缺氧对大鼠脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨缺氧对大鼠脑微血管内皮细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:从2周龄的SD大鼠中提取脑微血管内皮细胞。体外模拟脑缺氧微环境,将体外培养的脑微血管内皮细胞分别置于常氧(21%O_2)和低氧环境(1%O_2)下处理6、12和24小时,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观测不同时间点细胞增殖能力的变化;用AnnexinV-FITC/PI双标流式细胞术观察不同时间点细胞凋亡情况;Real time-PCR和Western blot法检测细胞中(Hypoxia-inducible factor-1α) HIF-1αm RNA和蛋白的表达。进一步使用HIF-1αsi RNA靶向沉默HIF-1α基因,再检测低氧环境下HIF-1αm RNA和蛋白表达、细胞增殖以及凋亡水平的变化。结果:随着低氧处理时间的延长,大鼠脑微血管内皮细胞的增殖能力被显著抑制,同时凋亡水平显著增加,HIF-1αm RNA和蛋白表达水平显著升高。使用HIF-1αsi RNA特异性阻断HIF-1α表达后,低氧环境下HIF-1αm RNA和蛋白表达明显降低,同时细胞活性增加,细胞凋亡率显著下降。结论:缺氧微环境能够通过上调HIF-1α的表达抑制大鼠脑微血管内皮细胞增殖并促进其凋亡。     

HIF-1α/VEGF在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系

目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)在稽留流产患者绒毛组织中的表达及其与微血管密度的关系。方法:采用免疫组织化学方法分别检测了30例人工流产和30例稽留流产患者绒毛组织的微血管密度(MVD)、HIF-1α和VEGF的表达。分别在缺氧(1%O_2、5%CO_2和94%N_2)和常氧(20%O_2、5%CO_2和75%N_2)条件下培养HTR8/SVneo细胞,并通过转染HIF-1αsi RNA来敲低HIF-1α。通过q RT-PCR和Western blot分析HTR8/SVneo细胞中HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白表达。此外,通过小管形成实验评价缺氧及转染HIF-1αsi RNA对HTR8/SVneo细胞小管形成的影响。结果:稽留流产组织样本中的MVD显著低于人工流产(7.22±0.55 vs 14.65±1.12,P0.05)。HIF-1α和VEGF在稽留流产组织中的表达显著低于人工流产组织(P0.05)。HIF-1α和VEGF的表达均与MVD显著正相关。与常氧相比,缺氧可显著上调HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白水平(P0.05)。转染HIF-1αsi RNA显著下调HIF-1α和VEGF的m RNA和蛋白水平(P0.05)。与常氧相比,缺氧可显著促进HTR8/SVneo细胞的小管形成(P0.05),而转染HIF-1αsi RNA则可显著抑制显HTR8/SVneo细胞的小管形成(P0.05)。结论:胎盘发育过程中的缺氧环境丢失及HIF-1α/VEGF的抑制可能是稽留流产发病的一项机制。     

卵巢癌组织中UHRF1蛋白的表达及其与卵巢癌细胞增殖和侵袭的关系

目的:研究卵巢癌组织中泛素样含PHD和环指域1(Ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1)蛋白的表达及UHRF1对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:选取卵巢癌组织和癌旁正常组织,采用蛋白印迹法(Western blot)检测其UHRF1的蛋白表达。体外培养卵巢癌SKOV-3细胞株,分别转染UHRF1的si RNA和阴性对照si RNA,采用CCK-8检测细胞活力,Transwell检测细胞侵袭能力,荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测Cyclin D1、CDK6、MMP2和MMP9的m RNA表达。结果:卵巢癌组织中UHRF1蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P0.05);与转染阴性对照si RNA的SKOV-3细胞相比,转染UHRF1的si RNA的SKOV-3细胞活力明显降低、侵袭细胞数目明显减少(P0.05),且细胞中Cyclin D1、CDK6、MMP2和MMP9基因的m RNA表达水平显著降低(P0.05)。结论:UHRF1蛋白在卵巢癌组织中呈高表达状态,且可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭。     

