STAT4和STAT6蛋白在COPD大鼠肺组织中的表达及意义

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中信号转导转录激活因子4(STAT4)和6(STAT6)蛋白表达的变化,探讨其在COPD发病中的作用.方法:首先复制COPD大鼠模型,然后采用免疫组织化学法检测COPD组及对照组大鼠肺组织STAT4和STAT6蛋白的表达.结果:STAT4蛋白在COPD大鼠肺组织中呈不同强度的阳性表达.而STAT6蛋白在COPD大鼠肺组织中的表达则低于对照组(P＜0.01).经统计学分析,两因子呈负相关性(r＝0.783,p＜0.01).结论:COPD大鼠肺组织中STAT4蛋白的表达占优势,而STAT6蛋白的表达被抑制.     

反复苯丙胺刺激对大鼠脑部蛋白羰基化的影响

目的:为了进一步研究苯丙胺神经毒性作用机制,我们对大鼠进行不同时长的反复苯丙胺刺激,检测大鼠部分脑区中蛋白羰基化的变化情况,我们的研究为苯丙胺的成瘾及治疗提供了新的理论依据。方法:分别对大鼠进行1d、3d、7d、10d及14d的苯丙胺反复刺激,进行旷场测试检测其活动量变化后,采用DNPH法检查的大鼠大脑前皮层、海马区、杏仁核三大脑区总蛋白的蛋白羰基化水平变化,探讨反复苯丙胺刺激对大鼠脑部蛋白羰基化的影响。结果:苯丙胺刺激7d及14d时,大鼠活动量出现了显著性增加,同时大鼠前皮层总蛋白的蛋白羰基化也出现了显著性增加,而海马区及杏仁核区域总蛋白的蛋白羰基化没有明显变化。结论:反复苯丙胺刺激能够增加大鼠活动量及大脑前皮层总蛋白蛋白羰基化水平。     

慢性睡眠限制状态下大鼠髁突软骨MMP-1,MMP-13表达的变化

目的:探讨MMP-1,MMP-13在慢性睡眠限制引起大鼠髁突软骨结构变化中的表达变化及作用。方法:180只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=60):慢性睡眠限制组(CSR)、大平台组(LC)、笼养组(CON)。每组根据试验时间不同分别分为3个亚组(n=20):7天(7D)、14天(14D)、21天(21D)组。参考改良多平台法(MMPM)建立大鼠的慢性睡眠限制模型。通过HE染色观察大鼠髁突软骨的结构变化。通过免疫组化和实时定量PCR分别检测MMP-1和MMP-13的蛋白水平及m RNA水平的表达变化。结果:HE染色和扫描电镜结果显示,CSR组的大鼠髁突软骨出现了病理性的改变。与CON和LC组比较,CSR组MMP-1和MMP-13的m RNA转录和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论:慢性睡眠限制能够引起大鼠颞下颌关节髁突软骨的病理性变化。MMP-1和MMP-13的表达水平的变化可能在大鼠髁突软骨病理性改变中起关键作用。     

大强度训练及恢复后大鼠红细胞变形能力和红细胞膜蛋白的变化

目的 :探讨运动对红细胞变形性和红细胞膜蛋白的影响及其相互关系。方法 :设计不同强度的训练方案 ,用激光衍射法测定红细胞变形能力 ,用SDS PAGE方法测定一定体积大鼠红细胞膜中的重要蛋白带 3蛋白 (band 3)和肌动蛋白 (actin)的含量 ,研究运动即刻和恢复后红细胞变形性及膜蛋白的变化。结果 :长期的运动训练会促进大鼠红细胞变形能力的改善和红细胞膜band 3蛋白和actin的良好发展 ,一次大强度训练会引起红细胞膜band 3蛋白和actin含量的减少 ,大鼠红细胞变形能力降低 ,一周和二周的大强度训练会提高恢复期大鼠红细胞的变形能力和红细胞膜band 3蛋白和actin含量。结论 :运动训练造成的红细胞膜蛋白含量的变化 ,导致了红细胞膜结构的改变 ,从而影响红细胞变形能力 ,可能是训练对红细胞变形能力的作用机制之一。     

