HIF-1α/Sonic Hedgehog信号通路在大鼠胃黏膜病变演化过程中的动态表达

该文探究了HIF-1α/Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的动态表达与胃黏膜病变演化过程的关系及其意义。选用72只乳鼠(SD大鼠,8周龄+,雄性)随机分为正常组、模型组,予1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)建立胃癌前病变模型后,在第4、10、16、22、28、34周末两组分别处死6只,采用苏木精–伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色检测胃黏膜组织病理学变化,qRT-PCR法检测HIF-1α、VEGF、CTGF、iNOS、ET-1、Shh、Ptch1、Smo、SuFu、Gli1、Cyc-D1、Cyc-E1、c-Myc mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α、CTGF、iNOS、ET-1/2/3、Shh、Ptch1、Smo、SuFu、Gli-1、Cyc-D1、p-c-Myc蛋白的表达。结果显示,HE染色可见模型组大鼠胃黏膜随时间推进出现炎症、萎缩、肠化,甚至异型增生。从第28周开始,模型组大鼠胃黏膜组织内HIF-1α、VEGF、CTGF、iNOS、ET-1、Shh、Smo 、Gli1、Cyc-D1、Cyc-E1 mRNA表达随造模时间增长,均有不同程度的升高,第34周时两组间的差异有统计学意义(P0.05);SuFu mRNA表达随时间增加略呈下降趋势,差异在第34周有统计学意义(P0.05),Ptch1 mRNA表达除16周外均呈下降趋势,但差异无统计学意义(P0.05);模型组大鼠胃黏膜内HIF-1α、CTGF、iNOS、ET-1/2/3、Gli1蛋白表达水平呈升高趋势,28周开始组间差异有统计学意义(P0.05),Shh、Smo、SuFu蛋白表达无明显差异(P0.05);Ptch1蛋白表达略呈下降趋势,第4周时差异有统计学意义(P0.05);Gli-1蛋白表达呈下降趋势,16周时差异有统计学意义(P0.05);Cyc-D1蛋白表达在第16周有减少,差异有统计学意义(P0.05);p-c-Myc蛋白表达呈上升趋势,第10周时差异有统计学意义(P0.05)。这提示HIF-1α/Shh信号通路均参与胃黏膜恶性病变过程,其关键基因可作为延缓或抑制胃黏膜病变的重要靶点。     

Celecoxib抑制Lewis肺癌移植瘤淋巴管生成的作用机制及量效关系

目的:COX-2过度表达及淋巴管的生成与肺癌早期转移、不良预后密切相关。观察不同剂量COX-2特异性抑制剂Celecoxib对Lewis肺癌移植瘤生长、COX-2、VEGF-C表达和微淋巴管生成影响,探讨Celecoxib对Lewis肺癌移植瘤淋巴管生成可能作用机制及量效关系。方法:将Lewis肺癌细胞株接种于C57BL/6小鼠左侧腹股沟皮下建立移植瘤模型,随机分为4组:对照组、塞来昔布低剂量(30 mg·kg-1·d-1)、中剂量(90 mg·kg-1·d-1)、高剂量(180 mg·kg-1·d-1)组。观察荷瘤小鼠生存状态,瘤体积变化,计算抑瘤率,种瘤42天后牺牲小鼠,切取移植瘤组织,免疫组化染色检测COX-2、VEGF-C表达及微淋巴管密度(Lymphatic microvessel density,LMVD)。结果:塞来昔布低、中、高剂量组的抑瘤率分别为13.3%、46.8%和56.3%。塞来昔布高、中剂量组较对照组抑瘤作用明显,差异有统计学意义(P0.05),但低剂量组差异无统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色结果分析显示:塞来昔布高、中剂量组COX-2、VEGF-C的表达水平及微淋巴管密度均明显减低,差异有统计学意义(P0.05),低剂量组略有减低但差异无统计学意义(P0.05)。抑制程度呈明显的剂量依赖性。结论:塞来昔布抑制Lewis肺癌移植瘤的生长及淋巴转移,可能与下调COX-2的表达,减少VEGF-C的产生,抑制微淋巴管生成有关,该抑制作用呈一定的剂量相关性,为抗肺癌早期淋巴转移,改善患者预后的药物研发提供了一定的实验基础。     

