miR-24对心脏成纤维细胞生长和迁移的影响及机制研究

目的:探讨miR-24对心脏成纤维细胞的生长和迁移的影响及机制。方法:采用RT-PCR检测心肌细胞和心脏成纤维细胞中mi R-24的表达水平。在心脏成纤维细胞中转染mi R-24 mimics、mimics control、mi R-24 inhibitors、inhibitors control后,通过Western blot检测细胞中Col-1、α-SMA的表达,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室检测细胞迁移能力。通过靶基因预测库预测mi R-24的靶基因,荧光素酶鉴定靶基因的正确性,并通过RT-PCR和Western blot检测转染后细胞中Furin的表达。结果:心脏成纤维细胞HEH2中mi R-24的表达水平与心肌细胞H9C2相比差异显著(P0.01),心脏成纤维细胞中mi R-24表达上调。mi R-24 mimics组中Col-1、α-SMA的表达水平明显低于mimics control组(P0.01)。mi R-24 mimics组中细胞OD值较mimics control组显著降低(P0.01),mi R-24 inhibitors组中细胞OD值较inhibitors control组显著升高(P0.01)。mi R-24 mimics组、mimics control组、mi R-24 inhibitors组、inhibitors control组细胞凋亡无显著性差异(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞迁移数目明显低于mimics control组,差异显著(P0.01),mi R-24 inhibitors组细胞迁移数目高于inhibitors control组,差异显著(P0.05)。mi R-24 mimics组细胞中Furin蛋白和m RNA水平明显降低,野生型Furin和mi R-24 mimics共转染的细胞中荧光素酶活性最低。结论:mi R-24在心脏成纤维细胞中高表达,通过靶基因Furin抑制心脏成纤维细胞合成Col-1、α-SMA,抑制心脏成纤维细胞增殖和迁移。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

乏氧和辐射诱导的miR-1290 促进宫颈癌细胞EMT发生

目的:研究mi R-1290在宫颈癌Hela细胞上皮间质转化中的作用。方法:模拟肿瘤放射治疗的分割疗法,单次2 Gyγ射线连续照射宫颈癌Hela、Siha细胞诱导辐射抗性细胞株;采用micro RNA芯片技术比较辐射抗性细胞与亲本细胞中mi RNA的表达谱差异;经不同条件乏氧和辐射处理宫颈癌Hela细胞后检测mi R-1290的表达水平;借助mi R-1290及mi R-1290-inhibition慢病毒表达载体,调变mi R-1290在Hela细胞的表达;调变mi R-1290后,划痕实验及Transwell侵袭实验比较Hela细胞的侵袭和转移能力;蛋白质印迹法检测细胞中E钙黏素(E-cadherin)和N钙黏素(N-cadherin)的表达。结果:在宫颈癌辐射抗性细胞中mi R-1290表达水平显著升高(P0.05);乏氧和辐射可诱导mi R-1290在宫颈癌Hela细胞中表达(P0.05);上调表达mi R-1290,Hela细胞出现了明显的间质细胞的形态改变,细胞的侵袭和转移能力明显增强(P0.05)。在Hela细胞中上调表达mi R-1290,降低了细胞中E-cadherin的表达,同时升高了N-cadherin的表达(P0.05)。结论:乏氧和辐射可诱导mi R-1290在宫颈癌Hela细胞中表达,mi R-1290通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达促进宫颈癌Hela细胞发生EMT。     

抑郁症患者血清miR-135a、miR-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性分析

目的:探讨抑郁症患者血清微小核糖核酸(mi R)-135a、mi R-221表达水平与认知功能、事件相关电位P300和炎症细胞因子的相关性。方法:选择2019年1月至2021年1月我院收治的216例抑郁症患者(抑郁症组)和同期于我院体检的200例健康志愿者(对照组)。检测血清mi R-135a、mi R-221表达水平及白细胞介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、简易精神状态检查量表(MMSE)评估认知功能。采用全功能肌电诱发电位仪检测P3潜伏期和P3波幅。Pearson相关性分析mi R-135a、mi R-221表达水平与MoCA评分、MMSE评分、IL-6,hs-CRP,TNF-α、P3潜伏期和P3波幅的相关性。结果:抑郁症组血清mi R-221表达水平、P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平高于对照组(P<0.05),mi R-135a表达水平、MMSE评分、MoCA评分、P3波幅低于对照组(P<0.05)。mi R-221表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈正相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈负相关(P<0.05);mi R-135a表达水平与P3潜伏期,血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平呈负相关(P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分、P3波幅呈正相关(P<0.05)。结论:抑郁症患者血清mi R-135a表达水平降低,mi R-221表达水平增高,mi R-135a低表达和mi R-221高表达与抑郁症患者认知功能降低、机体炎症反应有关。     

miR-21在疤痕形成中的作用及其机制研究

目的:探究mi R-21在疤痕形成中的作用及其相关机制。方法:选取2016年3月-2017年8月在本院就诊的20例皮肤有疤痕患者,采集患者的正常皮肤组织(正常组)、疤痕组织(疤痕组),进行成纤维细胞的分离培养,比较正常组、疤痕组mi R-21与Smad-7的m RNA表达水平,并在疤痕组织加入mi R-21抑制剂(抑制组),比较三组成纤维细胞增殖情况、蛋白表达及磷酸化水平。结果:正常组中Smad-7的m RNA表达水平显著高于疤痕组,而mi R-21的m RNA水平显著低于疤痕组,差异均有统计学意义(P0.05)。细胞培养48 h和72 h时,疤痕组成纤维细胞增殖水平明显高于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05),而抑制组和正常组成纤维细胞增殖水平比较差异无统计学意义(P0.05)。疤痕组成纤维细胞Smad-7蛋白表达低于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05),疤痕组成纤维细胞Smad-2、Smad-3蛋白表达及磷酸化水平均高于正常组和抑制组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:疤痕组织中mi R-21通过负调控Smad-7的表达,从而引起Smad-2与Smad-3蛋白表达发生变化,使得疤痕成纤维细胞的增殖水平明显增高,最终促成疤痕的形成。     

