3M Petrifilm快速菌落总数测试片法与 食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2‒2010）的比较

摘要：目的 比较3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片（RAC）法与食品中菌落总数检测国标方法（GB 4789.2?2010）检测熟肉样品、人工污染熟肉样品中的菌落总数结果的一致性。方法 分别用两种方法对129份熟肉样品和166份人工污染熟肉样品进行菌落总数项目的检测,并对3MTM PetrifilmTM快速菌落测试片法与国标方法的实验结果进行配对资料t检验、线性回归分析以及对数值差值绝对值（|dlog|）汇总分析。结果 第一部分：两种方法检测熟肉样品、人工污染熟肉样品的菌落总数检测结果t=1.5704、P=0.1188,差异无统计学意义;相关系数R2值分别为0.897、0.964;|dlog|≤0.500所占百分比分别为97.7％、100.0％。第二部分：两种方法检测295份样品,t=1.1336,P=0.2586;相关系数R2=0.992;|dlog|≤0.500的结果百分率为99.0％。结论 在检测熟肉样品、人工污染熟肉样品时,3MTM PetrifilmTM快速菌落总数测试片法与国标方法检测结果的一致性较好。     

不同方法检测鸡蛋表面菌落总数的相关性研究

研究了ATP生物荧光检测法与国标法《GB4789.2-2010食品卫生微生物学检验菌落总数测定》检测鸡蛋壳表面细菌总数的相关性。采用ATP生物荧光检测法和国标法对40个混合样品表面细菌总数进行检测,以log CFU/个蛋壳为横坐标(x),以logRLU/个蛋壳为纵坐标(y),分别进行线性、对数、乘幂、指数拟合。结果表明,ATP荧光检测法与国标法检测结果 Pearson相关系数为0.912,线性模型y=0.7306x-1.0041(R2=0.8322)拟合度较高。该试验结果为ATP荧光检测法在鸡蛋壳表面细菌总数快速检测中应用的可行性提供了依据。     

TEMPO/TVC法与国标方法测定食品中菌落总数的比较研究

【目的】确证TEMPO/TVC计数食品中菌落总数的检测性能。【方法】使用TEMPO/TVC法和国标方法GB4789.2对熟肉制品、方便食品、速冻食品、膨化食品、糖果、糕点、调味品7类食品进行菌落总数测定。【结果】TEMPO/TVC法和国标方法检测食品中菌落总数的检测结果一致性较好(符合率95.4%);且两种方法检测7类食品样品的检测结果P值均大于0.05,无显著性差异。【结论】TEMPO/TVC法具有操作简便、快速、高效和人为误差小的特点,在日常检测中值得推广应用。     

ATP生物荧光法快速检测化妆品中菌落总数的研究

本文从快速检测的必要性出发,介绍了ATP生物荧光法及其原理,并针对某款化妆品通过一系列实验建立了一种快速检测菌落总数的方法。将该方法用于CTFA(美国化妆品香料香精协会,Cosmetic Toiletry and Fragrance Association)实验中,并通过与平板计数法结果进行比对,发现该方法可以有效的运用于样品细菌总数的快速检测。     

长江下游地区中国荷斯坦奶牛生乳中菌落总数的影响因素分析

【背景】随着人们生活水平和健康意识的提高,作为部分乳制品的原料,生乳的质量安全问题显得尤为重要。【目的】检测长江下游地区某集约化牧场中国荷斯坦奶牛生乳中菌落总数、总大肠菌群数的真实水平,同时对影响其变化的生理因素和环境因素进行探讨。【方法】以中国荷斯坦奶牛生乳为研究对象,用乳房炎快速诊断剂检测乳房炎感染情况,菌落总数、总大肠菌群数和环境细菌数的检测方法参照国家标准。对采集的生乳样本进行细菌常规分离鉴定,同时收集乳成分变化数据。【结果】多因素方差分析结果表明,不同泌乳阶段和不同产奶量对荷斯坦奶牛生乳中菌落总数的影响显著(P0.05)和极显著(P0.01);体况、泌乳阶段、胎次、产奶量及乳区对大肠菌群数均无显著影响(P0.05)。夏季生乳的菌落总数、大肠菌群数均极显著地高于其他季节(P0.01);场区内各牛舍的不同卫生环境及细菌数对菌落总数、大肠菌群数的影响均在显著以上(P0.05)。不同乳房炎的感染程度对菌落总数影响极显著(P0.01)。细菌鉴定结果是葡萄球菌属和杆菌属感染居多,链球菌属感染几乎没有。菌落总数的变化对乳蛋白率影响不显著(P0.05),对乳脂率的影响极显著(P0.01)。【结论】随机采样泌乳牛群的不同生理和病理状况、外界不同饲养条件及卫生环境对生乳中菌落总数和大肠菌群数有不同程度的影响,生乳的乳脂率与细菌总数变化负相关。     