比较谷氨酸引起两品种大鼠培养星形胶质细胞肿胀的差异

目的比较Wistar大鼠及SD大鼠培养星形胶质细胞(AST)对谷氨酸所致细胞肿胀的差异。方法利用新生1 d的Wistar大鼠和SD大鼠进行AST原代及传代培养,传代培养10 d分别给予1、10 mmol/L谷氨酸孵育48 h,通过乳酸脱氢酶释放率检测细胞活性,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色、Image Pro Plus软件测量细胞周长表示细胞体积变化,通过逆转录实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达变化。结果谷氨酸对不同品种大鼠AST活性影响没有差异(P0.05)。在正常情况下,Wistar大鼠AST周长小于SD大鼠,在给予谷氨酸处理后,均明显大于SD大鼠(P0.05)。在给予1 mmol/L谷氨酸后,Wistar大鼠AST的AQP4mRNA表达明显高于SD大鼠(P0.05)。结论 Wistar大鼠AST对谷氨酸所致细胞肿胀较SD大鼠明显,且谷氨酸对两品种大鼠AST上AQP4表达变化的影响存在差异。     

不同疗法对去卵巢大鼠子宫ERα和ERRα蛋白表达的影响

目的:本研究旨在对比观察全身垂直振动、跑台运动、金雀异黄酮和氯化锂等不同干预疗法对去卵巢骨质疏松大鼠子宫雌激素受体α(ERα)和雌激素受体相关受体α(ERRα)蛋白表达的影响。方法:将80只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组和去卵巢组。去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组、氯化锂组和雌激素组,并开始进行不同的干预处理。干预处理8周时,腹主动脉取血处死各组大鼠,用放射免疫方法检测血清E_2水平,用Western blot检测子宫ERα和ERRα蛋白表达水平的变化。结果:大鼠去卵巢后,血清E_2水平显著下降,经雌激素处理后,血清E_2水平显著回升,但经其他几种方法处理后均无显著变化。Western blot结果显示,大鼠去卵巢后,子宫ERα蛋白表达水平显著增加,经雌激素、跑台运动、全身垂直振动和氯化锂处理后,子宫ERα蛋白表达水平显著下降,而经金雀异黄酮处理后,子宫ERα蛋白表达水平无显著变化。大鼠去卵巢后,子宫ERRα蛋白表达水平显著下降,经雌激素和金雀异黄酮干预后,子宫ERR-α表达水平显著增加,而经跑台运动、全身振动和氯化锂干预后,子宫ERR-α表达水平却显著下降。结论:跑台运动和全身垂直振动能抑制去卵巢骨质疏松大鼠子宫ERα和ERRα蛋白的表达,氯化锂能抑制ERα蛋白的表达,但促进ERRα蛋白的表达,金雀异黄酮能促进ERRα蛋白的表达,但对ERα蛋白的表达没有影响。     

耐力训练和急性力竭运动对大鼠组织金属硫蛋白含量的不同影响

为探讨金属硫蛋白（ＭＴ）在运动提高机体自我保护能力方面的作用,本实验观察了游泳运动对大鼠心、肝、肺、脑、血管、血浆和骨骼肌等７种组织金属硫蛋白含量的影响。结果表明耐力训练组大鼠心、肝、肺和骨骼肌组织金属硫蛋白含量较正常对照组明显降低１３－３４％（Ｐ＜０．０５）;急性力竭运动组大鼠心、肝、脑、肺和骨骼肌组织其含量较正常对照组则明显升高２１－７５％（Ｐ＜０．０５）;但两组大鼠血管和血浆ＭＴ含量变化与对照组大鼠相比无统计学意义（Ｐ＜０．０５）。推测各组织金属硫蛋白在不同运动形式下的不同变化可能在运动提高机体自我保护能力方面具有积极意义。     

两种不同mGluR5抑制剂对创伤后Homerla蛋白表达水平影响的研究

目的:研究代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)的激动剂依赖性活性和激动剂非依赖性对创伤性脑损伤后Homerla蛋白表达水平的影响.方法:离体培养神经元2w,采用mGluR5抑制剂2-甲基-6-苯基乙炔基嘧啶(MPEP)和α-甲基-4-羧苯基甘氨酸(MCPG)两种不同剂量预处理神经元细胞1h,神经元机械性损伤模型划伤细胞;利用立体定向仪固定大鼠,在大鼠脑皮层注射两种不同剂量的抑制剂,1h后采用自由落体损伤模型造成大鼠颅脑损伤.通过Westem blot分别检测离体和在体Homerla蛋白表达水平的变化.结果:两种不同剂量MPEP预处理后,大鼠脑皮层和离体培养的神经元细胞中Homerla蛋白表达水平表达明显减少,具有统计学差异(P＜0.05);而两种不同剂量的MCPG预处理后,Homerla蛋白表达水平的改变不明显.结论:颅脑损伤后内源性Homerla的产生是与代谢型谷氨酸受体激动剂非依赖性活性密切相关.     