二甲双胍增强胰腺癌放疗敏感性的体外及体内实验研究

目的:探讨二甲双胍对胰腺癌细胞和胰腺癌裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响。方法:体外培养人胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞,分为二甲双胍处理组和未处理组,处理组给予10 mmol/L二甲双胍作用48小时后分别给予0、1、2、4、6、8Gy射线对两种细胞进行照射,运用克隆形成实验,Giemsa染色后计算克隆形成率及SF2,并拟合细胞存活曲线。应用裸鼠皮下注射胰腺癌细胞,建立两种细胞的裸鼠移植瘤模型,裸鼠肿瘤体积达到100 mm~3时,作为0天,并开始分组,每种移植瘤使用24只裸鼠随机分为4组:生理盐水对照组、单纯二甲双胍治疗组、单纯照射组、二甲双胍+照射组,二甲双胍处理组每天给予250 mg/kg(50μL/每只)腹腔注射,对照组仅给予等量生理盐水注射(50μL/每只)。每4天用游标卡尺测量移植瘤的长径和宽径,并绘制生长曲线。当对照组体积达到200 mm~3时,照射组和联合组,给予一次性照射6Gy射线,当对照组体积达到1000 mm~3时,将裸鼠进行麻醉,剥出皮下移植瘤,进行称量和保存,并计算抑瘤率。结果:两细胞系经过二甲双胍处理后,经2、4、6、8Gy照射后存活分数明显低于未处理组(P0.01),随着照射剂量的增大,克隆形成数量明显减少,两个细胞系经二甲双胍处理后进行照射,其SF2、D0,N值均较未处理组明显减少(P0.01),表明经二甲双胍处理后,Bx PC-3细胞和As PC-1细胞的放射敏感性增强,增敏比分别为1.2368和1.1179。二甲双胍和放射联合处理组的体积、瘤重均明显小于对照组和单独处理组,Bx PC-3和As PC-1移植瘤的抑瘤率分别为62.14%、61.53%,均明显高于各自单独处理组(P0.01或P0.05)。结论:二甲双胍能够增强胰腺癌的放疗敏感性,在临床上具有潜在的应用价值。     

RNAi沉默SDF-1基因对人胃癌裸鼠原位移植瘤生物学行为的影响及机制

目的:探讨RNAi技术沉默基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)对人胃癌裸鼠原位移植瘤生物学行为的影响及可能机制。方法:利用RNAi-SDF-1细胞及对照组细胞建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤,Western Blot检测裸鼠皮下移植瘤SDF-1蛋白表达情况。利用裸鼠皮下移植瘤建立其原位移植瘤模型,8周后处死裸鼠解剖尸体,检测原位移植瘤生长、凋亡及远处脏器转移情况。Western Blot检测SDF-1沉默对通路蛋白Akt、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB以及侵袭转移相关基因E-cadherin、MMP-7表达的影响。结果:成功建立RNAi-SDF-1裸鼠原位移植瘤模型。与空白及阴性对照组比较,RNAi-SDF-1组裸鼠原位移植瘤生长缓慢,体积与质量均明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,RNAi-SDF-1组肿瘤细胞凋亡率明显高于空白及阴性对照组(P0.01)。尸体解剖结果显示,RNAi-SDF-1组肿瘤腹腔淋巴结及肝脏转移率明显低于空白及阴性对照组(P0.05)。Western Blot结果显示,与空白及阴性对照组比较,RNAi-SDF-1组肿瘤组织中Akt、p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、MMP-7表达水平明显降低,E-cadherin表达水平明显升高(P0.01)。结论:RNAi-SDF-1能够有效抑制人胃癌SGC7901细胞裸鼠原位移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制其腹腔淋巴结、肝脏转移,其机制可能与抑制PI3K-Akt、NF-κB信号通路及MMP-7的表达并上调E-cadherin的表达相关。     

