一株家蚕异型微孢子虫感染特征和分类地位

【背景】家蚕微粒子病是一种对蚕业生产危害巨大的蚕病,该病病原是蚕种生产唯一检疫对象,而家蚕病原性微孢子虫种类多、来源复杂,给蚕种生产微粒子病的防控增加了难度。【目的】研究一株从蚕种检疫样品中分离的微孢子虫(命名为GXM15)的致病性和分类地位,鉴定并分析其来源,完善家蚕病原性微孢子虫分类和数据库,为蚕种生产控制家蚕微粒子病提供参考依据。【方法】采用生物试验方法测定GXM15微孢子虫对家蚕的半数感染浓度(IC50)和胚种传染率;显微镜观察GXM15微孢子虫孢子形态,利用透射电子显微镜观察GXM15微孢子虫的超微结构;采用PCR扩增、T克隆和测序获得GXM15微孢子虫的SSU rRNA基因和ITS片段DNA序列,并利用MEGA 5.0和DNAstar软件构建GXM15微孢子虫的系统发育树和遗传距离分析。【结果】GXM15微孢子虫对家蚕的IC50为8.29×104个/mL,是家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的2.28倍;GXM15微孢子虫对家蚕的胚种传染率为3.6%,明显低于Nb;GXM15微孢子虫形态呈短卵圆形,大小为(2.05±0.20)× (3.25±0.30) μm,GXM15微孢子虫体积是Nb微孢子虫的2.19倍;GXM15微孢子虫超微结构具双核,极丝13圈,极丝倾斜角约45°,符合Nosema属的特征;GXM15微孢子虫SSU rRNA基因在系统发育树中位于Nosema属分支中,遗传距离分析表明GXM15微孢子虫与Nb同属异种,是一株新微孢子虫。【结论】GXM15微孢子虫是一株家蚕病原性微孢子虫,根据GXM15微孢子虫致病性和分类地位研究,可以为蚕种生产防控家蚕微粒子病提供参考依据。     

家蚕微粒子病母蛾序贯抽样检验方法研究

本文根据统计学理论,设计了一套家蚕微粒子病母蛾序贯抽样检验方案,用此方案进行的抽样检验,不仅保证了将不合格蚕种判为合格蚕种的概率控制在1.5％以内,而且大大减少了将合格蚕种判为不合格蚕种的概率．并且镜检蛾数一般随总体病蛾率ρ而变化。当ρ较低或较高（相对于0.5％）时,需检验的数量就较少.本方案的实际检验工作量并未比现行检验方案有明显增加.     

基于EB1基因的环介导等温扩增（LAMP）法检测感染家蚕微粒子病的蚕卵

【目的】家蚕 Bombyx mori 微粒子病一直影响着蚕种业的健康发展,快速而准确地检测出寄生于蚕卵中的家蚕微孢子虫 Nosema bombycis 对于有效控制家蚕微粒子病危害意义重大。【方法】环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）法是一种快速、灵敏、特异的DNA体外恒温扩增方法,本文基于LAMP检测法的原理,依据家蚕微孢子虫孢子繁殖复制相关的 EB1 基因（GenBank登录号：KF421134.1）设计LAMP引物,对LAMP反应体系的最佳反应温度、内外引物浓度比、检测反应的特异性、灵敏度等进行研究,建立了一种检测蚕卵感染家蚕微粒子病的LAMP检测方法。【结果】结果表明,基于EB1 基因建立的LAMP检测方法在63℃恒温下在1.5 h内就可完成对样品的有效检测,本LAMP法对家蚕微孢子虫孢子DNA的检测灵敏度为5.0×10^-3 ng/μL,对EB1-pMD^TM19-T质粒标准品的检测灵敏度为1.0×10² copies/μL,同时对人工感染家蚕微粒子病单个母蛾产下蚕卵的1/8卵圈量或1粒蚕卵均能检出阳性结果。上述结果都分别应用凝胶电泳法、恒温荧光检测仪以及SYBR GreenⅠ显色肉眼观察法得到同步判定。【结论】本研究建立的基于EB1基因LAMP法可用于蚕卵微粒子病的检测,LAMP法为蚕种质量检验及成品卵微粒子病现场检疫提供了新技术。     

