重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实,根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息,利用ＰＣＲ技术,对人ＴＮＦα基因进行了改造,并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明,分子量约为３７ｋＤ;活性检测结果证实,该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力,在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。     

重组人肿瘤坏死因子α和白细胞介素6融合基因的构建和表达

本文利用ＰＣＲ技术和基因定位突变技术,将编码人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦα）和白细胞介素６（ｈＩＬ－６）成熟肽的基因通过中间接头连接成编码单一蛋白的基因,构建了融合蛋白表达载体ｐＢＩＴ,并在大肠杆菌中得到了表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的电泳胶薄层扫描显示,融合蛋白的表达量是菌体总蛋白量的２０％,其分子量约为３７ｋＤ。活性检测证实,融合蛋白既有ＴＮＦ活性,又有ＩＬ－６活性。     

细胞因子对卵巢功能的调节作用

细胞因子是一类具有广泛生物学活性的激素样多肽。近年来,细胞因子在生殖活动中的作用日益被人们所认识和关注,而成为一个新的研究领域。肿瘤坏死α（ＴＮＦ－α）、白介素１（ＩＬ－１）、ＩＬ－６、ＩＬ－８、γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）等多种细胞因子可参与卵巢功能的调节。本文着重介绍细胞因子在卵泡发育和甾体激素生成、排卵、黄体形成和退化等方面的研究进展。     

创伤后巨噬细胞对T细胞白介素2及白介素2受体α基因表达的直…

以２５μｇ／ｍｌ的丝裂霉素Ｃ处理巨噬细胞３０ｍｉｎ,可阻断巨噬细胞白介素１（ＩＬ－１）、白介素６（ＩＬ－６）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的合成与分泌。创伤小鼠巨噬细胞经丝裂霉素Ｃ处理后,可明显抑制正常Ｔ细胞白介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ及ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）α ｍＲＮＡ水平,并增强Ｔｓ细胞的抑制活性。去除Ｔ细胞中Ｔｓ细胞可使巨噬细胞的抑制作用消失。表明创伤后巨噬细胞可通过     

外源p53基因和TNFa基因转导对膀胱癌细胞在裸鼠体内的生长抑制

通过逆转录病毒载体将野生型ｐ５３基因、ＴＮＦａ基因单独或与ＩＬ－６基因连接（ＴＮＦＩＬ－６）分别导入膀胱癌细胞株ＥＪ和ＢＩＵ－８７．裸鼠致瘤试验和体外生长实验显示：ｐ５３基因转染组细胞接种裸鼠后９周无肿瘤生长,体外生长速率明显降低,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示Ｈ－ｒａｓ基因表达明显低于非转染组细胞,ＴＮＰａ基因和ＴＮ刊ＩＬ－６基因转染组裸鼠瘤体积明显小于对照组,体外生长速率与对照组无显著差别,两种细胞因子对Ｈ－ｒａｓ基因表达无影响。     

双歧杆菌对RAW264.7细胞的免疫刺激作用

为了检测双歧杆菌是否能增强巨噬细胞免疫因子的产生,用ＲＡＷ２６４．７细胞作为巨噬细胞模型,将８种不同的经热处理杀死的双歧杆菌分别与培养的ＲＡＷ２６４．７细胞温育。所有的双歧杆菌均能诱导ＴＮＦ－α及ＩＬ－６的产生,且产生ＴＮＦ－α及ＩＬ－６的量与双歧杆菌的剂量及诱导时间有关,在２４ｈ之内,与对照组相比,８种双歧杆菌均能增强ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的产生,但是如果双歧杆菌与ＲＡＷ２６４．７细胞温育时间短（只有１４ｈ）,低剂量的双歧杆菌（１０μｇ／ｍＬ和５０μｇ／ｍＬ）就不能诱导ＴＮＦ－α和ＩＬ－６的产生。双歧杆菌     

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ,序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ,融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ,表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞ＰＣ－３的杀伤作用     

人α降钙素基因相关肽与肿瘤坏死因子的融合表达

用半酶和半化学合成的方法合成和克隆了人ａ降钙素基因相关肽基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子之后插入表达载体ｐＳＢ－９２中,使融合基因的５＇端直接置于大肠杆菌ＰＬ启动下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,使ＴＮＦ与ＣＧＲＰ融合蛋白在大肠杆菌中获得了表达,表达的融合蛋白既有ＣＧＲＰ的结合活性（酶标检测为阳性）又有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ－９２９细胞的细胞毒活性）。表达菌裂解液走ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示     