大鼠脑缺血/再灌注后bFGF和GAP-43的表达与神经再生

目的:观察大鼠脑缺血/再灌注后不同时间段碱性成纤维生长因子(bFGF)和生长相关蛋白43(GAP-43)表达与神经元再生的变化,探讨其与神经再生的有关机制。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞模型(MCAO),并分为缺血再灌注3 d、7 d、14 d和28 d四组(n=6)。以神经损伤严重程度评分(NSS),运动评分测试(SMT)评估神经功能缺损程度,Nissl和TUNEL染色法观察不同时段缺血区周边组织神经元存活和凋亡情况,应用蛋白免疫印迹法和免疫荧光双标法检测缺血/再灌注后不同时段缺血区周边组织bFGF和GAP-43的表达水平和神经元再生的变化情况。结果:大鼠脑缺血/再灌注后3 d,大鼠出现了明显的神经功能缺损及运动功能障碍,缺血区周边组织神经元凋亡亦达到高峰,同时bFGF和GAP-43表达增强,7 d达到高峰,以后逐渐减弱,缺血周边组织可见散在的新生神经元,持续到28 d。结论:大鼠脑缺血/再灌注后内源性bFGF和GAP-43表达水平增加,可能与其神经修复和再生有关。     

老年大鼠骨组织中c-fos和BMP表达的变化

目的：研究某些调节因子对骨组织老化过程的影响,方法：应用免疫细胞化学方法,检测大鼠骨组织骨形态发生蛋白（BMP）和细胞转录调节基因蛋白c-fos的表达和相互关系,以及BMP和c-fos蛋白表达的年龄关性变化。结果青年和老年大鼠股骨组织周围骨膜下的成骨细胞以及骨组织中的某些骨细胞BMP和c-fos蛋白呈阳性表达。而老年大鼠骨组织中,BMP和c-fos蛋白的表达明显下降。结论：老年大鼠BMP和c-fos蛋白的增龄性表达变化。可能会影响老年时期大鼠骨组织的形成和改建过程。     

大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B表达的动态变化

目的:探讨大鼠脑缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶B(Cathepsin-B,CB)在不同时段表达变化.方法:将60只SD大鼠随机分为正常组(10只),假手术组(10只)和脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化和RT-PCR法分别检测Cathepsin-B的蛋白和mRNA表达.结果与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注后1hCathepsin-B的蛋白和mRNA表达明显增强,6h达高峰,48h仍保存高水平.结论:Cathepsin-B在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,可能在神经元凋亡中发挥着重要的作用.     

离子交换层析初步分离大鼠肝蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA

用DEAE 离子交换层析法分离 2 /3肝切除 ( partialhepatectomy ,PH)后恢复 4、 3 6和 14 4h的大鼠再生肝及正常肝的蛋白水解酶、ADAMs、ACP、AKP和PCNA ;用SDS PAGE、Western blot、酶复性电泳等方法 ,分析了它们在不同洗脱段中的分布及活性变化 ,为分离与肝再生有关的蛋白 (酶 )提供了资料。     

实验性肝硬化大鼠肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降

目的研究实验性肝硬化大鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化。方法参照文献1,给大鼠反复腹腔注射CCl4制备化学性肝硬化大鼠动物模型。实验4周、8周分批处死动物,应用免疫组织化学及Western blot检测肝硬化进程中,大鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位及表达的变化。结果occludin蛋白主要沿大鼠大肠粘膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在肝硬化组大鼠,4周时occludin的阳性染色开始减少,8周时更为明显。Western blot结果与免疫组织化学结果相一致,4周时开始下降(0.51±0.07),8周时达到最低值(0.32±0.05),与对照组(0.83±0.09)相比差异显著(P<0.05)。结论在肝硬化进程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降。     