不同消毒方法对家蚕微粒子的存活和侵染力影响

家蚕微粒子病是家蚕Bombyx mori的重要病害,探索其消毒杀灭方法对蚕业生产具有重要意义。本研究采用微粒子染色法和添食家蚕侵染法测试了温度、紫外线和消毒剂处理108个/mL家蚕微粒子后对家蚕微粒子的消杀作用,结果表明：温度对家蚕微粒子虫灭活温度为60℃处理30 min以上;使用20 wx功率紫外灯距离50 cm照射12 min及以上时,微粒子死亡率为47.70%,对家蚕侵染率为0;三氯异氰脲酸800 mg/L及以上浓度处理6 min以上家蚕微粒子死亡率为100%,对家蚕的侵染率为0;戊二醛癸甲溴铵200 mg/L及以上浓度处理6 min以上家蚕微粒子死亡率为100%,对家蚕的侵染率为0。3种消毒方法中温度法主要用于小型蚕具消杀微粒子;紫外线用于蚕业辅助设施的表面微粒子的消杀;三氯异氰脲酸和戊二醛癸甲溴铵均表现出较好的消杀效果,其中戊二醛癸甲溴铵较含氯的消毒剂三氯异氰脲酸稳定性强,刺激性小,对养蚕的金属腐蚀性小,可作为含氯消毒剂的部分替代使用。本研究结果可为蚕业生产中消杀微粒子提供参考。     

怎样做好蚕种的补催青

我国蚕桑生产有了很大发展,各地都推广了新的良种。目前生产上一般将蚕种催青至转青卵发种。蚕卵转青以后,对不良环境的抵抗力弱,如果处理失当,蚕种就要孵化不齐,增加死卵,给收蚁工作增加困难,对蚕茧丰产也有一定的影响。因此,蚕种发到生产队以后,做好蚕种的补催青工作,是不可忽视的问题。 怎样做好蚕种的补催青呢?根据各地的经验,在领种前一天,共育室就要加温,到傍晚要保持在华氏70度左右,干湿差4度。蚕种领回以后,将温度由70度逐渐开高,要求每小时升高2度,升到78度为止,干湿差3度。应用炕床饲养小蚕的生产队,最好将蚕种保护在炕床内,便于调节温、湿度。     

读者来信

编辑同志: 我看了1958年4月号“生物学通报”上“家蚕的病害”一文。其中谈到微粒子病,文中只谈到预防方法,究竟发病后怎样治疗并未涉及。我在初中与高中时都喂过蚕(家蚕),有一次,蚕将大眠的时候突然生病了,病状和生物学通报上谈的相同。但当时我并不知道是微粒子病。我的老祖母告诉我一个方法:就是利用刚从栢树上折下来的     

家蚕产卵量与若干因子的相关分析

蚕种的有效保存期约1年,超过1年则不能使用,因此,蚕种生产的计划性很强。过多的蚕种要烧毁,造成浪费;过少则不能满足需要。而且蚕种生产分原原母种、原原种、原种、杂交种4个级别,每级的制种量对下级都有影响,可见蚕种生产的计划性之强,计划的难度之大。目前,制种单位主要是靠实践经验,用克蚁制种量来估算制种量,这种方法虽简单易行,但精确度不高。本试验用熟蚕体重,茧重,蛹重3个因于与产卵量进行回归分析,建立回归方程,并进行回测,取得较好效果,现报告如下,供制种单位参考。1材料与方法1995春由湖北蚕种场购得代号为895…     