人类疱疹病毒6型可诱生TNF－α

用生物活性法和双抗体夹心桥联酶免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测了人类疱疹病素６型（ＨＨＶ－６）ＧＳ株和南京地方株ＣＮ５,８,１０感染的淋巴细胞培养上清中的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的水平,发现培养２４ｈ即可检出高水平的ＴＮＦ,４８～７２ｈ述到峰值,此后逐渐下降,与未感染耐照组比较有及其显著的差异（Ｐ＜０．００１）。ＧＳ株与地方株同诱生ＴＮＦ水平无儿著性差异（Ｐ＞０．１）,三株地方株诱生ＴＮＦ也无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ＴＮＦ－α单抗可以完全中和培养上清中ＴＮＦ的活性,证实上清中有ＴＮＦ－α。与ＬＰＳ比较,ＨＨＶ－６诱生ＴＮＦ－α的能力要强得多。     

双歧杆菌及其表面分子的免疫增强作用

研究双歧杆菌及其脂磷壁酸、细胞壁肽聚糖、培养乏液对小鼠腹腔渗出细胞、脾细胞ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＴＮＦ、ＩＦＮ－γ活性和脾ＮＫ、ＬＡＫ细胞活性的影响。结果发现双歧杆菌全菌、脂磷壁酸、肽聚糖多次注入小鼠腹腔一段时间后,小鼠脾ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞活性和ＩＦＮ－γ活性增强,腹腔渗出细胞产生ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＴＮＦ活性增强,其中以脂磷壁酸作用最强,肽聚糖次之,培养乏液也有一定作用。双歧杆菌及其表面分子对小鼠脾细胞、腹腔渗出细胞ＩＬ－２活性无显著影响。双歧杆菌的免疫增强作用在抗感染、抗肿瘤机理中占有十分重要的地位。     

青春双歧杆菌DM8504菌株对小鼠体内HCa—F25／16A3—F肿瘤细胞 …

本实验应用加热处死的青春双歧杆菌ＤＭ８５０４菌株皮下注射荷瘤ＨＣａ－Ｆ２５／１６Ａ３－Ｆ肿瘤的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,酶联法测定小鼠体内ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的含量,ＴＵＮＥＬ法及电镜观察肿瘤组织中是否有凋亡细胞的存在。实验结果指出：双歧杆菌能提高荷瘤小鼠体内ＴＮＦ－２的含量,较对照组明显升高,但ＩＬ－６的含量处理组与对照组之间无显著性差异。ＴＵＮＥＬ法除观察到不同程度的坏死组织外,未见到散在凋亡的肿瘤细     

大部分肝切除后肝再生中TNFα、IL6作用的研究

为研究ＴＮＦα、ＩＬ６在肝再生中的作用,我们制备了大鼠７０％肝切除后肝再生的模型,以增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的免疫组织化学染色作为肝再生的指标,对其ＴＮＦα、ＩＬ６的水平进行了检测。结果显示：ＰＣＮＡ在肝切除后残存肝组织中的表达明显升高,于手术后２４小时达高峰。手术后３小时,假手术组和肝切除组血中ＴＮＦα和ＩＬ６的水平均有升高,但假手术组很快恢复至正常,而肝切除组血清ＴＮＦα和ＩＬ６的水平继续升高,并于术后１２小时达高峰（Ｐ＜００５）。研究提示：ＴＮＦα、ＩＬ６等细胞因子在肝切除后的肝再生中具有一定的促进作用     

牙龈卟啉菌脂多糖诱生的IL—1,TNF和PGE的骨吸收活性

牙龈卟啉菌脂多糖（Ｐｇ－ＬＰＳ）作用于人外周血单个核细胞或人牙龈组织细胞后,能诱导此等细胞分别产生ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ。经原子吸收光谱分析后证实,所诱生的ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ均具有使大鼠头盖骨脱钙的作用,消炎痛未能阻断该骨吸收活性。ＰＧＥ的骨吸收活性最强,ＩＬ－１和ＴＮＦ的骨吸收活性相似。Ｐｇ－ＬＰＳ也能直接作用于大鼠头盖骨,使钙离子释放量明显增加,但该活性能被消炎痛所阻断。研究结果表明,Ｐｇ－ＬＰＳ可直接或间接地通过ＩＬ－１、ＴＮＦ和ＰＧＥ等发挥强大的骨吸收作用,故Ｐｇ－ＬＰＳ是牙周炎时牙槽骨吸收的主要因素之一     