顺铂联合鸦胆子油乳对人卵巢癌裸鼠原位移植瘤生长的影响

目的:探讨鸦胆子油乳以及联合顺铂对人卵巢癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。方法:构建人卵巢癌裸鼠原位移植瘤模型,随机分为对照组、鸦胆子油乳组、顺铂组和鸦胆子油乳顺铂联合组等4组,每组8只,观察各组裸鼠移植瘤体积、重量、抑瘤率及相对肿瘤增值率(T/C)的变化,检测裸鼠外周血白细胞、血小板数目及血清谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、血肌酐(CR)的变化。结果:鸦胆子油乳组、顺铂组、联合组均可有效遏制肿瘤细胞生长,各组的抑瘤率分别为23.56%±3.67%、42.57%±3.45%和48.36%±3.08%;各组的肿瘤体积和T/C明显下降,T/C均低于60%,且与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,鸦胆子油乳组治疗后裸鼠LDH、CR值差异显著(P0.01),顺铂组与联合组ALT、LDH、CR值差异有统计学意义(P0.01);与对照组比较,鸦胆子油乳组白细胞数差异显著(P0.05),而顺铂组、联合组血小板、白细胞数量均明显减少,且差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:顺铂联合鸦胆子油乳可以抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长,鸦胆子油乳相对于顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠白细胞及血小板、肝肾功能影响较小,具有低毒作用。     

Cx43 与Smo 基因在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究细胞间隙连接蛋白43(Cx43)与信号通路基因Smoothened(Smo)在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法:选择从2013年1月~2015年12月在医院接受手术治疗的胰腺癌患者53例切除组织及与癌组织相配对的3cm外癌旁组织,对比不同胰腺组织中Cx43与Smo阳性表达率,及Cx43 m RNA与Smo m RNA表达水平,分析胰腺癌组织中Cx43和Smo表达与胰腺癌的病理特征之间的关系及两者的相关性。结果:胰腺癌组织中Cx43的阳性表达率及Cx43 m RNA表达水平明显低于在癌旁组织,而Smo的阳性表达率及Smo m RNA表达水平明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P0.05)。胰腺癌患者组织学分级为Ⅲ级、有淋巴结转移者的Cx43 m RNA表达水平分别明显低于Ⅰ~Ⅱ级、无淋巴结转移者,Smo m RNA表达水平则明显高于Ⅰ~Ⅱ级、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(均P0.05)。Pearson相关性分析结果发现,胰腺癌组织中Cx43 m RNA和Smo m RNA表达呈负相关关系(r=-0.846,P=0.000)。结论:Cx43 m RNA在胰腺癌中的表达下降,而Smo m RNA则表达上调,临床监测Cx43及Smo基因的表达情况,有助于评价患者的病情与预后。     

顺铂短期诱导人腺样囊性癌细胞NACC 产生耐药性的研究

目的:探讨人腭部涎腺腺样囊性癌细胞(NACC)经顺铂(DDP)短期诱导后耐药性产生情况及耐药机制。方法:采用恒定浓度DDP反复间歇诱导法诱导NACC细胞,获得耐药细胞NACC/DDP3,MTT法检测细胞耐药指数;实时荧光定量PCR检测存活蛋白(Survivin)及核苷酸切除修复交叉互补基因1(ERCC1)的mRNA表达;裸鼠右侧腋部皮下接种NACC及NACC/DDP3细胞,成瘤后将荷瘤裸鼠随机分为生理盐水对照组和DDP 2 mg·kg~(-1)组,比较2 mg·kg~(-1) DDP对两组荷瘤裸鼠的抑瘤率,HE染色观察肿瘤组织形态。结果:诱导后的NACC/DDP3对DDP耐药性增强,耐药指数为1.44;在NACC/DDP3细胞中,Survivin及ERCC1的mRNA表达明显上调,分别为亲本细胞的2.02(P0.01)和1.59(P0.05)倍;2 mg·kg~(-1) DDP对NACC组抑瘤率为(31.64±1.15)%,对NACC/DDP3组抑瘤率为(16.66±0.76)%,两组间差异具有统计学意义(P0.01),HE染色观察两组瘤体标本均符合腺样囊性癌实体型组织学表现。结论:NACC细胞经DDP短期诱导即产生一定耐药性,NACC/DDP3细胞中Survivin及ERCC1的mRNA表达上调,提示Survivin及ERCC1可能参与了腺样囊性癌细胞对DDP的耐药。相同剂量DDP对NACC/DDP3所建立的皮下移植瘤模型抑瘤率显著低于NACC组,提示NACC/DDP3接种到裸鼠体内仍具有耐药性,这将为体内研究耐药腺样囊性癌的治疗提供良好的平台。     