柞蚕微孢子虫孢子分离纯化方法

柞蚕微粒子病是柞蚕Antheraea pernyi(Guérin-Méneville)的主要胚胎传染性病害,病原为柞蚕微孢子虫Nosema pernyi(Wenet Ding),其病原分离提纯技术研究对于柞蚕微粒子病的防治具有重要意义。本文利用差速离心和Percoll密度梯度离心法研究了柞蚕微孢子虫孢子的分离纯化方法,结果表明,采用不连续密度梯度分离纯化柞蚕微孢子虫孢子的效果比单一浓度的效果好,以浓度为25%、50%、75%、100%不连续梯度,15000r/min离心30min分离纯化得到的柞蚕微孢子虫孢子纯净度高。     

利用纳米孔测序鉴定蓖麻蚕病害

蓖麻蚕Samia ricini为大蚕蛾科樗蚕属的绢丝与食用的非滞育型经济昆虫,且是少数可以室内大量圈养的绢丝昆虫,全年可累代饲养.在蓖麻蚕室内大批量圈养的生产过程可能遭受毁灭性病害的侵害,包括蓖麻蚕微粒子病、脓病、软化病等,且随着累代对病原物的不停积累蚕病会呈现愈发严重的趋势,病原愈发难以清除.因此,对蚕病的监测是防控蚕病爆发的重要手段之一.掌上纳米孔测序仪MinION是一款便携式高通量测序平台,便于实地进行DNA测序并对病原物进行检测.本文通过MinION测序仪对蓖麻蚕病蚕DNA进行测序,并对未知病原物DNA序列进行分析,探讨了利用MinION测序仪鉴定蓖麻蚕病原的可行性,对蚕病的监测提供了保障.     

柞蚕微粒子病潜在生物标志物的挖掘

【目的】挖掘柞蚕Antheraea pernyi微粒子病的潜在生物标志物,为开发该病害检测方法及研究柞蚕被微孢子虫Nosema pernyi侵染后体内代谢产物的差异及功能奠定基础。【方法】利用高效液相色谱和高分辨率质谱进行非靶向代谢组学分析,调查健康和患微粒子病柞蚕雌成虫血淋巴中代谢物差异。【结果】正离子模式下从健康和患微粒子病柞蚕雌成虫血淋巴中共获得8 870个代谢物,注释代谢物5 390个,筛选到差异表达代谢物472个(上调260个,下调212个),其中二级鉴定差异表达代谢物12个(上调8个,下调4个);负离子模式下获得6 716个代谢物,注释代谢物3 848个,筛选到差异表达代谢物301个(上调207个,下调94个),其中二级鉴定差异表达代谢物9个(上调8个,下调1个)。正离子模式下二级鉴定的差异表达代谢物包括缬氨酸(valine)、苯并噻唑(benzothiazole)、3-脱羟基肉碱(3-dehydroxycarnitine)、1 甲基鸟嘌呤(1-methylguanine)、2-乙氧基萘(2-ethoxynaphthalene)、N6-乙酰基-L-赖氨酸(N6-acetyl-L-lysine)、生物素(biotin)、桑色素(morin)、噻吗洛尔(timolol)、酰基肉碱15∶0(acylcarnitine 15∶0)、酰基肉碱18∶4(acylcarnitine 18∶4)和异槲皮苷(isoquercitrin);负离子模式下二级鉴定的差异表达代谢物包括二甲基丙二酸(dimethylmalonic acid)、戊二酸(glutaric acid)、2,5-二羟基苯甲酸(2,5-dihydroxybenzoic acid)、1,3-二乙酰基丙烷(1,3-diacetylpropane)、3-(4-羟基苯基)乳酸(DL-p-hydroxyphenyllactic acid)、泛酸(pantothenate)、荧光素(fluorescein)、飞燕草素-3-O-beta-吡喃葡萄糖苷(delphinidin-3-O-beta-glucopyranoside)和溶血磷酯酰肌醇16∶1 (lysoPI 16∶1)。【结论】健康与患柞蚕微粒子病的柞蚕雌成虫血淋巴内代谢物具有显著差异,通过代谢组学挖掘出21个二级鉴定的差异表达代谢物,这些代谢物可作为潜在生物标志物用于开发柞蚕微粒子病的检测方法。     