利用实时定量PCR快速检测冷鲜猪肉新鲜度指标的方法研究

目前冷鲜猪肉新鲜度指标检测繁琐,探索快速检测冷鲜猪肉新鲜度指标新技术成为研究热点。利用国标法检测发性盐基氮(Total volatile basic n itrogen,TVB-N)含量,平板培养法和实时定量PCR技术分别检测腐败微生物数量。结果显示,冷鲜猪肉在4℃条件下,随储藏时间延长,微生物的菌落总数和TVB-N逐渐增加且呈线性相关,与猪肉品的腐败程度呈正相关;丙酮-氯仿法提取的细菌基因组条带清晰,提取效果好;基于SYBER GreenⅠ的实时定量PCR技术检测的菌落数量与平板培养测得菌落总数利用单因素方差分析结果没有显著性差异(P=0.7190),一致性较好;实时定量PCR方法缩短了检测时间,提高了检测灵敏度。微生物是冷鲜猪肉新鲜度评价的重要指标,实时定量PCR可以作为一种快速高效检测冷鲜猪肉新鲜度指标的新技术。     

尿内毒素定量检测对快速诊断革兰阴性菌导致的泌尿道感染的价值研究

目的研究尿内毒素定量检测与培养结果的一致性,及对于快速诊断革兰阴性菌导致的泌尿道感染的价值。方法采用动态浊度法鲎试验定量检测240份尿液中的内毒素含量,同时进行常规尿培养和鉴定,SPSS 16.0分析检测结果,采用t检验比较不同培养结果之间内毒素检测结果差异的显著性,Kappa值评价内毒素检测和培养结果的一致性。结果培养结果为革兰阴性菌生长的尿液标本,与革兰阳性菌或真菌生长及培养2 d无菌生长的标本内毒素定量检测结果的差异有统计学意义(t=11.98,t=12.00,均为P0.001);革兰阳性菌或真菌生长的尿液标本与培养2 d无菌生长的标本内毒素定量检测结果的差异无统计学意义(t=1.38,P=0.183)。结论尿内毒素定量检测对于快速诊断革兰阴性菌导致的泌尿道感染有着较好的应用前景。     

嗜水气单胞菌菌落多重PCR方法的建立及应用

[背景]嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对水产动物、畜禽和人类均有致病性。基因表达的溶血素、气溶素和肠毒素是重要毒力因子,在致病性嗜水气单胞菌早期检测及防治中尤为重要。目前采用菌落直接提取DNA用于多重PCR研究的相关报道较少。[目的]基于菌落PCR方法建立针对嗜水气单胞菌溶血性基因、肠毒素基因和16S rRNA基因特异性片段(5个基因片段)的多重PCR快速检测方法。[方法]采用选择性RS (Rimler-Shotts)培养基对样品中嗜水气单胞菌有效富集分离和辨认,建立并优化嗜水气单胞菌16S rRNA、ast、alt、aerA、act这5个基因的多重PCR方法,比较菌落PCR中DNA模板不同提取方法对多重PCR扩增结果的影响,并检测该方法对维氏气单胞菌、温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌的特异性。[结果]通过对RS培养基上单菌落的16S rRNA基因鉴定,初步判定嗜水气单胞菌和其他可培养菌的菌落形态,对其富集程度进行可视化辨别。多重PCR反应体系优化结果显示,引物浓度最优配比为16S rRNA:ast:alt:aerA:act=1:2:2:3:4。菌落PCR结果显示,...     

