探究靶向FTO下调的miRNA及其对乳腺癌细胞生物学行为的调节

该文筛选了靶向抑制FTO的miRNA并探究其乳腺癌细胞生物学行为的影响。通过生物信息学的方法筛选出了影响乳腺癌患者生存的m6A去甲基化酶FTO后,再通过CCK-8实验验证了FTO的下调能够抑制乳腺癌细胞的增殖,随后预测出靶向FTO的miRNA—miR-504-5p,RT-qPCR和Western blot实验检测了乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中miRNA-504-5p对FTO表达水平的影响,双荧光素酶报告基因实验验证了miRNA-504-5p与FTO的结合关系,采用CCK-8、Transwell小室实验、流式细胞术等探究了miRNA-504-5p mimic(类似物)通过调控FTO对乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期的影响。实验结果表明,低表达FTO的乳腺癌患者相较于高表达FTO的乳腺癌患者具有更高的生存概率,miRNA-504-5p作为潜在的靶向FTO的miRNA,能够在mRNA与蛋白水平抑制FTO的表达,并且miR-504-5p在FTO 3'-UTR的5 927–5 933位点处与FTO靶向结合,miR-504-5p能通过下调FTO抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移并促进乳腺癌细胞的凋亡,使细胞阻滞在G_0/G_1期。综上所述,该研究发现了miR-504-5p能下调FTO的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移,促进乳腺癌细胞的凋亡,使乳腺癌细胞的细胞周期阻滞。这可以为乳腺癌的分子机制探究与治疗提供潜在的参考价值。     

miR-106b-5p靶向调控SIRT7/SMAD4信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和迁移的影响机制探究

该文探讨了miR-106b-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其机制。采用qRT-PCR检测OSCC组织与细胞系中mi R-106b-5p表达情况,将SCC15、OECM1细胞分为Control组、miR-NC组、miR-106b-5p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p、anti-miR-106b-5p+si-NC组、anti-miR-106b-5p+si-SIRT7组,分别检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力, Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、SIRT7、SMAD4蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因实验与RIP实验验证miR-106b-5p与SIRT7的靶向关系。结果显示, miR-106b-5p在OSCC组织与细胞中表达水平升高(P<0.05),过表达mi R-106b-5p可显著促进OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,抑制miR-106b-5p表达可显著抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实, miR-...     

LncRNA UNC5B-AS1对肺癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响及其机制*

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)UNC5B-AS1调控miR-218-5p的表达影响肺癌细胞黏附、侵袭和迁移及其作用机制。方法:选取2017年6月至2019年6月在重庆三峡中心医院肿瘤科经手术切除的20例肺癌患者癌组织和对应癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺癌组织和癌旁组织及其支气管上皮细胞HBE和不同肺癌细胞A549、H1437、H1975、H1299和H460中UNC5B-AS1的表达。将UNC5B-AS1 siRNA转染至肺癌A549细胞,采用黏附实验、Transwell侵袭实验及划痕实验检测下调UNC5B-AS1对A549细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响;qRT-PCR和双荧光素酶报告基因检测实验鉴定UNC5B-AS1对miR-218-5p的靶向调控关系;Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达情况。结果:肺癌组织和细胞中UNC5B-AS1表达显著高于癌旁组织和支气管上皮细胞(P＜0.05),UNC5B-AS1在肺癌A549细胞中的表达量最高(P＜0.05)。下调UNC5B-AS1的表达能够抑制A549细胞黏附、侵袭和迁移能力(P＜0.05)。qRT-PCR和双荧光素酶报告基因检测结果表明UNC5B-AS1能靶向调控miR-218-5p的表达。下调UNC5B-AS1可抑制E-cadherin蛋白表达,促进Vimentin和Twist蛋白表达。结论:lncRNA UNC5B-AS1通过靶向调控miR-218-5p的表达促进肺癌细胞黏附、侵袭和迁移,其作用机制可能与促进EMT的发生有关。     