亚蝗微粒子虫新种记述（微孢子门：微粒子科）

本文记述寄生于亚洲小车蝗的一种微粒子虫一新种,亚蝗微粒子虫;描述了其光镜和电镜形态特征及寄生习性。     

家蚕的病害

Ⅰ.蚕病的种类和病征家蚕的病害很多,有真菌、细菌、病毒、原虫、昆虫等的病害,在全国各个养蚕地区,每年都有或多或少的蚕病发生,夏秋蚕期更为普遍而严重,直接的影响蚕茧产量和生产成本,为了保证蚕茧丰收和提高生丝原料、茧的质量,因此对于各种蚕病的预防及发生蚕病后应进行的技术处理和药剂防治等方面的认识,更显得需要和迫切,现就发生较普遍的白僵病、软化病、脓病、微粒子病、蝇蛆病等主要蚕病的病征和预防方法,作一般性的介绍:     

我国古代养蚕技术上的一项重要发明——人工低温催青制取生种

根据郑辑之《永嘉郡记》(公元四世纪)记载,永嘉地区(即今浙江温州一带)一年能养八批蚕。当时人民已经发现用低温催青蚕卵,有利于产生不滞育卵。为了能在一年四季里分批多次养蚕,创造采用低温催青办法以不断获得产不越年卵的蚕。同时还从蚕丝产量看到养越年化蚕比养不越年化蚕更为有利。所以又利用各代不越年化蚕所产的卵,在自然高温下孵化,以获得各代越年化蚕作为蚕丝生产主要蚕种。这样既解决多次养蛋的蚕种问题,同时又尽可能达到较好的蚕丝生产目的。这是我国古代养蚕技术上的一项重要发明,它充分反映了我国古代人民的勤劳与智慧。     

真鲷仔鱼用微粒子饲料中肽酶与大豆卵磷脂添加效果的研究

本研究以酪蛋白分解物为蛋白源配制三种微粒子饲料MD-S、MD-T和MD-U对真鲷开口仔鱼进行饲养试验。以MD-S的配方为基准,MD-T采用粉状大豆卵磷脂和麸质代替液状大豆卵磷脂;MD-U则另外添加0.1%的肽酶。结果表明,微粒子饲料在水中浸泡15min后,MD-T的溶出率(35.5%)低于MD-S(46.8%)和MD-U(45.8%);实验结束时(20日龄),仔鱼的成活率以生物饵料(轮虫)组为最高(86.3%),其次是MD-T组为20.7%,显著高于(P<0.05)MD-S组(13.3%)和MD-U组(13.6%);生物饵料组的仔鱼全长(6.14±0.49mm)显著大于微粒子饲料组(4.23±0.30mm~4.46±0.30mm),各微粒子饲料组之间仔鱼的全长并不存在显著差异(P>0.05)。在孵化后第12d,微粒子饲料组的仔鱼肠上皮细胞发育良好,但至孵化后第18d,仔鱼肠上皮细胞大部分萎缩、并发生脱落。鱼体的蛋白质、DNA与RNA日间增长率微粒子饲料MD-T组高于MD-S和MD-U组,但都低于生物饵料组。由此可见,微粒子饲料中添加肽酶并无助真鲷仔鱼对其消化吸收;可是,使用粉状大豆卵磷脂与麸质代替液状卵磷脂能增强微粒子饲料的黏合性,可减少其营养成分的溶出率,从而提高微粒子饲料的饲育效果。     

用磁性细菌培养生产具有机能的磁性体

日本东京农工大学工学部教授忪永是等在磁性细菌所具有的磁性微粒子的表面表达重组蛋白获得成功。如能表达抗体和酶等蛋白,就能用发酵法直接生产具有机能的磁性体。可用于识别目的物质且可用磁力分离机能性材料,扩大了其应用范围。将于11月底在神户市召开的日本生物工程学会上发表该项成果。 松永等用光度计确认了将荧光素酶基因作为模型基因导入磁性细菌后,发现磁性微粒子表面有荧光素酶活性。目前该氏使用转座子,得到磁性细菌参与整合铁的过程的基因magA。实验表明,这种magA基     