HIF-2α/Notch3通路介导CoCl_2诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭

本研究旨在探究HIF-2α和Notch3在CoCl_2诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭中的作用。使用CoCl_2于体外建立化学性低氧模型;采用sh RNA技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α和Notch3基因;采用RT-PCR法检测MCF-7细胞中HIF-2α、Notch3和Hey1的m RNA水平;采用Western blot方法检测MCF-7细胞中HIF-2α、Notch3、Hey1、Snail和E-cadherin蛋白的表达水平;采用划痕实验和Transwell实验分别检测CoCl_2诱导的MCF-7细胞迁移和侵袭。结果显示,CoCl_2处理可使MCF细胞中HIF-2α、Notch3、Hey1和Snail蛋白表达水平升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平下降(P0.05),促进MCF-7细胞迁移和侵袭(P0.05);沉默HIF-2α基因表达可抑制CoCl_2诱导的Notch3和Hey1的m RNA和蛋白表达(P0.05);抑制Notch3基因表达后,CoCl_2诱导的MCF-7细胞迁移和侵袭以及CoCl_2对Snail和E-cadherin蛋白表达的调节随之受到抑制(P0.05)。以上结果表明,在CoCl_2化学性低氧环境下,HIF-2α可通过强化Notch3信号通路,进而导致Snail蛋白水平升高和E-cadherin蛋白水平下降,最终提高乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。     

人巨细胞病毒US28基因通过HIF-1α途径促进结肠癌细胞的迁移、侵袭

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)的US28基因在结肠癌内呈高表达趋势且与淋巴结转移、Dukes分期进展密切相关,癌细胞过度的迁移和侵袭是造成淋巴结转移、Dukes分期进展的重要物学环节,US28基因表达的变化提示US28可能参与了结肠癌细胞迁移、侵袭的调控,但具体的作用及机制均未阐明。为研究HCMV US28基因促进结肠癌细胞迁移、侵袭的作用及机制,本研究培养结肠癌COLO205细胞株并分组,阴性对照组(NC组)用不含药物和质粒的DMEM处理,空白对照质粒组(NC质粒组)转染空白的pcDNA3.1质粒,US28质粒组转染过表达US28基因的pcDNA3.1质粒,US28质粒+YC-1组转染过表达US28基因的pcDNA3.1质粒、同时加入缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的抑制剂YC-1。检测细胞的迁移活力、侵袭活力、细胞中HIF-1α及下游迁移基因(HIF-1α、Snail)、侵袭基因(MMP1、MMP9)的表达量。结果显示,与NC组、NC质粒组比较,US28质粒组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目及细胞中HIF-1α、Snail、MMP1、MMP9的蛋白表达水平均明显增多(P0.05),细胞中E-cadherin、TIMP2的蛋白表达水平均明显减少(P0.05);与US28质粒组比较,US28质粒+YC-1组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目及细胞中HIF-1α、Snail、MMP1、MMP9的蛋白表达水平明显减少(P0.05),细胞中E-cadherin、TIMP2的蛋白表达水平均明显增多(P0.05)。综上,HCMV US28基因能够促进结肠癌细胞的迁移、侵袭且该作用与激活HIF-1α途径、调节下游迁移及侵袭基因表达有关。     

MFN1在肝癌转移中的调控作用研究

目的:探讨线粒体融合蛋白MFN1(mito-fusion 1)在肝癌转移中的作用及其机制。方法:1).采用免疫组化实验检测15对肝癌转移灶组织与原发灶组织中MFN1的表达,以明确肝癌转移时是否伴有MFN1表达的改变。2).采用si RNA (small interference RNA)下调肝癌细胞中MFN1的表达后,提高Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测其迁移和侵袭能力,通过实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot实验分别检测基质金属蛋白酶1 (matrix metalloproteinase 1,MMP1)、MMP2、MMP7及MMP9的m RNA和蛋白表达。结果:1)肝癌转移灶组织中MFN1表达显著低于原发灶组织(P0.05)。2).下调MFN1表达后,肝癌细胞的迁移和侵袭能力显著升高,MMP7的表达显著增加,而MMP1、MMP2与MMP9的表达无明显变化。结论:线粒体融合蛋白MFN1在肝癌转移组织中表达显著降低,可能通过激活MMP7表达,促进肝癌细胞侵袭和转移。     