环介导等温扩增技术在食品中痢疾志贺氏菌快速检测

【目的】探讨、优化基于环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测常规食品中感染性痢疾志贺氏菌的方法。【方法】在NCBI数据库中搜索获取志贺氏菌的特异性基因高度保守区,设计3对LAMP反应引物,建立、优化该LAMP可视化检测方法,并评价其特异性、灵敏度,同时与PCR检测方法和传统检测方法对比,进行结果统计分析。【结果】5株志贺氏菌标准菌株样品均检测为阳性,11株非志贺氏菌标准菌株样品均检测为阴性,无交叉反应。最低检验限为1.6×101 CFU/反应(或1.6×101 CFU/m L),且经比较,LAMP检测灵敏度比PCR检测高出1个数量级。通过对161份实际样品和人工污染样品进行检测,LAMP检测与传统方法检测结果具有较高的一致性。【结论】LAMP具有检测过程快速简便、检测结果稳定、可靠的特点,适用于对常规食品中感染性痢疾志贺氏菌的高效、快速检测需求。     

某校大学生漱口杯卫生微生物状况的调查研究

目的了解大学生漱口杯卫生污染状况及其影响因素,为大学生疾病防控工作提供参考。方法随机抽取150名安徽理工大学大学生漱口杯样本并填写漱口杯使用习惯等相关调查表,采用倾注平板法和MPN法检测漱口杯菌落总数和大肠菌群。结果(1)调查人群中口腔牙龈经常出血者占26.00%,男女间差异无统计学意义(P0.05),牙龈出血与菌落总数超标之间存在着关联性(χ~2=4.528,r=0.174,P0.05);(2)150个漱口杯样本菌落总数超标率为60.00%,大肠菌群检出率为49.00%,大肠菌群严重超标率占大肠菌群检出的48.63%,菌落总数超标与大肠菌群检出率之间存在着关联性(χ~2=12.487,r=0.277,P0.01);(3)单因素分析显示:漱口杯材质、盛放物品样数、是否控干存放、牙刷头放置方向、刷牙水温度样本的菌落总数不合格率与大肠菌群检出率差异均分别具有统计学意义(Z=11.700、9.689、7.594、4.804、14.074;χ~2=3.870、4.120、4.410、6.387、8.100,P0.05);(4)Logistic回归分析表明漱口杯材质、刷牙水温度、使用次数/日是漱口杯菌落总数超标的影响因素。结论大学生口腔健康不容乐观,漱口杯污染状况严重且被忽视,造成其污染的因素是多方面的,应通过各种途径加强大学生关注漱口杯卫生的意识。     

可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌

【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual loop-mediated isothermal amplification,V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)方法快速检测原料乳中沙门氏菌的实效性。【方法】建立沙门氏菌LAMP反应体系和反应条件,对比V-LAMP和RF-LAMP两种方法的特异性、灵敏度、稳定性及其应用于实际样品检测的效用。【结果】采用V-LAMP和RF-LAMP方法检测沙门氏菌标准菌株,其结果均为阳性,检测非沙门氏菌标准菌株其结果均为阴性;该两种方法的检出限为13 CFU/mL,检测重复率均为100%;经检测10份人工污染样品,该两种方法的检测结果与实际结果高度一致;经检测73份实际样品,相对于标准方法,该两种方法其相对特异性分别为94.12%和92.65%,相对敏感度分别为100%和100%,相对准确率分别为94.52%和93.15%,一致性χ2值分别为2.25和3.20,与标准方法无明显差异(P>0.05)。【结论】V-LAMP和RF-LAMP方法检测特异性好、灵敏度高、稳定性好,适用于原料乳中沙门氏菌的快速检测。     

NADH荧光法快速检测细菌总数

基于细菌胞内NADH的荧光特性及其在胞内含量稳定的特性, 建立一种快速检测细菌总数的新方法。该荧光法的NADH检测限为1 nmol/L, NADH含量在10 nmol/L~0.2 mmol/L间与荧光强度呈良好线性关系(R2 =0.9905)。经离心获得菌体细胞, 热Tris-HCl法提取胞内NADH, 以 342 nm为激发波长, 461 nm为发射波长测定提取液荧光强度, 1 h内可检测到样品1×104 CFU/mL菌数。结果表明该方法快速、灵敏、简便、重复性好, 可适用于食品卫生与安全、环境检测等领域活细菌数量的定量检测。     

