参皂甙的组织化学定位及其含量的变化

应用光镜技术、组织化学定位及植物化学方法,研究了人参皂甙在绞股蓝营养器官中的积累分布状态以及不同生长期、不同器官、不同性别之间的绞股蓝总皂甙含量的动态变化。结果表明,绞股蓝人参皂甙主要分布在营养器官的同化组织及韧皮部薄壁细胞中,厚角组织、表皮及周皮的栓内层也有少量分布,木质部和髓薄壁组织中无皂甙分布;叶中皂甙积累最多,茎次之,根最少。绞股蓝在营养生长期→花果期→枯萎期的生长发育过程中,其地上部分的皂甙含量呈现出低→高→低的变化趋势;叶的含量高于茎,雄株的含量高于雌株。从而认为在9—10月的花果期采收绞股蓝的地上部分而保留地下茎和根,有利于药材品质和产量的提高,又有利于药用资源的可持续开发利用。     

绞股蓝法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及其序列分析

目的:克隆并分析绞股蓝法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因的全长序列。方法:参照罗汉果法呢基焦磷酸合酶基因,设计扩增绞股蓝FPS基因的3′RACE引物,采用3'RACE和5'RACE法克隆绞股蓝FPS基因全长cDNA。结果:获得绞股蓝FPS基因全长cDNA序列共1288个核苷酸,包含一个1026核苷酸的开放读框,编码342个氨基酸残基,推断该蛋白的相对分子质量为3.94×104。NCBI Blast结果显示绞股蓝FPS基因编码蛋白的氨基酸序列与已知的植物FPS氨基酸序列的同源性为91%~74%,核酸序列的同源性为88%~78%。结论:克隆了绞股蓝FPS基因全长cDNA序列,为进一步研究绞股蓝FPS基因的表达及三萜皂苷合成通路关键酶分子的进化奠定了基础。     

绞股蓝龙须茶的人参皂甙组织定位及皂甙含量的季节变化

应用组织化学定位技术及植物化学方法,研究了人参皂甙在商品绞股蓝龙须茶中的组织分布状态及绞股蓝总皂甙在不同季节中的含量变化。结果表明,绞股蓝内的人参皂甙遇特定的显色剂出现深浅不同的红色,色度与人参皂甙含量呈正相关。绞股蓝叶内的人参皂甙主要分布在叶肉组织,茎内的人参皂甙主要分布于维管束的韧皮部薄壁细胞中,同化组织、厚角组织和表皮也有少量分布．木质部和髓薄壁组织中无皂甙分布。在4月至11月的龙须茶采收期中,总皂甙含量呈逐渐上升的势态,4月最低．9月最高,含量变化与月总降雨量呈显著的正相关。研究认为在8月后湿润凉爽气候条件下采摘绞股蓝芽尖加工而成的龙须茶品质最好。     

温、光、盐对硅藻STR01生长、总脂、脂肪酸的影响

为了优化新分离STR01的生态培养条件, 采用单因子试验和正交试验研究了不同温度、光照强度、盐度和温、光、盐三因素三水平对该藻的生长、总脂和脂肪酸组成影响。结果表明: 温、光、盐对STR01的生长、总脂和脂肪酸组成影响显著(P<0.05)。生长的适宜温度为15—35℃, 最适25—30℃(K值达0.679—0.682), 总脂含量积累的最适温度是25℃(总脂可达17.23%), 温度20℃时有利于该藻PUFA的积累, 可达34.23%。STR01生长的适宜光照强度为40—120 μmol/(m2·s), 最适光强为60 μmol/(m2·s), 光照强度40 μmol/(m2·s)有利于该藻的PUFA积累, 可达34.29%。STR01生长的适宜盐度为10—35, 最适盐度25, 盐度25时PUFA含量较高(43.42%)。正交试验结果表明温度对STR01的平均相对生长速率和总脂含量影响显著, 生长的最优组合: 温度30℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度25, 该组合下的生长速率达0.756; 总脂含量积累的最优组合: 温度30℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度20, 该组合下的总脂含量为20.00%。PUFA的最优组合: 温度25℃、光照强度60 μmol/(m2·s)、盐度20, 该组合下PUFA的含量为35.37%。综上所述: 该藻生长迅速, 总脂含量较高, PUFA丰富, 是一种可开发利用的耐高温浮游硅藻。     

绞股蓝总皂甙含量与其营养器官和生长期相关性的研究

应用组织化学和植物化学方法,研究绞股蓝总皂甙含量与其营养器官和生长期的相关性。结果表明,不同营养器官中绞股蓝总皂甙含量叶最高,茎次之,根茎和根最低。绞股蓝地上部分总皂甙含量从营养生长→开花→结果不同生长期呈现由低→高→低的变化趋势,其中7、8、9月的开花期绞股蓝总皂甙含量达到顶峰,为药材最佳采收时间。研究还得出,绞股蓝叶的形态结构特征与其总皂甙含量相关,可作为选育绞股蓝优良品种的指标。