7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究7-二氟甲氧基-5,4'-二正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octylygenistein,DFOG)对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠皮下移植瘤,随机分为5组,每组5只,即生理盐水组(Saline),紫杉醇组(TAX),DFOG此处为3组(5、10、20 mg/kg)组,观察各组移植瘤的体积和重量变化,观察各组荷瘤裸鼠重量及其血清乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐值(Cr)、外周血白细胞计数(WBC)的变化。FCM检测移植瘤组织细胞的凋亡率,Western blot检测移植瘤组织细胞cortactin蛋白的表达变化。结果:DFOG各组显著抑制人卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长,与Saline组比较,移植瘤体积明显减小(P均0.05),其中DFOG10mg/kg组对移植瘤抑制率与TAX组相当(P0.05);与Saline组比较,DFOG各组移植瘤重量明显减轻(P均0.05),其中DFOG10mg/kg组对移植瘤重量减少率与TAX组相当(P0.05)。与Saline组及DFOG各组比较,TAX组荷瘤裸鼠重量显著降低(P均0.05),而Saline组和DFOG各组之间荷瘤裸鼠重量比较差异无统计学意义(P0.05);与Saline组及DFOG各组比较,TAX组荷瘤裸鼠血清LDH、ALT、Cr值和外周血WBC计数显著降低(P均0.05),而Saline组与DFOG各组比较,荷瘤裸鼠血清LDH、ALT、Cr值和外周血WBC计数无明显差异(P0.05)。DFOG各组作用HO-8910细胞移植瘤16 d后,HO-8910细胞发生凋亡,与Saline组比较(P均0.05),其中DFOG10 mg/kg组凋亡率与TAX组相当(P0.05);同时cortactin蛋白表达降低,与Saline组比较(P均0.05),其中DFOG10 mg/kg组凋亡率与TAX组相当(P0.05)。结论:DFOG能抑制卵巢癌HO-8910细胞裸鼠移植瘤生长,下调cortactin蛋白表达和诱导HO-8910细胞凋亡。     

EGCG对Tca8113细胞移植瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用研究

为了探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对Tca8113鳞状细胞癌细胞移植裸鼠肿瘤的抑制作用及其机制。本研究选取采用Tca8113鳞状细胞癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型48只,采用随机数字表法分为空白组(等量生理盐水灌胃)、低剂量组(ECGC 10 mg/kg灌胃)、中剂量组(ECGC 20 mg/kg灌胃)、高剂量组(ECGC 40 mg/kg灌胃)各12只,连续灌胃治疗16 d,测量各组小鼠肿瘤重量及体积、计算抑瘤率,采用流式细胞仪技术测定各组瘤体组织中细胞生长周期的分布,采用免疫组化染色技术测定各组肿瘤组织中Caspase8、Caspase3、Ki-67蛋白的表达。研究显示,低剂量组、中剂量组和高剂量组的瘤体质量和体积均显著的小于空白组(p0.05),且随着EGCG剂量的加大,裸鼠移植瘤体积和质量逐渐减小,而抑瘤率显著增加(p0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组的G0/G1期细胞比例显著高于空白组(p0.05),而S期及G2/M期细胞比例显著降低(p0.05);随着EGCG剂量的增加,各组G0/G1期细胞比例显著增加,而S期及G2/M期细胞比例显著降低(p0.05);低剂量组、中剂量组和高剂量组的肿瘤组织中Caspase8和Caspase3表达显著高于空白组(p0.05),而Ki-67蛋白表达显著低于空白组(p0.05);随着EGCG剂量的增加,各组肿瘤组织中Caspase8和Caspase3蛋白表达显著增加,而Ki-67显著降低(p0.05)。EGCG对Tca8113鳞状细胞癌细胞移植裸鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用,其机制可能是通过调节细胞周期及Caspase8、Caspase3和Ki-67蛋白的表达来实现。     