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。     

NOK在骨肉瘤细胞系MG63 EMT过程中的作用

目的:通过对比和检测人正常成骨细胞系hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系MG63中NOK以及EMT标志性分子E-cadherin、Vimitin的mRNA和蛋白表达量,并观察NOK对骨肉瘤细胞系MG63中EMT标志性分子E-cadherin及Vimitin的mRNA和蛋白表达量的影响,探讨NOK在骨肉瘤细胞系MG63 EMT过程中的作用。方法:qRT-PCR、Western blot法检测人正常成骨细胞系hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系MG63中NOK、E-cadherin、Vimitin的mRNA和蛋白表达量;构建慢病毒并干扰骨肉瘤细胞系MG63中NOK表达,qRT-PCR、Western blot法检测干扰NOK前后EMT标志性分子E-cadherin及Vimitin的mRNA和蛋白表达。结果:相比于人正常成骨细胞系,NOK、Vimitin的mRNA和蛋白在骨肉瘤细胞系MG63中高表达,E-cadherin的mRNA和蛋白在骨肉瘤细胞系MG63中低表达。慢病毒干扰骨肉瘤细胞中NOK表达后,E-cadherin的mRNA和蛋白表达升高,Vimitin的mRNA和蛋白表达降低。结论:NOK具有促进骨肉瘤细胞系MG63发生EMT过程。     

circ_0001461靶向抑制miR-30a-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

摘要 目的：探讨circ_0001461对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及调控机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶反应（qRT-PCR）检测检测circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平。在U2OS和HOS细胞中转染sh-NC和sh-circ_0001461后,采用CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测增殖相关分子Ki-67 mRNA的表达水平,Western Blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。采用双荧光素酶报告基因检测circ_0001461和miR-30a-5p的结合情况。结果：circ_0001461在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织（P<0.05）,circ_0001461在骨肉瘤细胞U2OS和HOS中的表达水平均明显高于成骨细胞NHOst（P<0.05）。低表达circ_0001461能够抑制骨肉瘤细胞U2OS和HOS的增殖和增殖相关分子Ki-67的表达（P<0.05）;促进骨肉瘤细胞U2OS和HOS的凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。双荧光素酶结果显示circ_0001461能够靶向结合miR-30a-5p。低表达circ_0001461能够促进miR-30a-5p的表达（P<0.05）,circ_0001461和miR-30a-5p在骨肉瘤组织中的表达呈负相关（P<0.05）。在U2OS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p mimics后能够进一步加强单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P<0.05）;在HOS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p inhibitors后能够逆转单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P>0.05）。结论：circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达circ_0001461能够靶向促进miR-30a-5p的表达进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡。     

靶向调控AKT/mTOR信号通路对骨肉瘤细胞MG63增殖、凋亡、自噬及成骨分化的影响

该文探究靶向调控AKT/mTOR信号通路后,对人骨肉瘤细胞株(MG63)增殖、凋亡、自噬及成骨分化的影响并探讨其机制。RT-PCR检测在不同恶性程度骨肉瘤细胞中AKT、mTOR基因表达的情况;选择靶向mTOR信号通路的抑制剂雷帕霉素和激活剂3-苄基-5-(2-硝基苯氧甲基)-γ-丁内酯(3-BDO),分别用CCK-8检测细胞增殖;DAPI染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡;碱性磷酸酶(ALP)染色检测早期成骨能力;茜素红染色检测中晚期成骨能力;Western blot技术检测自噬相关蛋白及分化抑制因子(Id1)表达。结果显示,AKT/mTOR表达情况与骨肉瘤恶性程度有关;通过靶向抑制AKT/mTOR信号通路后,可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖,促进凋亡,上调自噬水平,抑制其早、晚期成骨分化;靶向激活AKT/mTOR信号通路后,对骨肉瘤细胞MG63增殖、凋亡无明显影响,下调自噬水平,但可促进其早、晚期成骨分化。该研究表明,靶向调控AKT/mTOR信号通路与分化抑制因子(Id1)表达有关,可进一步阐明骨肉瘤发病机制,为诱导分化治疗提供理论依据。     

长链非编码RNA IFNG-AS1靶向miR-19b-1-5p调控oxLDL诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡的机制研究

