毛细管电泳在氨基酸分析检测中的应用进展

对毛细管电泳技术的主要原理及其在氨基酸分析检测中的应用作了综述     

反应介质对酶选择性的影响

有机相酶催化是酶工程研究最活跃的领域之一。本文主要综述了反应介质对酶底物选择性、酶对映体选择性、酶前手性选择性、酶区域选择性及酶基因选择性的影响。     

酵母还原乙酰乙酸乙酯制备(S)-3-羟基丁酸乙酯的研究

研究了五种酵母催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的能力,筛选出催化性能较好的菌株酿酒酵母,并以该酵母为出发菌株进行紫外诱变筛选出催化性能更优良的菌株LY7;另外还对菌株LY7催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的反应特性进行了研究。研究表明:采用200g/L蔗糖作为碳源,初始乙酰乙酸乙酯浓度为0.25mol/L,初始细胞浓度为150g/L,反应温度为36℃时所得产物得率和对映体过剩值最高。     

基于环糊精手性选择剂的扑尔敏对映体的毛细管电泳拆分

本文旨在通过对毛细管电泳在手性药物拆分方面的应用原理的探讨,对实验中关于手性选择剂的浓度、缓冲液pH值等对分离拆分效果的影响进行讨论和分析,以期对药物研究有所裨益并得到令人满意的结果。     

酵母还原乙酰乙酸乙酯制备(S)-3-羟基丁酸乙酯的研究*

研究了五种酵母催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的能力,筛选出催化性能较好的菌株酿酒酵母,并以该酵母为出发菌株进行紫外诱变筛选出催化性能更优良的菌株LY7;另外还对菌株LY7催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的反应特性进行了研究。研究表明:采用200g/L蔗糖作为碳源,初始乙酰乙酸乙酯浓度为0.25mol/L,初始细胞浓度为150g/L,反应温度为36℃时所得产物得率和对映体过剩值最高。     

酵母还原乙酰乙酸乙酯制备（S）-3-羟基丁酸乙酯的研究

研究了五种酵母催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的能力,筛选出催化性能较好的菌株酿酒酵母,并以该酵母为出发菌株进行紫外诱变筛选出催化性能更优良的菌株 LY7;另外还对菌株 LY7 催化乙酰乙酸乙酯生成(S)-3-羟基丁酸乙酯的反应特性进行了研究。研究表明：采用 200g／L蔗糖作为碳源,初始乙酰乙酸乙酯浓度为 O.25mol/L,初始细胞浓度为 150g／L,反应温度为36℃时所得产物得率和对映体过剩值最高。     

生物催化过程中色氨酸与色氨酰胺的测定

采用高效液相色谱法来定量测定生物催化过程中的色氨酸及色氨酰胺。使用戴安C18柱,乙腈与10mmol.L-1的KH2PO4为流动相,梯度洗脱分析。在此条件下进行色谱分离,两样品的分离度达到9.36。并且成功的以美国Astec公司生产的CHIROBIOTIC手性色谱柱为固定相,乙腈与0.5%的冰醋酸为流动相,对产物色氨酸的对映体选择性进行了检测分析。     

有机介质中脂肪酶催化外消旋苯甘氨酸甲酯的对映体选择性氨解反应

由水解酶催化的酯的对映体选择性水解和醇解反应 ,已在外消旋物质的拆分中得到广泛应用[1 ] 。近年来的一些研究表明 ,某些水解酶还可催化一些非天然酰基受体的转化 ,如过氧化氢、烷基胺、联胺和氨等。这些非天然酰基受体的转化反应在多肽的合成及手性化合物的拆分中显示出巨大的应用前景。其中 ,以氨为酰基受体的酶促氨解反应 ,是继酶促对映体选择性水解、酯化及转酯反应之后的另一制备光学纯化合物的新反应[2 ] 。目前国际上对这一新反应的研究尚属起步 ,国内未见有对该反应研究的报道。(Ｄ ,Ｌ) 苯甘氨酸是半合成 β 内酰胺类抗生素的重…     