龙眼裳卷蛾微粒子虫的发现和对家蚕的影响

龙眼裳卷蛾ＣｅｒａｃｅｓｔｉｐａｔａｎａＷａｌｋｅｒ患微粒子病和该病原对家蚕有感染性、致病性在国内外尚未见到研究报道。国内除《中国森林昆虫》［１］中有龙眼裳卷蛾记述外,国际检索仅查到尼泊尔记录卷蛾总科中有一新亚种Ｃｅｒａｃｅｓｔｉｐａｔａｎａｎｅｐａ...     

家蚕微粒子病原虫(Nosema bombycis)小亚基核糖体RNA全基因的克隆及其二级结构的构建

在用PCR技术扩增、克隆、测序了家蚕微粒子病原虫Nosema bombycis (镇江株)小亚基核糖体RNA基因核心序列(5'-端起1 200 bp)的基础上,用SSP-PCR技术克隆了核心序列3'-端下游序列,从而获得了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA基因的全序列共1 233 bp。 用RnaViz 、Forcon、DCSE等生物软件构建了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA的二级结构,与其它微孢子虫及真核生物小亚基核糖体RNA的二级结构相比,该二级结构缺乏螺旋10、E10-1、11、18、E23-n和43。     

微粒子虫属二新种(微孢子门:微粒子科)

1982年我们从广西、贵州等地稻纵卷叶螟体内曾检出微孢子虫孢子,近年对这种微孢子虫进行了研究,发现是一种新的微粒子虫。我国玉米螟微粒子虫曾被认为是Nosemapyraustae(Paillot,1928)Wieser(问锦曾,1965),但近年作者等观察我国几个省区孢子样本的超微构造,并和美国N. pyrausta(Paillot)直接作了形态学与病理学比较,发现它也是微粒子虫属一新种。本文将这两新种作一记述。新种模式玻片标本保存在北京,中国农业科学院植物保护研究所。     

蓖麻蚕在豫北越冬研究初报

蓖麻蚕在河南省曾一度推广,但因蚕种问题未获解决而中途停止。为此我校在1960～1964年对蓖麻蚕在北方越冬问题曾作了一些研究,并选出了“百泉号”蚕种。兹将结果介绍于下。 一、试验情况与效果 1960年曾以卵、蛹保存过冬,结果如失效,只有蛹经过冬季能部分化蛾,经交配产卵,有少量蚁蚕孵出,随着此一启示,继续进行试验。1962年冬藏种茧150天,化蛾率90％以上。1963年冬,保存种茧11,933颗,冬藏150余天,至1964年4月分批暖茧,出蛾8,411     

昆虫保幼激素类似物对家蚕后部丝腺谷氨酸-丙酮酸转氨酶活性的影响

1.多化性蚕种南农七号五龄中期喷布保幼激素类似物(734-Ⅱ)的剂量为0.05微克/克幼虫体重,二化性蚕种为0.08微克/克幼虫体重。将使龄期延长18—24小吋,增加茧丝量12—24%。 2.正常情况下,五龄期后部丝腺转氨酶的活性以饷食后72小时为最大,以后渐次下降,熟蚕前又稍有回升。二化性蚕种的茧层量较多化性蚕种多一倍左右,同样它的转氨酶最大活性亦较多化性蚕种多70%。 3.用734-Ⅱ号处理后12—24小时内,后部丝腺的转氨酶活性较对照区明显下降,48小时后又回升并超过对照区,以后虽渐次下降,仍明显地高于对照区,熟蚕前则又有所回升。喷布734-Ⅱ号后使二化性蚕种的茧层量增加10—16%,而转氨酶活性增加10—25%。同样,多化性蚕种的茧层量增加18-24%,而转氨酶活性增加20—40%。可以认为734-Ⅱ号促进转氨酶活性的提高,是增产茧丝的生理上的原因之一.