牛流行热病毒LUX~(TM)荧光RT-PCR检测方法的建立

采用LUXTM荧光PCR技术原理,以牛流行热病毒(BEFV)糖蛋白抗原G基因保守序列为模板设计特异荧光PCR扩增引物,建立BEFV LUXTM实时荧光RT-PCR快速检测方法。试验结果显示,所建立的荧光RT-PCR可特异检测牛流行热病毒RNA,而对蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻-粘膜病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛白血病病毒以及与BEFV同种属的狂犬病病毒核酸检测呈阴性反应。敏感性试验表明LUXTM荧光RT-PCR对BEFV RNA的检测敏感性比常规RT-PCR方法提高达100倍以上。该LUXTM荧光RT-PCR的批内检测变异系数0.64%-1.17%,批间检测变异系数均小于2%,表明检测体系稳定、重复性好。通过人工添加灭活病毒液的方法制备30份模拟感染牛血清样品,采用上述所建立的BEFV LUXTM荧光RT-PCR方法检测均呈阳性。     

DR-70~(TM)和CA50肺癌免疫测定的应用价值

目的 :评价DR 70 TM和CA5 0两种肿瘤标志物在肺癌检测中的价值。方法 :应用DR 70 TMELISA和CA5 0IRMA对77例肺癌患者 ,42例健康者及 48例其它肺癌者进行对照检测。结果 :各组DR 70 TMCA5 0测定值比例显示肺癌组平均值显著其它两组 (P <0 .0 1)。DR 70 TM检测的敏感性和有效性高于CA5 0检测 (83.1%比 6 6 .2 % ,85 .7%比 75 .6 % )。两项联合检测的敏感性 ,有效性分别为 96 .1% ,93.1% ,优于单项DR 70 TM 检测的 83.1% ,85 .7% ,及CA5 0的 6 6 .2 9%、75 .6 %。结论 :DR 70 TM在肺癌检测中有较大应用价值。DR 70 TM 和CA5 0两项联合检测是较理想的肺癌检测组合     

IMSA技术快速检测沙门氏菌方法的建立及应用

[目的]建立和评价一种快速、准确地检测食品中沙门氏菌的检测方法,对食品安全控制具有重要意义。[方法]应用等温多自配引发扩增技术(Isothermal Multiple Self-matching-initiated Amplification,IMSA),设计筛选出沙门氏菌的特异性基因inv A基因的IMSA引物,并建立检测沙门氏菌的IMSA法。对建立的方法进行特异性和灵敏度试验;确定人工污染样本能被该方法检出的最短增菌时间和最低检测灵敏度;利用IMSA法和培养法对13份食品样本进行检测,评价两者的一致性。[结果]该方法仅对沙门氏菌特异性扩增,灵敏度达3.02×10~2CFU/m L;人工污染样本最短培养6 h可被IMSA法检出,检出限为3.17CFU/25 g; 13份食品样本的IMSA法与培养法结果一致性为100%。[结论]IMSA技术检测沙门氏菌的灵敏度高、特异性强、结果准确,可在7h内完成食品中沙门氏菌的检测,适合用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

食品污染克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离及鉴定

[目的]对300份奶粉样品和50份非奶粉类食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测,并对分离得到的克罗诺杆菌进行鉴定.[方法]通过分子方法和9管法对奶粉和其他食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测;通过吲哚产生、丙二酸盐利用、卫矛醇、肌醇、松三糖和松二糖发酵产酸等六种生化试验对分离株进行鉴定;同时对分离株的16S rRNA基因序列进行同源性分析,通过N-J(Neighbour-Joining)法构建系统发育树.[结果]定量检测结果表明,350份样品中有23份样品分离出克罗诺杆菌,共分离到24株克罗诺杆菌,检出率为6.6％;23份受污染样品中有4个样品的克罗诺杆菌大于100 MPN/100g;24株克罗诺杆菌被鉴定到种或亚种,其中19株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);2株为丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus);2株为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp.lactaridi);1株为莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii).[结论]分子方法和9管法联用适合污染率低而定量检测要求高的克罗诺杆菌的奶粉调查;采用生化和分子生物学方法将24株分离株鉴定到种或亚种,其中阪崎克罗诺杆菌为优势种;奶粉中克罗诺杆菌的污染问题对婴幼儿安全存在隐患,应引起消费者和有关部门的重视.     