宫颈鳞癌演进过程P16INK4a及Hh-Gli信号通路相关蛋白表达及其相关性研究

探讨P16^INK4a及Sonic hedgehog(Hh-Gli)信号通路蛋白在宫颈癌及癌前病变(CIN)中的表达相关性及其意义．采用Western-blot方法检测HPV16阳性及HPV18阳性宫颈癌细胞系P16^INK4a及Hh-Gli信号通路蛋白Smo、Ptch及Gli表达．免疫组化检测组织芯片P16^INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli表达,包括20例正常宫颈、18例癌旁组织、54例CIN及28例宫颈鳞癌组织．分析P16^INK4a与Hh-Gli信号通路蛋白间表达相关性及与临床病理因素的关系．结果显示P16^INK4a、Smo、Ptch及Gli蛋白在HPV16及HPV18阳性宫颈癌细胞系中表达无显著差异(P>0.05)．P16^INK4a、Shh、Smo、Ptch及Gli蛋白在宫颈癌中表达强度显著高于癌旁及正常组织(P<0.05),在CINⅠ与正常组织间差异不显著(P>0.05)．P16^INK4a、Shh、Smo及Gli蛋白,在CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ之间均有显著性差异(P<0.05)．相关分析显示,CINⅡ-CINⅢ中P16^INK4a与Shh和Smo蛋白表达正相关,浸润癌中P16^INK4a与Shh、Smo和Gli蛋白正相关．结论认为,P16^INK4a及Hh-Gli信号通路异常激活与宫颈癌发生及演进密切相关,且二者间具有相关性．Hh-Gli信号通路的激活可能是Shh配体增高调控Smo高表达而上调Gli蛋白所致．     

Near Infra-Red Photoimmunotherapy with Anti-CEA-IR700 Results in Extensive Tumor Lysis and a Significant Decrease in Tumor Burden in Orthotopic Mouse Models of Pancreatic Cancer

Photoimmunotherapy (PIT) of cancer utilizes tumor-specific monoclonal antibodies conjugated to a photosensitizer phthalocyanine dye IR700 which becomes cytotoxic upon irradiation with near infrared light. In this study, we aimed to evaluate the efficacy of PIT on human pancreatic cancer cells in vitro and in vivo in an orthotopic nude mouse model. The binding capacity of anti-CEA antibody to BxPC-3 human pancreatic cancer cells was determined by FACS analysis. An in vitro cytotoxicity assay was used to determine cell death following treatment with PIT. For in vivo determination of PIT efficacy, nude mice were orthotopically implanted with BxPC-3 pancreatic tumors expressing green fluorescent protein (GFP). After tumor engraftment, the mice were divided into two groups: (1) treatment with anti-CEA-IR700 + 690 nm laser and (2) treatment with 690 nm laser only. Anti-CEA-IR700 (100 μg) was administered to group (1) via tail vein injection 24 hours prior to therapy. Tumors were then surgically exposed and treated with phototherapy at an intensity of 150 mW/cm² for 30 minutes. Whole body imaging was done subsequently for 5 weeks using an OV-100 small animal imaging system. Anti-CEA-IR700 antibody bound to the BxPC3 cells to a high degree as shown by FACS analysis. Anti-CEA-IR700 caused extensive cancer cell killing after light activation compared to control cells in cytotoxicity assays. In the orthotopic models of pancreatic cancer, the anti-CEA-IR700 group had significantly smaller tumors than the control after 5 weeks (p<0.001). There was no significant difference in the body weights of mice in the anti-CEA-IR700 and control groups indicating that PIT was well tolerated by the mice.     