沉默NHE1抑制胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭能力

钠氢交换蛋白1(sodium hydrogen exchange protein,NHE1)是调控细胞内酸碱平衡的膜蛋白。本研究旨在探究NHE1蛋白的表达对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭影响。首先采用Matrigel-transwell侵袭实验比较胶质母细胞瘤U87和U251的侵袭能力,并分别分选出两细胞株强、弱亚群;采用反转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)检测U87和U251细胞以及两细胞株强、弱亚群中NHE1 m RNA水平;然后采用靶向NHE1 m RNA的si RNA(si-NHE1)和si RNA阴性对照(si-NC)分别转染U87细胞,RT-q PCR法和蛋白质免疫印迹实验检测两组中NHE1 m RNA和蛋白水平;Transwell实验检测两组细胞的迁移和侵袭能力。结果显示U87细胞的侵袭能力强于U251细胞,NHE1 m RNA在U87细胞表达量是U251细胞中的50.08倍,NHE1 m RNA在两种细胞株的强侵袭性亚群中的表达量分别是弱侵袭性亚群的19.8倍和62.3倍,差异均具有统计学意义(p0.05)。转染si-NHE1可有效降低U87细胞内NHE1的m RNA和蛋白水平。迁移实验中si-NHE1组和si-NC组细胞穿过8μm微孔滤膜数目分别是(188.33±16.04)和(138.00±9.54);侵袭实验中两组细胞穿过数目分别是(207.33±16.56)和(119.67±9.61),两实验数据差异均具有统计学意义(p0.05)。以上研究表明,NHE1在胶质母细胞瘤中的表达呈异质性,其表达水平与胶质母细胞瘤细胞的侵袭能力能正相关。沉默NHE1可显著抑制胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭能力。本研究为解析胶质母细胞瘤的侵袭性生长的特性和临床治疗胶质母细胞瘤提供了新的思路。     

低氧诱导因子-1α在低氧促成肌细胞增殖中的作用

目的:探讨低氧对大鼠骨骼肌成肌细胞(SkMs)增殖的影响及低氧诱导因子(HIF-1α)在低氧促成肌细胞增殖中的相关机制。方法:采用流式细胞仪观察了3、10%O2对SkMs细胞数量和增殖指数的影响;用RT-PCR方法检测了HIF-1αmRNA的表达,用Western blot方法检测了SkMs胞浆、胞核及总HIF-1α蛋白的水平。结果:低氧组较常氧组细胞数量和增殖指数增加(P0.05);HIF-1αmRNA、总蛋白水平在常氧组和低氧组中没有明显差异,常氧下胞浆中HIF-1α蛋白水平高于胞核内,低氧下HIF-1α蛋白水平在胞核内高于胞浆。结论:低氧能够促进SkMs增殖,HIF-1α可能是通过氧浓度调控的核转位的方式参与了低氧促SkMs的增殖。     

沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究BCAT1在肺癌细胞A549的增殖、迁移及侵袭能力中的作用。方法:通过小干扰RNA(si RNA)沉默A549细胞中BCAT1的表达,细胞分为对照组(Con)、BCAT1基因沉默组(si RNA-BCAT1)和si RNA阴性对照组(si RNA-NC)。利用Western blot检测si RNA对BCAT1的沉默效果;划痕愈合实验检测沉默BCAT1后A549细胞迁移能力的改变;Transwell小室侵袭实验检测沉默BCAT1后A549细胞侵袭能力的变化;MTT实验检测沉默BCAT1对A549细胞增殖能力的影响。结果:与Con组相比,si RNA-BCAT1组的BCAT1蛋白表达明显降低(P0.05),细胞划痕愈合率明显降低(P0.05),能够穿膜的细胞数明显减少(P0.05),而Con组和si RNA-BCAT1组细胞的增殖能力比较差异无明显统计学意义(P0.05)。结论:沉默BCAT1抑制A549细胞的迁移和侵袭能力,而对其增殖能力无影响。     

靶向沉默HIF-1α信号通路抑制百草枯中毒诱导的肺泡上皮细胞上皮间质转化

目的:探讨HIF-1α信号通路在百草枯(paraquat,PQ)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制。方法:使用20μmol/L浓度的百草枯溶剂对大鼠Ⅱ型肺泡上皮RLE-6TN细胞干预24 h,随后在倒置光学显微镜观察各组细胞形态学变化;用real-time PCR与Western blot法检测RLE-6TN细胞中HIF-1α、上皮表型标记蛋白E-cadherin及间质表型标记蛋白Vimentin的表达,Transwell侵袭实验检测各处理组细胞侵袭能力的改变;使用HIF-1α靶向si RNA抑制其表达后,进一步采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、E-cadherin和Vimentin的表达水平,Transwell法检测细胞侵袭能力变化。结果:体外百草枯溶液可显著诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞RLE-6TN细胞HIF-1α表达升高和上皮间质转化的发生,同时细胞的体外侵袭能力也增强。靶向沉默HIF-1α基因后,百草枯诱导的上皮间质转化过程被逆转,同时细胞侵袭能力显著减弱。结论:百草枯通过调控HIF-1α信号通路来诱导RLE-6TN细胞上皮间质转化的发生,进而促进肺纤维化的形成。     