大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase-9表达的动态变化

目的:探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D(Cathepsin D CD)、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法:将60只S D大鼠随机分为三组:正常组(10只),假手术组(10只),脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化及RT-PCR法分别检测Cathepsin D、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05),24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase-9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组(P<0.05),结论:Cathepsin D、caspase-9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

运动和制动大鼠腓肠肌内p-Akt/MuRF1/FoxO1的蛋白表达变化

本文旨在研究两种运动方式和制动状态下大鼠腓肠肌内p-Akt/MuRF1/FoxO1的蛋白表达变化,以揭示运动员不同的训练方式和停训状态下肌形态学改变的分子机制。Sprague Dawley(SD)大鼠随机分成对照组、耐力训练组、后肢悬垂组和离心训练组。耐力训练组接受跑台训练,悬吊组接受后肢悬垂,离心训练组接受坡度-16o的跑台训练。各组大鼠取腓肠肌,称取其重量,HE法测定骨骼肌细胞横截面积;免疫组化法测定p-Akt蛋白表达;免疫印迹法测定MuRF1、FoxO1的蛋白表达。结果显示,相对对照组,耐力训练组腓肠肌重量和细胞横截面积无显著变化,而离心训练组和后肢悬垂组显著降低;耐力训练组和离心训练组腓肠肌p-Akt蛋白表达显著增加,后肢悬垂组无明显变化。与对照组相比,耐力训练组MuRF1蛋白表达无明显变化,而离心训练组和后肢悬垂组则显著升高;耐力训练组FoxO1蛋白表达显著降低,而离心训练组与后肢悬垂组则显著升高。以上结果表明,增加活动的运动方式(耐力和离心训练)激活了Akt表达,但没有引起肌肉重量的增加;相反,离心训练和后肢悬垂均显著增加了MuRF1和FoxO1的蛋白表达,导致肌肉萎缩,提示MuRF1和FoxO1是造成肌肉萎缩的主要决定因素。     

心肌梗死大鼠钙敏感受体表达与心肌细胞凋亡的变化

目的:观察大鼠急性心肌梗死后不同时间心肌钙敏感受体(CaSR)的表达和心肌细胞凋亡的变化情况。方法:健康Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)和心肌梗死(AMI)组,通过结扎左侧冠状动脉前降支的方法,建立大鼠心肌梗死模型,分别在手术后1、2、4周(每组成功存活n=5)检测心脏形态学和血流动力学的改变,检测心肌组织中CaSRmRNA和蛋白的表达,以及Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9蛋白的表达,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性和肌钙蛋白(cTnT)水平,观察心肌细胞凋亡情况。结果:和Sham组相比,随着心肌梗死的发展,AMI组大鼠心肌组织CaSR的mRNA和蛋白的表达、细胞凋亡指数均明显增加(P<0.05),心肌细胞超微结构损伤严重;左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)(mmHg/s)和最大下降速率(-dp/dtmax)(mmHg/s)减少,左心室舒张末期压(LVEDP)明显增大(P<0.05);AMI组血清cTnT水平、CK和LDH活性均升高(P<0.05),随着心肌梗死的发展,cTnT水平和CK活性逐渐降低,LDH变化不明显。心肌组织中促凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、caspase-9表达增多,抑制凋亡的相关蛋白(或因子)Bcl-2表达减少(P<0.05)。结论:随着AMI的发展,AMI组大鼠心肌组织中CaSR的mRNA和蛋白的表达增多,细胞凋亡数增加,表明CaSR参与了心肌梗死的发展,其机制可能与促进细胞凋亡有关。     