为了探讨长链非编码RNA干扰素活化基因的反义核糖核酸(lncRNA IFNG-AS1)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人脐静脉血管内皮细胞EVC-304增殖、凋亡的影响和调控机制,该研究采用100μg/mL的oxLDL分别处理转染si-IFNG-AS1、miR-19b-1-5p mimics或共转染si-IFNG-AS1与anti-miR-19b-1-5p的EVC-304细胞,利用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中IFNG-AS1和miR-19b-1-5p表达,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、多肿瘤抑制基因1(P16)、剪切的DNA修复酶(cleaved-PARP)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达情况;利用双荧光素酶报告基因实验验证IFNG-AS1和miR-19b-1-5p的靶向关系。结果显示,oxLDL促进了EVC-304细胞中IFNG-AS1的表达,而抑制了miR-19b-1-5p的表达(P<0.05);抑制IFNG-AS1或过表达miR-19b-1-5p提高了oxLDL处理的EVC-304细胞增殖活性及细胞中P21和P16蛋白表达,而降低了细胞凋亡率及cleaved-PARP和cleaved-caspase-3的蛋白表达(P<0.05);抑制miR-19b-1-5p逆转了抑制IFNG-AS1对oxLDL处理的EVC-304细胞增殖和凋亡的影响(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实IFNG-AS1靶向调控miR-19b-1-5p表达。这提示抑制IFNG-AS1表达可促进oxLDL处理的EVC-304细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其作用机制与靶向上调miR-19b-1-5p表达有关,IFNG-AS1/miR-19b-1-5p轴可能为动脉粥样硬化的治疗提供新的靶点。     

miR-24-3p对宫颈癌细胞增殖与迁移的作用及机制研究

该文探讨了miR-24-3p对宫颈癌细胞增殖和迁移的促进作用及其机制。采用miR-24-3p抑制剂下调宫颈癌细胞中miR-24-3p的表达后,通过MTT、Transwell实验和Western blot检测细胞增殖、迁移和PCNA蛋白水平;采用生物信息学方法预测miR-24-3p的靶基因并进行功能注释和筛选;双荧光素酶报告实验和Western blot验证靶基因类血管动蛋白-2(angiomotin-like 2,AMOTL2),并通过siRNA抑制AMOTL2检测其对宫颈癌细胞迁移的影响。结果显示,下调miR-24-3p能抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移能力并减少PCNA蛋白表达;其靶基因主要存在细胞与细胞连接组分中,显著富集于蛋白激酶活性分子功能、蛋白质自身磷酸化生物学过程和癌症中microRNA信号通路;miR-24-3p能靶向负调控最佳靶基因AMOTL2,下调AMOTL2可促进宫颈癌细胞CaSki的迁移。总之,miR-24-3p可调控多靶基因参与多个生物学过程和多条信号通路,在宫颈癌中可促进细胞增殖且通过靶向AMOTL2促进迁移。     

miR-598 对结直肠癌细胞转移潜能的影响

目的:探讨miR-598在结直肠癌转移中的作用和分子机制,为寻找新的结直肠癌治疗靶标提供理论依据。方法:收集30对人结直肠癌及癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测miR-598的表达,采用Transwell和划痕实验确定miR-598对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,利用在线靶基因预测软件,筛选出miR-598可能的下游靶基因Jagged 1(JAG1),利用Western blot及双荧光素酶报告基因实验检测miR-598对JAG1及上皮间质转化标志物(Vimentin及E-cadherin)表达的影响。结果:与正常肠黏膜组织对比,miR-598在结直肠癌组织中的表达水平明显降低;miR-598显著抑制结直肠癌细胞的侵袭及迁移能力;分子机制分析证实miR-598能够作用于JAG1的3'-UTR并抑制其表达;过表达miR-598显著下调Vimentin的表达水平,而提高E-cadherin的表达水平。结论:miR-598在人结直肠癌中表达明显下调;miR-598通过靶向调控靶基因JAG1的表达,抑制结直肠癌细胞EMT,从而有效的抑制了结直肠癌细胞的侵袭和迁移。     