miR-21在疤痕形成中的作用及其机制研究

目的:探究mi R-21在疤痕形成中的作用及其相关机制。方法:选取2016年3月-2017年8月在本院就诊的20例皮肤有疤痕患者,采集患者的正常皮肤组织(正常组)、疤痕组织(疤痕组),进行成纤维细胞的分离培养,比较正常组、疤痕组mi R-21与Smad-7的m RNA表达水平,并在疤痕组织加入mi R-21抑制剂(抑制组),比较三组成纤维细胞增殖情况、蛋白表达及磷酸化水平。结果:正常组中Smad-7的m RNA表达水平显著高于疤痕组,而mi R-21的m RNA水平显著低于疤痕组,差异均有统计学意义(P0.05)。细胞培养48 h和72 h时,疤痕组成纤维细胞增殖水平明显高于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05),而抑制组和正常组成纤维细胞增殖水平比较差异无统计学意义(P0.05)。疤痕组成纤维细胞Smad-7蛋白表达低于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05),疤痕组成纤维细胞Smad-2、Smad-3蛋白表达及磷酸化水平均高于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:疤痕组织中mi R-21通过负调控Smad-7的表达,从而引起Smad-2与Smad-3蛋白表达发生变化,使得疤痕成纤维细胞的增殖水平明显增高,最终促成疤痕的形成。     

红景天苷调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠的肝脏损伤的影响

摘要 目的：探讨红景天苷（Sal）调节单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/Unc51样激酶1（ULK1）信号通路对结肠癌SW480细胞裸鼠肝脏损伤的影响。方法：通过皮下注射SW480细胞悬浮液建立肝转移裸鼠模型,将造模后的裸鼠随机分为模型组、Sal低剂量（Sal-L,50 mg/kg Sal）组、Sal中剂量（Sal-M,100 mg/kg Sal）组、Sal高剂量（Sal-H,200 mg/kg Sal）组,Sal-H+AMPK抑制剂（Compound C,200 mg/kg Sal+10 mg/kg Compound C）组,以未接种SW480细胞悬液的裸鼠作为对照组。腹部主动脉取血,检测裸鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（AST）、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）水平;处死裸鼠,检测肝转移瘤数目及肝脏重量;HE染色观察肝脏组织病理变化;qRT-PCR检测肝脏组织中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA表达水平;Western blot检测肝脏组织中自噬（Beclin1、p62）蛋白及通路相关蛋白表达。结果：与对照组相比,模型组裸鼠组织中出现肝转移瘤,肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组相比,Sal-L、Sal-M、Sal-H组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著降低（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著增加（P<0.05）;与Sal-H组相比,Sal-H+Compound C组肝转移瘤数目、肝脏重量、AST、ALT水平、mTORmRNA、ULK1 mRNA、p62表达显著增加（P<0.05）;Beclin1、AMPK mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：Sal可通过减少裸鼠肝转移瘤形成,保护裸鼠肝脏,其机制可能与激活AMPK/mTOR/ULK1信号通路,促进肝脏自噬有关。     

A Functional and Putative Physiological Role of Calcitriol in Patched1/Smoothened Interaction

The Patched1 (Ptch)-mediated inhibition of Smoothened (Smo) is still an open question. However, a direct Ptch/Smo interaction has been excluded, Smo modulators were identified, but the endogenous signal transmitting molecule remains undiscovered. Here, we demonstrate that calcitriol, the hormonally active form of vitamin D₃, is an excellent candidate for transmission of Ptch/Smo interaction. Our study reveals that Ptch expression is sufficient to release calcitriol from the cell and that calcitriol inhibits Smo action and ciliary translocation by acting on a site distinct from the 7-transmembrane domain or the cysteine-rich domain. Moreover calcitriol strongly synergizes with itraconazole (ITZ) in Smo inhibition, which did not result from elevated calcitriol bioavailability due to ITZ-mediated 24-hydroxylase inhibition but rather from a direct interaction of the compounds at the level of Smo. Together, we suggest that calcitriol represents a possible endogenous transmitter of Ptch/Smo interaction. Moreover calcitriol or calcitriol derivatives combined with ITZ might be a treatment option of Hedgehog-associated cancers.     