MiRNA-155通过调控β-catenin促进结肠癌SW480细胞的侵袭

目的:探讨micro RNA-155(miR-155)对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响及其可能机制。方法:采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定结肠癌组织与邻近正常结肠组织中miR-155的表达。将miR-155 mimic和β-catenin特异性的siRNA(β-catenin si RNA)分别通过脂质体转染法转染入结肠癌SW480细胞,应用RT-PCR检测细胞中miR-155和β-catenin m RNA的表达,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测β-catenin蛋白表达,采用Transwell侵袭实验检测miR-155 mimic及β-catenin si RNA对SW480细胞侵袭能力的影响。结果:结肠癌组织中的miR-155的表达较邻近正常结肠组织明显升高(P0.05);miR-155 mimic可使β-catenin的m RNA和蛋白表达均显著升高(P0.05),同时可显著增强SW480细胞的侵袭能力(P0.05),而转染miR-155 mimic和β-catenin si RNA的SW480细胞侵袭能力较仅转染miR-155 mimic的SW480细胞显著减弱(P0.05)。结论:结肠癌组织中miR-155的表达上调,可能通过激活B-catenin信号通路促进肿瘤细胞的远处侵袭转移。     

急性低氧和间断低氧习服对HepG2细胞内血管内皮细胞生长因子基因表达的影响

目的:观察急性低氧和间断低氧习服对人HepG2细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及转录因子低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白含量的影响及其可能的生物学意义.方法:HepG2细胞随机分为常氧对照组,急性低氧组和间断低氧习服组.采用Northern blot和Western blot分别检测不同组别HepG2细胞内VEGF和HIF-1α mRNA表达和蛋白含量的变化.结果:急性低氧诱导HepG2细胞内VEGF和HIF-1α基因的转录,增加两种蛋白在细胞内的含量.间断低氧习服组的细胞内VEGF和HIF-1α的mRNA含量分别为常氧对照组细胞的(108.6±17.7)%和(116.74±19.8)%,与常氧对照组相比无显著差异(P＞0.05);而其蛋白表达的含量分别为对照组细胞的1.4和2.7倍,都明显低于急性低氧组细胞内两种蛋白的含量(P＜0.05).结论:HepG2细胞达到低氧习服状态后,抑制急性低氧对HepG2细胞内VEGF基因表达的促进作用,其中HIF-1α可能起着重要的调节作用.     

低氧后处理诱导的低氧诱导因子-1α表达上调减轻H9c2心肌细胞低氧/复氧损伤北大核心CSCD

本文旨在探讨低氧后处理(hypoxic postconditioning)对低氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致的心肌细胞损伤以及低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的影响,并分析二者之间可能的关系。利用H9c2心肌细胞株建立低氧/复氧和低氧后处理模型,通过测定细胞存活率、细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性及caspase-3活性来观察低氧/复氧造成的H9c2细胞的损伤,用Westernblot检测H9c2细胞内HIF-1α的蛋白水平,用real-timePCR检测细胞内HIF-1α的mRNA水平。结果显示,低氧后处理提高了低氧/复氧H9c2细胞的存活率,降低了LDH及caspase-3活性。同时,低氧后处理增加了H9c2细胞内HIF-1α的蛋白水平。预先利用HIF-1α脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG上调HIF-1α的蛋白水平后,由低氧/复氧导致的H9c2细胞的损伤明显减轻,其效应与低氧后处理完全一致。对H9c2细胞内HIF-1α蛋白水平与细胞存活率进行相关性分析,结果显示二者呈显著正相关(r=0.743,P<0.01);而运用siRNA方法抑制细胞内HIF-1α基因表达后,显著削弱了低氧后处理减轻低氧/复氧细胞损伤的效应。以上结果提示,HIF-1α表达上调是低氧后处理减轻细胞低氧/复氧损伤的机制之一。     