环氧化物水解酶产生菌的筛选及产酶条件研究

手性环氧化物至少含有一个手性碳,通过选择性开环和官能团转换,可以方便地合成许多有价值的手性化合物,在制药、农药、香料、精细化学品工业上有着极其重要的应用价值[1]。因此,手性环氧化物的合成一直是一个重要的研究课题。     

手性高效液相色谱法测定S(+)-布洛芬对映体过量

用手性固定相高效液相色谱法(CSP-HPLC)测定了样品或微生物酶不对称水解反应液中S(+)-布洛芬对映体过量(ee)。该法首先将布洛芬转化为二苯酰胺衍生物,然后在N-3,5-二硝基苯甲酰-?-苯甘氨酸[?-DNB-PG]的共价型CSP柱上进行对映体HPLC分离。流动相选择正已烷-异丙醇(98:2),流速1ml/min,对映体分离度1.47。按相同方法同时进行消旋布洛芬的二苯酰胺衍生物的分离,由其对映体峰高比可测定S(+)-布洛芬ee(%)。测定加量回收率相对标准偏差为3.3%。     

生物制造:手性化学品的绿色制造之路

<正>手性化学品广泛应用于医药、农业、食品、材料等领域,在国计民生中占据极其重要的地位。例如人们服用消旋体药物,在摄入活性对映体的同时,也摄取了大量无效甚至有毒有害的对映体,对人体的健康构成了直接或潜在的威胁;农药在以外消旋体形式使用时,在施用活性对映体的同时,也施用了大量     

新品了望

手性柱 Phenomenex引入了LuxAmylose-2手性柱,为鉴别和解析旋光对映体提供了HPLC技术方案的新选择。新的柱化学整合了具有5-氯-2-甲基苯氨基甲酸酯衍生物的淀粉酶骨架,为手性层析法分离难以分离的对象提供了额外的选项。Lux Amylose-2柱可以配合公司新引入的Lux纤维素酶-1和-2手性供物。     

脂肪酶活性和选择性受溶剂不同物化参数控制

采用假单胞菌脂肪酶在不同溶剂中催化辛酸与外消旋２－辛醇间的不对称酯合成反应时发现,酶的催化活性和对映选择性分别受溶剂不同物化参数的影响。前乾与溶剂疏水性有较发孤相关关系;而后者与介电常数和偶极矩关联较好。通过反动力学研究和由此提出孤脂麦活性中心结构模型对上述现象作了合理的解释。     

手性高效液相色谱法测定S（＋）—布洛芬对映体过量

用手性固定相高效液相色谱法测定了样品或样品或微生物酶不对称水解反应液中Ｓ（＋）－布洛芬对映体过量。该法首先将布洛芬转化为二苯酰胺衍生物,然后在Ｎ－３,５－二硝基苯甲酰－（Ｒ）－苯甘氨酸［（Ｒ）－ＤＮＢ－ＰＧ］的共价型ＣＳＰ柱上进行对映体ＨＰＬＣ分离。流动相选择正已烷－异丙醇（９８：２）,流速１ｍｌ／ｍｉｎ,对映体分离度１．４７。按相同方法同时进行消旋布洛芬的二苯酰胺衍生物的分离,由其对映体峰高比可     

芳香酰胺类化合物的选择性水解菌初筛模型的研究

建立了一种快速筛选选择性水解手性芳香酰胺类化合物微生物的方法。在中性或弱碱性条件下,KMnO4能氧化芳香胺,但对芳香乙酰胺没有氧化效果。KMnO4被芳香胺还原而褪色,通过褪色程度来快速测定菌的酶活力及手性选择性。以1-苯基乙酰胺为例,得出最佳筛选体系:最大吸收波长为525 nm;1-苯基乙胺在0.04~5 mmol/L的浓度范围内与其ΔA525符合朗伯比尔定律;反应温度为60℃,反应时间为20 m in。通过该模型筛到5株选择性的菌株,R-选择性的菌株4株,S-选择性的菌株1株。     