rAAV-shRNA-CDK2对肝癌人肝癌裸鼠血液系统的影响

目的:探讨新型基因药物rAAV-shRNA-CDK2对人肝癌裸鼠血液系统的影响,评估其安全性。方法:采用皮下接种人肝癌Hep G2细胞构建荷瘤裸鼠,10天后将其随机分为3组:肿瘤组、NC组及rAAV-shRNA-CDK2组,每组雌雄裸鼠各6只。通过尾静脉注射定量给药,15天后取眼球血并处死裸鼠。检测血常规指标和骨髓细胞周期。结果:所有裸鼠平均血小板体积略高于该周龄鼠的正常值范围,但各组间比较差异无统计学意义(P0.05);肿瘤组雌性裸鼠的中性粒细胞百分比显著高于rAAV-shRNA-CDK2组,而淋巴细胞百分比明显低于rAAV-shRNA-CDK2组(P0.05),但指标数值均在正常值范围内。各组雄性裸鼠骨髓细胞周期分布比较差异均无统计学意义(P0.05),而肿瘤组雌性裸鼠骨髓细胞G2/M期比例明显高于rAAV-shRNA-CDK2(P0.05),但两组其他周期骨髓细胞比例比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:rAAV--shRNA-CDK2并未对人肝癌裸鼠血液系统产生不良影响。     

In vitro and in vivo induction of apoptosis by capsaicin in pancreatic cancer cells is mediated through ROS generation and mitochondrial death pathway

Pancreatic cancer is one of the most common invasive malignancies and the fourth leading cause of cancer related mortality in U.S., thus developing new strategies to control pancreatic cancer is an important mission. We investigated the mechanism of capsaicin, the major pungent ingredient of red-chili pepper, in inducing apoptosis in pancreatic cancer cells. Treatment of AsPC-1 and BxPC-3 cells with capsaicin resulted in a dose-dependent inhibition of cell-viability and induction of apoptosis which was associated with the generation of ROS and persistent disruption of mitochondrial membrane potential. These effects were significantly blocked when the cells were pretreated with a general antioxidant N-acetyl cysteine (NAC). Exposure of AsPC-1 and BxPC-3 cells to capsaicin was also associated with increased expression of Bax, down-regulation of bcl-2, survivin and significant release of cytochrome c and AIF in the cytosol. On the contrary, above-mentioned effects were not observed in the normal acinar cells in response to capsaicin-treatment. Capsaicin-treatment resulted in the activation of JNK and JNK inhibitor SP600125 afforded protection against capsaicin-induced apoptosis. Furthermore, capsaicin when given orally markedly suppressed the growth of AsPC-1 pancreatic tumor xenografts in athymic nude mice, without side effects. Tumors from capsaicin treated mice demonstrated increased apoptosis, which was related to the activation of JNK and increased cytosolic protein expression of Bax, cytochrome c, AIF and cleaved caspase-3, as compared with controls. Taken together, these results show that capsaicin is an effective inhibitor of in vitro and in vivo growth of pancreatic cancer cells. These findings provide the rationale for further clinical investigation of capsaicin against pancreatic cancer. Ruifen Zhang and Ian Humphreys contributed equally to this work.     

不同剂量朱砂七总蒽醌对H22荷瘤小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响

目的:探讨不同剂量朱砂七总蒽醌对H22荷瘤小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响。方法:选取清洁级昆明小鼠60只,按照随机数字表法分为正常对照组、H22荷瘤组、环磷酰胺组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各10只。除正常对照组外,其余5组小鼠建立H22荷瘤小鼠模型。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予0.3 g/kg、0.6 g/kg、1.2 g/kg的朱砂七总蒽醌悬浊液干预,环磷酰胺组给予0.02 g/kg的环磷酰胺干预,正常对照组和H22荷瘤组给予等剂量的1%的羧甲基纤维素钠干预。比较各组小鼠的肿瘤体质量、抑瘤率、T淋巴细胞亚群以及血清超氧化歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果:环磷酰胺组、高剂量组的肿瘤体质量低于低剂量组,抑瘤率高于低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05)。高剂量组的CD4+、CD4+/CD8+均高于环磷酰胺组、低剂量组、中剂量组,CD8+低于环磷酰胺组、低剂量组、中剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。高剂量组血清SOD、GSH-Px水平高于其他5组,MDA、LDH水平低于H22荷瘤组、低剂量组、中剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:朱砂七总蒽醌具有明显的抗肿瘤作用,可增强小鼠的免疫功能和抗氧化能力,且具有剂量效应。