静注人免疫球蛋白(pH4)中抗-HBs效价双抗原夹心ELISA的验证

目的用双抗原夹心ELISA检测静注人免疫球蛋白(p H4)(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)中抗-乙型肝炎病毒表面抗体(HBs)效价并进行方法验证。方法依据2003年版《药品生产验证指南》,对用双抗原夹心ELISA进行专属性、重复性、中间精密度、线性、准确度、范围、耐用性的验证;并与放射免疫方法测定抗-HBs效价的结果进行比对。结果专属性验证中,6次独立试验的回收率在83.7%~101.1%区间内;重复性试验中10、40、80、160 IU/L 4个浓度的3次重复检测结果的RSD均<20%;中间精密度验证结果显示,两位分析人员不同时间各测定6次,检测结果的RSD=5.2%,均<20%。F检验显示,人员和时间两因素在α=0.05水平上对检测结果均无统计学意义(P=0.41>0.05,F=2.19);线性验证中,抗-HBs免疫球蛋白国家标准品和IVIG成品各重复3次的相关系数r分别为0.984 3、0.990 7、0.982 2、0.991 7、0.988 3、0.992 5,均>0.980 0;在准确度验证中,3次重复检测结果的回收率为84.10%~114.10%;耐用性结果显示,在试验加入终止液后0、3、6、9、12 min的测定结果均与0 min无统计学意义(Dunnett t test,α=0.05,P>0.05,t(3)=1.350.05,t=2.27)。结论经验证,用双抗原夹心ELISA检测IVIG中抗-HBs效价,其专属性、重复性、中间精密度、线性、准确性、范围和耐用性均符合要求,该方法准确可靠、简便快速,可替代放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)用于IVIG中抗-HBs效价的测定。     

R_(10)培养基

参照国际标准化组织3565号文件(1803565)所提供方法,用R_(10)和亚硒酸盐亮绿培养基检测食品样品(猪肉和蛋粉)中沙门氏菌,对两种培养基的增菌效果作了比较。结果R_(10)培养基从100份蛋粉中检出沙门氏菌22株,在250份猪肉中检出沙门氏菌126株。而     

近红外光谱仪快速检测油菜硫苷、芥酸及油份含量数学模型的建立

近红外反射光谱技术是一种高效、快速的现代分析技术,应用过程中需要建立相应的数学模型.收集油菜籽样品600余份,采用国际(家)标准方法对芥酸、硫苷、含油率进行测试,根据各模型的要求,选择不同的具有代表性的样品,建立数学模型.内部交叉证实法对模型验证结果显示:高芥酸、低芥酸、硫苷、含油率模型复相关系数分别为0.9677、0.9318、0.9820、0.9626,内部验证均方差(RMSECV)分别为4.41、2.24、4.62、0.543.外部样品检测法分别用已建模型和国际(家)标准方法对油菜籽样品芥酸、硫苷、含油率进行检测,两者检测结果基本一致.综合内部和外部验证结果表明:建立的模型能够满足油菜籽硫甘、芥酸及油份含量快速检测的要求.另对油菜自身含水率对数学模型的影响做了初步探索.     

羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血造血干细胞的临床优势分析

目的:探讨羟乙基淀粉沉淀(HES)法分离脐血单个核细胞(MNCs)的效果。方法:采集脐血31份,应用羟乙基淀粉(HES)沉淀飞和密度离心(Ficoll)法分离脐血MNCs,、纯化CD3+细胞、CD14+细胞、CD34+细胞,以台盼蓝拒染法检测细胞活力。结果:HES法MNCs回收率、CFU-GM计数高于Ficoll法(85.29±3.79 VS 47.06±4.61,t=35.67,P0.05;67.31±11.57/l×105MNCs VS28.54±6.39/l×105MNCs,t=16.33,P0.05);HES法分离的MNCs中CD3+、CD14+、CD34+细胞数均高于Ficoll法(t=5.76,t=2.51,t=6.67,P0.05)。结论:HES法分离MNCs可获得较好的回收率,是人脐血干细胞理想的分离方法。