母牦牛生殖系统中低氧诱导因子基因的表达分析

低氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)和2α(Hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)是诱导低氧基因和修复细胞氧内环境的核心调节因子,为了研究生活在青藏高原牦牛的繁殖机能对低氧环境的适应机制,采集卵泡期的5头成年母牦牛和母黄牛的下丘脑、脑垂体、卵巢、输卵管和子宫组织,利用RT-qPCR技术检测HIF-1α和HIF-2αm RNA的表达量。结果表明:HIF-1αmRNA在牦牛输卵管中表达量最高,牦牛脑垂体和输卵管表达量极显著高于黄牛(P0.01)。HIF-2αmRNA在牦牛脑垂体表达量极显著高于黄牛(P0.01),在输卵管表达量显著高于黄牛(P0.05)。说明在低氧环境条件下,母牦牛可能通过调节生殖生殖系统中HIF-1α和HIF-2α基因的表达维持其繁殖机能。     

低氧促进肺腺癌A549细胞迁移的机制*

目的: 探讨低氧促进肺腺癌A549细胞迁移的机制。方法: 培养肺腺癌A549细胞,转染慢病毒获得稳定敲低ACC1的A549细胞株,转染si-RNA获得敲低SREBP-1的A549细胞。分别以低氧(5％ O₂)联合低氧诱导因子1α(HIF-1α)抑制剂PX-478(25 μmol)处理A549细胞,低氧联合亚油酸(LA)(20 μmol)处理敲低ACC1的A549细胞,低氧处理敲低胆固醇调节原件结合蛋白1(SREBP-1)的A549细胞。Transwell实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法检测HIF-1α、ACC1及上皮-间质转化(EMT)相关波形蛋白(Vimentin)及E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达与SREBP-1的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测低氧联合HIF-1α抑制剂PX-478(25 μmol)处理A549细胞后ACC1及SREBP-1 mRNA水平变化。每项实验重复三次。结果: 与常氧组相比,低氧组A549细胞迁移数增加,ACC1与HIF-1α表达上调(P均＜0.01),SREBP-1表达上调(P＜0.05);与低氧对照组相比,PX-478(25 μmol)抑制A549细胞迁移,SREBP-1表达下调(P＜0.05);低氧处理A549细胞后ACC1 mRNA上升(P＜0.05),SREBP-1 mRNA水平上升(P＜0.01);低氧并使用PX-478(25 μmol)处理A549细胞24 h,ACC1 mRNA水平下降(P＜0.05),SREBP-1 mRNA 水平下降(P＜0.01);转染si-RNA获得敲低SREBP-1的A549细胞,Transwell 实验显示si-SREBP-1组细胞迁移数较常氧对照组减少(P＜0.01);低氧处理si-SREBP-1组与si-NC组,与对照组相比si-SREBP-1组细胞迁移数减少(P＜0.01)但与常氧组相比差异无统计学意义(P＞0.05);Western blot检测到si-SREBP-1组ACC1表达较对照组下降(P＜0.01);低氧处理si-SREBP-1组,ACC1表达较对照组下降(P＜0.01);敲低ACC1抑制A549细胞迁移(P＜0.05),敲低ACC1后A549细胞在常氧和5％ O₂条件下细胞迁移数目差异无统计学意义(P＞ 0.05);低氧处理敲低ACC1的A549细胞并给予LA(25 μmol)促进A549细胞迁移(P＜0.05)。结论: 低氧通过HIF-1α/SREBP-1/ACC1途径调节脂肪酸代谢进而促进肺腺癌A549细胞迁移。     

慢病毒介导的TPX2沉默对人宫颈癌HeLa细胞凋亡和侵袭的影响及机制

该文的目的是研究慢病毒介导的Xklp2靶蛋白(targeting protein for Xklp2,TPX2)沉默对人宫颈癌He La细胞凋亡、侵袭的影响及机制。构建4种载有TPX2-sh RNA的重组慢病毒及其阴性对照,将5种重组慢病毒分别稳定感染人宫颈癌He La细胞,利用实时荧光定量PCR和Western blot筛选出TPX2沉默效果最佳的一组He La细胞作为干扰组进行后续实验。采用Transwell基底膜侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力。采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。Western blot检测TPX2-sh RNA转染前后细胞凋亡及侵袭相关蛋白质Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP9、TIMP-1及nm23-H1水平。结果显示,筛选出的RNA干扰慢病毒载体LV-TPX2-sh RNA-1可有效抑制He La细胞TPX2的表达;与对照组相比,干扰组的He La细胞凋亡率明显增加(P0.01);穿过Transwell小室基底膜细胞明显减少(P0.01)。He La细胞感染LV-TPX2-sh RNA-1能下调凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平,上调Caspase-3及Bax的表达水平(P0.05);上调侵袭相关蛋白质nm23-H1及TIMP-1水平,下调MMP9水平(P0.05)。以上结果表明,沉默TPX2表达能增加宫颈癌细胞的凋亡,可能与其上调Caspase-3及Bax水平,下调Bcl-2水平有关;沉默TPX2表达能抑制宫颈癌细胞侵袭能力,可能与其上调TIMP-1及nm23-H1水平,下调MMP9的水平有关。     