大鼠Klotho蛋白水平随血压升高而降低

目的:探讨Klotho(kl)蛋白在大鼠高血压发生发展过程中的变化。方法:用不同浓度的N'-硝基-L-精氨酸干预大鼠肾小管上皮细胞,PCR检测kl基因表达的变化。选取48只体质量200±10 g的7周龄雄性SD大鼠,随机分为高血压组和对照组。高血压组大鼠造模用N'-硝基-L-精氨酸98 mg/d连续灌胃,对照组用等体积生理盐水灌胃,共28 d,2组大鼠分别于停药后第7、14、21、28 d测体质量、尾动脉血压,每组抽取6只体质量相近的大鼠用水合氯醛麻醉后腹主动脉采血,ELASA检测血浆中的kl蛋白、血栓素(TXA2)、内皮素(ET)水平,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)水平,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力。观察停药后第7、14、21、28 d胸主动脉HE染色血管壁病理变化,免疫组化CD31标记观察血管内皮细胞损伤情况。结果:在α=0.05水准上,2组大鼠收缩压在各因素影响下差异有统计学意义(P0.05)。校正模型检验时各指标的P值均0.05,说明模型均有统计学意义。血压、时间之间的交互作用对kl蛋白、NO浓度的影响有统计学意义(P0.05)。HE染色结果显示,高血压组随着高血压的发生主动脉壁弹力纤维增生、排列紊乱,中膜逐渐增厚。免疫组化CD31标记结果显示,高血压组随着高血压的发生内皮细胞受损,逐渐减少、脱落。结论:kl蛋白、NO水平随血压升高逐渐降低,与血压呈负相关;kl蛋白浓度与NO水平变化呈相同趋势,推测kl蛋白的减少通过某种机制使血管内皮分泌NO减少,从而介导了大鼠高血压的发生发展。     

糖尿病大鼠心肌功能的改变及其机制*

目的:观察钙敏感受体(CaSR)表达变化在2型糖尿病大鼠心功能降低中的作用。方法:Wistar大鼠随机分成3组:对照组、糖尿病4周和8周组。糖尿病组大鼠给予高糖高脂饮食喂养,4周后腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。通过HE染色观察心脏形态学变化,通过超声心动仪检测心脏功能的变化,通过Western blot检测心肌组织CaSR和PKC-α蛋白表达的变化。结果:与对照组相比,糖尿病大鼠心脏收缩和舒张功能降低,心肌组织出现不规则收缩带,且随着病程延长逐渐加重,同时心肌组织CaSR和PKC-α蛋白表达减少。结论:糖尿病大鼠心肌CaSR等蛋白的表达降低,从而引起细胞内钙紊乱,导致心功能下降。     

精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸中VEGF和Flt-1蛋白表达的影响

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1蛋白在实验性左侧精索静脉曲张(ELV)大鼠睾丸中的表达和定位,探讨它们在精索静脉曲张(VC)致男性不育中的作用。方法建立青春期大鼠ELV模型,采用免疫组化法检测VEGF及Flt-1在ELV4周、8周组及相应对照组大鼠睾丸中的表达变化。结果 VEGF和Flt-1蛋白在大鼠睾丸中定位具有细胞特异性。VEGF蛋白表达于生精细胞、精子细胞发育中的顶体、Sertoli和Leydig细胞胞质内;Flt-1表达于精子细胞发育中的顶体及Leydig细胞胞质中。ELV4周组睾丸中VEGF蛋白的表达显著增加(P<0.01),8周时其表达量下降(P<0.01);ELV4周组与8周组睾丸中Flt-1蛋白的表达均比相应对照组下降(P<0.01),ELV8周组比4周组显著减少(P<0.01)。结论 ELV可影响青春期大鼠睾丸中VEGF和Flt-1蛋白的表达量,可能会影响精子的发生、发育,因而该变化可能是VC引起男性不育的原因之一。     

妊娠期高血压疾病大鼠肾脏中蛋白激酶C-a亚型蛋白表达和转录水平的变化

目的:通过研究PKC-a蛋白及mRNA转录表达水平在妊娠期高血压疾病大鼠肾脏中的变化,以探讨妊娠期高血压疾病肾脏病理生理变化发生的机制.方法:注射L-NAME方法制备妊娠期高血压疾病动物模型并应用Westem印迹杂交及RT-PCR半定量方法检测15例妊娠期高血压疾病大鼠、正常妊娠大鼠、健康孕龄大鼠肾脏组织PKC-α亚型的表达情况.结果:妊娠期高血压疾病大鼠肾脏组织中PKC-α的蛋白及mRNA表达水平显著高于正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠大鼠肾脏PKC-α的蛋白及mRNA表达水平明显低于对照组大鼠(P<0.01).结论:妊娠期高血压疾病大鼠肾脏组织中存在PKC-α的蛋白及mRNA的过度表达,它可能参与妊娠期高血压疾病肾脏病理生理变化.