细胞周期蛋白依赖性激酶在miR-193a5p调控卵巢癌细胞增殖及上皮细胞间充质转变中的作用*

目的: 探讨miR-193a-5p靶向CDK14并调控卵巢癌细胞OVAC的增殖和上皮间充质转变(EMT)的作用。方法: 通过TargetScanHuman分析miR-193a-5p与CDK14的匹配情况,通过荧光素酶报告系统检测miR-193a-5p靶向CDK14情况;在miR-193a-5p mimics过表达或者miR-193a-5p inhibitor基因沉默miR-193a-5p的情况下,采用免疫印迹检测CDK14,EMT相关蛋白质E-cadherin、vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达量,采用CCK-8检测卵巢癌细胞OVAC增殖情况, MMT检测卵巢癌细胞OVAC的细胞活力。结果: miR-193a-5p靶向CDK14的3‘UTR;过表达miR-193a-5后, CDK14的表达下降,EMT相关蛋白质E-cadherin的表达上升,vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达下降,卵巢癌细胞OVAC的增殖和细胞活力均增加;同时,基因沉默miR-193a-5p后, CDK14的表达上升,EMT相关蛋白质E-cadherin的表达下降,vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达量上升,卵巢癌细胞OVAC的增殖和细胞活力均减少。结论: miR-193a-5p通过靶向CDK14的3‘UTR降低卵巢癌细胞OVAC的增殖、细胞活力和EMT。     

SIK1作为miR-93新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

该文探讨了SIK1作为miR-93新的靶基因对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。采用重组质粒pcDNA3.1-SIK1上调前列腺癌细胞中SIK1的表达后,利用CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖;利用细胞划痕和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;利用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的蛋白表达。采用生物信息学方法预测靶向SIK1 mRNA的3’UTR的miRNAs并进行筛选;双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-93靶向调控SIK1。结果显示,上调SIK1的表达能抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并增加E-cadherin和减少Vimentin蛋白表达;miR-93能够靶向负调控SIK1。总之,SIK1可作为miR-93一个新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。     

果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)过表达对骨肉瘤细胞恶性逆转并向成骨分化的影响

该研究探讨FBP1对人骨肉瘤MG63细胞恶性生物学行为即增殖、凋亡、迁移及成骨分化的调控作用。采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至人骨肉瘤MG63细胞中,并通过qRT-PCR和Western blot法检测FBP1的m RNA和蛋白表达水平,以验证FBP1基因过表达效果。通过CCK-8、结晶紫染色、活细胞计数法检测细胞增殖; AnnexinV-FITC双染法和DAPI染色法检测细胞凋亡,并通过Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达;应用细胞划痕实验、Transwell检测细胞的迁移能力;通过流式细胞术检测细胞周期; ALP染色和茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化作用。结果表明,过表达FBP1后增殖细胞数明显降低(P0.01)、凋亡率明显增高(P0.01)、划痕实验愈合率明显降低(P0.01)、Transwell实验细胞穿膜数也明显减少(P0.01);成骨诱导MG63细胞后ALP染色、茜素红染色阳性,钙盐结节明显增多;但3个组的细胞周期并无明显差异。综上所述,过表达FBP1可抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖,抑制迁移,促进其凋亡,并同时促进MG63细胞的早期和晚期成骨分化,且其增殖并非通过细胞周期调节。     

miR-34a-5p对三阴性乳腺癌细胞的影响及相关机制研究*

目的: 探讨miR-34a-5p在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达,分析miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的作用,对TNBC荷瘤小鼠肿瘤生长的影响以及在TNBC中对B7-H1表达的影响。方法: 利用RT-qPCR、Western blot分析TNBC细胞中miR-34a-5p、B7-H1的表达,并利用Kaplan-Meier分析二者的表达与TNBC患者的生存关系;将miR-34a-5p转染TNBC细胞,通过CCK-8、流式细胞术及划痕实验检测miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的影响;利用RT-qPCR、Western blot检测miR-34a-5p、B7-H1表达水平的变化,双荧光素酶基因报告验证miR-34a-5p与B7-H1的相互作用;利用RT-qPCR、Western blot、IHC检测miR-34a-5p对MDA-MB-231荷瘤小鼠miR-34a、B7-H1表达的影响。结果: TNBC细胞中miR-34a-5p呈低表达,B7-H1呈高表达,二者均与TNBC患者的不良预后有关,差距具有统计学意义(P<0.01);miR-34a-5p抑制TNBC细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,并且在TNBC细胞中靶向抑制B7-H1;miR-34a-5p agomir在体内抑制MDA-MB-231成瘤裸鼠的肿瘤生长和B7-H1表达。结论: miR-34a-5p在TNBC发生、发展中发挥着重要作用,靶向miR-34a-5p/B7-H1可能成为TNBC患者新的分子治疗策略。     