乙肝病毒表面抗原preS1与人肿瘤坏死因子α融合基因的表达

用ＰＣＲ法获得了ＨＢｓＡｇｐｒｅＳ１（１－６５）肽段基因,将该基因融合在肿瘤坏死因子（ｈＴＮＦα）之后,插入表达载体ＰＳＢ－９２中,使融合基因的５′端直接置于大肠肝菌ＰＬ启动子下游,采用３０℃培养,４２℃诱导,获得了ＴＮＦ与ｐｒｅＳ１（１－６５）融合蛋白的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为２５ｋＤ,约占细菌总蛋白的３５％。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ验证,能分别特异地与ｈＴＮＦα抗体与ｐｒｅＳ１抗体结合,稀释复性后,该融合蛋白还具有ＴＮＦ的生理功能（对Ｌ９２９细胞的细胞毒活性）。经ＤＮＡ序列测定,ｐｒｅＳ１（１－６５）肽基因正确地融合在ｈＴＮＦα基因之后。该结果提供了一种制备ｐｒｅＳ１的新方法,为进一步开展治疗肝癌和乙肝的导向药物打下基础。     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及白细胞介素1β（IL1－β）对胶质增生的影响及机理

本文利用小鼠大脑机械损伤模型及体外培养的胶质细胞,采用同位素渗入法观察了细胞介素及其抗体对胶质细胞增生的影响。结果表明：体外培养时ＴＮＦ－α在浓度为１０～２００ｕ／ｍｌ培养液时均能促进胶质细胞增生（Ｐ＜０．０５）,ＩＬ１－β在浓度为５～２００ｕ／ｍｌ培养液时能促进胶质细胞增生,ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β其促进胶质细胞增生作用更强烈,ＴＮＦ－α抗体能完全阻断ＴＮＦ－α的促增生作用,部分阻断ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β的促增生作用。在体实验时,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α的作用与离体时相似,ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α亦能促进胶质细胞增生,二者共同作用时促细胞增生作用更强。以上结果提示,外源性ＴＮＦ－α及ＩＬ１－β能促进中枢神经损伤后胶质细胞增生且具有协同作用。     

人α－肿瘤坏死因子基因的高效表达

用人工合成的α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是ＳＤ序列与起始密码子ＡＴＧ间距离（Ｄ）各异。计算机模拟计算出翻译起始区域（ＴＩＲ）中二级结构的最小生成自由能,以（Ｄ）为６个核苷酸时最小（绝对值）。它的表达效率也最高,产物ＴＮＦ－α可达菌体总蛋白的６０％。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成ＴＮＦ－α基因（选用大肠杆菌偏爱的密码子）的表达效率高于ｓｃ－     

小鼠胸树突状细胞系自发分泌多种类型细胞因子

建成小鼠胸腺基质细胞系，命名为ＭＴＳＣ４，经鉴定分析认为是ＤＣ来源。在无外来刺激条件下，ＭＴＳＣ４细胞可自发分泌多种类型细胞因子，已检测到的有ＩＬ－１，ＩＬ－６，ＩＬ－７，ＣＳＦ，ＩＦＮ及趋化因子（ＣＦ）等。其中ＩＬ－６，ＩＦＮ为较高水平分泌量，ＩＬ－１、ＣＦ为中等水平，ＩＬ－７、ＣＳＦ为较低水平分泌量。ＭＴＳＣ４不能自发分泌ＩＬ－３及ＴＮＦａ。ＭＴＳＣ４的建立有利于分析胸腺选择特别是阴性选择的机     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）对常见呼吸道病毒的抑制作用

用人重组肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）和人天然α干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－α－,ＩＦＮ－α）在人胚胎肺纤维母细胞（ＨＥＦ）和Ｈｅｐ－２细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒５株,单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ｉ）１株,鼻病毒１株,仙台病毒１株,ＶＳＶ１株。结果提示ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α均具有广谱抗病毒活性。ＴＮＦ－α的抑毒作用能被ＴＮＦ－α申抗和ＩＦＮ－β单抗完全去除,被ＩＦＮ－α单抗部分去除ＴＮＦ－α的抗病毒效应。ＴＮＦ－－α中和试验的结果提示：ＴＮＦ抗病毒活性仍为ＩＦＮ－β诱生所介导。     

磷脂酶A2介导肿瘤坏死因子诱发的中性粒细胞趋化和粘附增强

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对外周中性粒细胞（ＰＭＮ）具有重要调节作用。本文采用生化及放射免疫技术,观察体外重组ＴＮＦ对ＰＭＮ趋化、粘附及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和前列环素（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）释放的改变。ＴＮＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）处理６０ｍｉｎ后,ＰＭＭ对白细胞趋化因子（ＦＭＬＰ）趋化和玻璃珠粘附性均显著增加,同时伴有ＴＸＢ２释放增多,６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ不变。这提示ＴＮＦ体外促ＰＭＭ趋化和粘     

TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成