线粒体ATP敏感钾通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α表达及细胞增殖的作用

本文旨在探讨线粒体ATP敏感钾（mitochondrial ATP-sensitive K＋,MitoKATP）通道对大鼠肺动脉平滑肌细胞低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）表达和细胞增殖的影响。原代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分为常氧对照组、常氧＋diazoxide（MitoKATP通道的选择性开放剂）组、常氧＋5-hydroxydecanoate（5-HD,MitoKATP通道的选择性阻断剂）组、低氧对照组、低氧＋diazoxide组、低氧＋5-HD组,共6组,分别应用罗丹明123荧光技术检测各组大鼠肺动脉平滑肌细胞的线粒体膜电位,免疫组化检测HIF-1α的表达及酶联免疫检测仪检测细胞增殖的变化。结果显示,常氧＋ diazoxide组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强（P〈0．05）;低氧＋diazoxide组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达及细胞增殖明显增强（P〈0.05）：常氧＋5-HD组与常氧对照组比较,罗丹明123荧光、HIF-1α表达、细胞增殖没有明显变化（P〉0．05）;但低氧＋5-HD组与低氧对照组比较,罗丹明123荧光明显减弱、HIF-1α表达及细胞增殖有所减弱（P〈0．05）。结果提示：MitoKATP通道的开放能引起大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体膜去极化,并可以促进HIF-1α的表达及细胞增殖。     

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的：探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1（LncRNA）对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法：髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-siRNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白的影响。结果：si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 mRNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低（P<0.05）,而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论：干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

MicroRNA-18a通过HIF-1α调控缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究microRNA-18a(miR-18a)对缺氧引起的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,hPASMCs)增殖的调控作用及其可能机制。方法:体外培养hPASMCs,分为未转染组、miR-18a模拟物对照组、miR-18a模拟物组、miR-18a抑制剂对照组、miR-18a抑制剂组、si RNA control组、si HIF-1α组、miR-18a抑制剂和si HIF-1α共转染组。分别于常氧(21%O2)和低氧(3%O2)作用24小时。采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,萤光素酶报告基因系统验证缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)是否为miR-18a的靶基因,并通过western-blot以及实时荧光定量PCR技术检测相关蛋白和基因的表达。结果:缺氧可促进hPASMCs增殖,使miR-18a表达减少;miR-18a模拟物可抑制hPASMCs增殖,而miR-18a抑制剂可促进hPASMCs增殖;抑制miR-18a可使HIF-1α的表达上调。同时抑制miR-18a和HIF-1α,可使miR-18a对hPASMCs增殖调控的能力消失。结论:缺氧通过抑制miR-18a,上调HIF-1α的表达,促进h PASMCs增殖。     

成纤维细胞生长因子3-siRNA对肺癌细胞A549侵袭性和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:探讨人成纤维细胞生长因子3(Fibroblast growth factor3,FGFR3)基因沉默对人类肺腺癌A549细胞侵袭能力及其对基质金属蛋白酶9(Matrix metaloproteinases 9,MMP9)基因表达的影响。方法:细胞分为3组:A组:实验组,即FGFR3特异性小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)(siRNA-FGFR3)干扰组;B组:阴性对照组,即FGFR3非特异性阴性对照siRNA(siRNA-NC)干扰组;C组:空白对照组,无siRNA干扰;通过核酸转染试剂脂质体Lipofectamine TM2000(Lipo2000)转染A549细胞;倒置荧光显微镜观察Lipo2000转染效率;转染后A549细胞的侵袭能力用Transwell实验检测;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于检测转染前后FGFR3及MMP9 m RNA的表达水平。结果:Lipo2000介导的FAM-siRNA对肺腺癌A549细胞的转染效率可达80%;在转染36 h后,Transwell实验结果显示A组较B组、C组侵袭能力显著降低(P0.01)。Real-time PCR结果显示,A组较B、C组的FGFR3和MMP9基因表达量明显下调(P0.01)。结论:FGFR3基因沉默可明显抑制肺腺癌A549细胞的侵袭能力,并能下调MMP9表达。为肺癌的治疗提供了新的靶点。