miR-252-5p通过靶向调控保幼激素酸甲基转移酶基因JHAMT的表达而影响果蝇变态发育

【目的】保幼激素酸甲基转移酶(juvenile hormone acid methyl transferase, JHAMT)是保幼激素(juvenile hormone, JH)合成通路中的关键限速酶。本研究旨在筛选并验证靶向调控黑腹果蝇Drosophila melanogaster JHAMT转录表达的miRNA,揭示miRNA在JH生物合成中的作用机理。【方法】首先通过miRanda, TargetScan和microT-CDS在线网站对靶向黑腹果蝇JHAMT的miRNA进行预测,取3个网站均能预测到的miRNA作为候选靶向JHAMT的miRNA;利用双荧光素酶系统对候选miRNA与JHAMT的靶向关系进行验证;qRT-PCR检测候选miRNA与JHAMT在黑腹果蝇生长发育中的表达模式;利用qRT-PCR和果蝇GAL4-UAS系统分别检测黑腹果蝇咽侧体中超表达miRNA对JHAMT的表达以及对黑腹果蝇变态发育的影响。【结果】 miRanda, TargetScan和microT-CDS分别预测到5, 18和16个靶向JHAMT的miRNA,共同预测到4个miRNA,分别是miR-252-5p, miR-277-3p, miR-1002-5p和miR-987-5p。双荧光素酶检测结果表明,miR-252-5p mimics可显著降低野生型JHAMT 3′UTR荧光素酶报告基因载体所表达的荧光素酶活性,而JHAMT 3′UTR区中miR-252-5p结合位点突变后,该抑制作用被解除。qRT-PCR检测结果表明,miR-252-5p与JHAMT在黑腹果蝇卵、幼虫及预蛹期的转录表达模式相反。咽侧体中超表达miR-252后,可显著降低JHAMT和JH初级反应基因Kr-h1的表达水平;且表现出类似JH缺失的表型,如化蛹时间推迟、体重变轻以及蛹期死亡增加。【结论】miR-252-5p可通过靶向作用于JHAMT参与JH生物合成调控,从而影响果蝇变态发育。     

miR-1271-5p靶向PDK1促进胃癌细胞凋亡

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌的作用和可能的作用机制。方法 RT-qPCR和原位杂交法检测胃癌组织和胃癌细胞株中miR-1271-5p的表达。Lipofectamine 2000转染miR-1271-5p mimics后,噻唑蓝（MTT）法和台盼蓝染色法检测SGC-790细胞的活性,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,JC-1探针检测线粒体膜电位,Western blot检测PDK1/Akt/凋亡信号相关蛋白的表达。荧光素酶法以及功能修复实验评估miR-1271-5p与PDK1的靶向关系。结果 胃癌组织和细胞中miR-1271-5p的表达降低。转染miR-1271-5p mimics后,SGC-790细胞的存活率下降,凋亡率上升,线粒体膜电位以及Bcl-2和p-AKT表达降低,Bax和Cleaved caspase-3表达增高。PDK1为miR-1271-5p的靶基因,过表达PDK1能逆转miR-1271-5p对胃癌细胞的促凋亡作用。结论 过表达miR-1271-5p可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与其靶向PDK1进而抑制AKT信号活性有关。     

miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的: 探讨miR-670-5p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其调控WW结构域氧化还原酶基因(WWOX)的机制。方法: 收集2016年1月至2017年10月收治的28例肺癌组织和对应癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中miR-670-5p的表达水平。将肺癌细胞A549分为anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-670-5p组(转染anti-miR-670-5p)、anti-miR-670-5p+si-NC组(转染anti-miR-670-5p与si-NC)、anti-miR-670-5p+si-WWOX组(转染anti-miR-670-5p与si-WWOX)。转染48 h后,RT-qPCR或蛋白质印记(Western blot)检测转染效果。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测P21、上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-670-5p和WWOX的靶向关系。结果: 肺癌组织中miR-670-5p的表达水平较癌旁组织显著升高(P＜0.05)。抑制miR-670-5p可抑制MMP-2蛋白表达(P＜0.05),促进P21和E-cadherin表达(P＜0.05),抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.05)。WWOX是miR-670-5p的靶基因,miR-670-5p负调控WWOX表达。抑制WWOX可部分逆转anti-miR-670-5p对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P＜0.05)。结论: miR-670-5p通过靶向WWOX能够促进肺癌细胞增殖、迁移、侵袭。     