酿酒酵母B5不对称还原制备手性药物中间体R-2′-氯-1-苯乙醇的研究

从 11株微生物中筛选出 4株具有不对称还原 2′ 氯 苯乙酮能力的酵母 ,其中酿酒酵母B5的还原产率与对映体选择性最佳。确定了酿酒酵母B5对 2′ 氯 苯乙酮还原的最佳反应时间为 2 4h ;最佳pH 8 0 ;最佳反应温度为2 5℃ ;最佳共底物为 5 % (体积比 )乙醇。同时研究了底物浓度、微生物的量、微生物的培养条件等对反应产率和立体选择性的影响。细胞浓度为 10 75mg mL(细胞干重 反应体积 )的酿酒酵母B5可将 6 47mmol L的 2′ 氯 苯乙酮10 0 %地转化为R 2′ 氯 1 苯乙醇 ,其对映体选择性为 10 0 %。酿酒酵母B5可重复利用的特点可提高产物的产量。     

常用中药Xi莶研究进展

Xi签中已分离鉴定42个成分,其中17个是新二萜类化合物,我研究组确定了17个新成分中的10个,并对3个指定错了的化学结构给予了评论和改正。     

酿酒酵母B5不对称还原制备手性药物中间体R-2′-氯-1-苯乙醇的研究

从11株微生物中筛选出4株具有不对称还原2′-氯-苯乙酮能力的酵母,其中酿酒酵母B5的还原产率与对映体选择性最佳。确定了酿酒酵母B5对2′-氯-苯乙酮还原的最佳反应时间为24h;最佳pH 8.0;最佳反应温度为25℃;最佳共底物为5%（体积比）乙醇。同时研究了底物浓度、微生物的量、微生物的培养条件等对反应产率和立体选择性的影响。细胞浓度为10.75mg/mL（细胞干重/反应体积）的酿酒酵母B5可将647mmol/L的2′-氯-苯乙酮100%地转化为R-2′-氯-1-苯乙醇,其对映体选择性为100%。酿酒酵母B5可重复利用的特点可提高产物的产量。     

生物催化反应对映选择性控制

合成光学纯的化合物在化学及生物化学的研究和发展中正变得越来越重要,尤其在制药行业中目前手性药物近占全球药品总销售额的三分之一。本文以生物还原反应为例,介绍一些控制反应对映选择性的方法。     

R-2-卤代酸脱卤酶的同源模建及底物对映体选择性研究

对来自假单胞菌ZJU26中的R-2-卤代酸脱卤酶(DehI-R)进行同源模建,分析其与底物的相互作用,为解析酶的底物对映体选择性提供理论依据.采用Sybyl中的APM模块首次构建并优化了R-2-卤代酸脱卤酶的三维结构,并用Procheck 验证结构模型的合理性.使用Suflex-Docking模块将结构模型与底物分别进行对接,分析相互之间的作用.序列比对结果显示,R-2-卤代酸脱卤酶与恶臭假单胞菌PP3中DehI的相似性达23.71％.Deh-R模建后的结构与模板很好的吻合.模型比对分析DehI-R中参与催化的残基,除Asn2.03外大部分都比较保守.分子对接结果表明,R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸都可以结合到活性位点上,决定其选择性的是值点Asn203,在RS-2-卤代酸脱卤酶所对应位点的残基为Ala,相比之下,Aan具备较大的空间位阻,从而阻止了S-2-氯丙酸的反应.利用Sybyl中的Biopolymer模块对R-2-卤代酸脱卤酶中的Asn203突变成具有不同空间位阻的Ala、Gly和Gln.突变酶与底物对接结果进一步证实了Asn203位点对R-2-卤代酸脱卤酶的底物对映体选择性作用.