miR-193a-5p促进人胰腺癌细胞体外迁移和侵袭作用的研究

该研究主要探讨了微小核酸mi RNA-193a-5p对人胰腺癌细胞体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-193a-5p模拟物及mi R-193a-5p抑制剂分别上调和下调miR-193a-5p的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测mi R-193a-5p对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用TargetScan 7.1数据库预测miR-193a-5p的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-193a-5p的靶基因; Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明, miR-193a-5p可显著促进细胞的迁移和侵袭能力。TargetScan 7.1软件预测, Prox1可能为mi R-193a-5p的靶基因,荧光素酶报告实验显示, miR-193a-5p靶向Prox1基因的3′UTR区。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示, miR-193a-5p下调了Prox1的mRNA和蛋白水平的表达。研究结果揭示,在胰腺癌中高表达的miR-193a-5p通过下调Prox1,从而使胰腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进胰腺癌的转移。     

8-氯腺苷通过ADAR1调控miR-335-5p抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

该文探讨了8-氯腺苷(8-chloro-adenosine, 8-Cl-Ado)调控RNA编辑酶1(adenosine deaminases acting on RNA1, ADAR1)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,确定了ADAR1与miR-335-5p表达的相关性。10μmol/L的8-Cl-Ado作用于乳腺癌细胞后(不同时间点),采用CCK-8检测细胞的增殖情况; Transwell检测细胞的迁移和侵袭情况; Western blot检测ADAR1蛋白的表达水平;CCK-8检测ADAR1过表达对8-Cl-Ado抑制乳腺癌细胞增殖的影响; Transwell检测ADAR1过表达对8-Cl-Ado抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响; miRNA芯片筛选8-Cl-Ado处理后乳腺癌细胞中上调的miRNA, qRT-PCR验证其与ADAR1的相关性。结果显示, 8-Cl-Ado能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭; ADAR1蛋白的表达量随8-Cl-Ado处理时间的增加而逐渐降低; ADAR1的过表达能减弱8-Cl-Ado对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用; miR-335-5p经8-Cl-Ado处理后表达水平上调,与ADAR1呈负向调控关系。以上结果表明, 8-Cl-Ado下调ADAR1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与ADAR1下调mi R-335-5p有关。     

抑制Notch信号通路联合沉默Id1对骨肉瘤恶性生物学行为及成骨分化的影响

该研究探讨了抑制Notch信号通路联合沉默Id1对人骨肉瘤细胞MG63的恶性生物学行为及成骨分化的影响。采用Notch信号通路抑制剂DAPT、沉默Id1重组腺病毒分别或联合处理MG63细胞,采用Western blot检测分组处理MG63细胞后Notch1、Jagged1、Id1蛋白的表达;CCK8检测分组处理后MG63增殖能力;流式细胞术检测分组处理后MG63细胞凋亡水平;划痕实验和Transwell检测分组处理后MG63细胞迁移和侵袭能力;碱性磷酸酶、茜素红染色分别检测分组处理后MG63细胞早期、晚期成骨分化能力。结果表明,DAPT处理MG63细胞后,Notch1、Jagged1蛋白表达下调(P0.05),可有效抑制MG63细胞中Notch信号通路活性;抑制MG63细胞中Notch信号通路后Id1蛋白水平表达下降,抑制MG63细胞中Notch信号通路联合沉默Id1后Id1蛋白表达水平最低(P0.05);抑制MG63细胞中Notch信号通路后细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,凋亡水平增加和早期成骨分化能力减弱(P0.05);抑制MG63细胞中Notch信号通路联合沉默Id1后细胞增殖、迁移、侵袭能力进一步减弱,凋亡水平最高,早期、晚期成骨分化能力增强(P0.05)。综上所述,抑制Notch信号通路可减弱MG63细胞恶性;抑制Notch信号通路联合沉默Id1后可进一步减弱MG63细胞恶性,促进其成骨分化。