过表达MicroRNA-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控人退变髓核细胞自噬的研究

目的:探讨过表达mi R-21通过PTEN/PI3K/AKT通路对人退变髓核细胞自噬的影响。方法:构建稳定过表达mi R-21 mimic人退变髓核细胞,转染无意义序列作为mi R-21 mimic control组,采用RT-qPCR检测转染效率;利用MDC荧光染色法观察细胞自噬泡;Western-Blot检测细胞自噬相关蛋白LC3和P62的表达以及PTEN/PI3K/AKT信号通路中关键蛋白PTEN、PI3K及AKT的表达水平。结果:RT-qPCR结果表明mi R-21 mimic转染成功且效率较高,与mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组相比,差异显著(P0.05)。荧光显微镜观察MDC染色情况,mi R-21 mimic组的细胞中几乎没有发现自噬体,而mi R-21 mimic control组以及空白对照组细胞中自噬体均较多,与前者相比差异均明显,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组细胞中LC3-II/LC3-I表达量的比值均显著低于mi R-21 mimic control组及空白对照组细胞(P0.05);而P62在mi R-21 mimic组细胞中表达量显著高于mi R-21 mimic control组及空白细胞对照组,具有统计学意义(P0.05)。mi R-21 mimic组中PTEN蛋白的表达水平较低,与另外两组相比具有统计学意义(P0.05);磷酸化的PI3K(p-PI3K)和AKT(p-Akt)在mi R-21 mimic组中均明显高于mi R-21 mimic control组和空白细胞对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:mi R-21可以通过靶向沉默PTEN,促进PI3K和AKT发生磷酸化,进而使PTEN/PI3K/AKT信号通路被激活,最终抑制人椎间盘退变髓核细胞的自噬。     

非小细胞肺癌患者血清miR-146a、miR-141的表达及临床意义

目的:研究非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-146a(mi R-146a)、mi R-141的表达及临床意义。方法:选取2015年1月至2018年1月我院收治的106例NSCLC患者记为NSCLC组,另选取同期于我院进行体检的40例健康体检者记为健康对照组。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清mi R-146a、mi R-141的表达水平,分析NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平与临床病理参数的关系,比较血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度。结果:NSCLC组患者的血清mi R-146a、mi R-141表达水平高于健康对照组(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-146a表达水平与病理分期有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、病理分级、肿瘤直径及是否伴有淋巴结转移无关(P0.05)。NSCLC患者血清mi R-141表达水平与病理分期、病理分级及是否伴有淋巴结转移有关(P0.05),与年龄、性别、吸烟史、病理类型、肿瘤直径无关(P0.05)。血清mi R-146a、mi R-141单一诊断及两者联合诊断NSCLC的AUC分别为0.841、0.772、0.921,敏感度分别为85.1%、80.5%、93.5%,特异度分别为84.2%、75.3%、89.8%。结论:NSCLC患者血清mi R-146a、mi R-141表达水平升高,且与部分临床病理参数有关,两者联合检测对NSCLC诊断具有较高的诊断价值。     

miR-124靶向TNF-α促进猪皮下脂肪细胞分化

前期研究中采用双萤光素酶报告基因验证了mi R-124与脂解因子猪TNF-α之间的靶关系,以此为基础研究mi R-124是否影响猪皮下脂肪细胞的分化。采用mi R-124模拟物mimics和抑制物inhibitor分别转染猪脂肪前体细胞并诱导其分化成成熟脂肪细胞,检测细胞的聚脂情况,甘油及甘油三酯的含量变化,荧光定量检测脂肪细胞关键转录因子PPARγ,脂肪合成和分解的主要酶FASN和HSL基因的表达变化。结果显示,过表达mi R-124能抑制TNF-α蛋白的表达,脂肪细胞脂滴多于对照组,甘油三酯(TG)含量显著增加(P0.01),甘油含量亦显著增加(P0.05),PPARγ、FASNT和HSL的表达显著上调(P0.01);抑制细胞mi R-124的表达脂滴则较少,TG含量显著减少(P0.05),PPARγ和FASN的表达均显著下调(P0.05)。mi R-124可能通过抑制TNF-α调节猪脂肪细胞的分化,为后续研究mi R-124调节脂肪代谢的相关机制奠定基础。     

TP新辅助化疗方案治疗Ib-Ⅱa期局部晚期宫颈癌的临床效果观察

目的:观察并探讨宫颈癌术前行TP与PF两种新辅助化疗方案的临床效果,优选新辅助化疗方案。方法:将2008年1月-2010年12月间入选的91例Ib-Ⅱa宫颈癌患者随机分为A(n=46)、B(n=45)两组,A组患者子宫切除术前予TP新辅助化疗方案,B组予PF方案,各2个周期,对比化疗结束后两组临床疗效、化疗期间药物毒性反应及术后2年内宫颈癌复发率。结果:①A、B两组总体有效率分别为89.1%、82.2%,差异不具有统计学意义(P0.05),但前者化疗后瘤体直径明显小于B组(P0.05);②两组药物毒性反应构成不具有统计学差异(P0.05),但A组胃肠道反应与肝脏毒性发生率明显低于B组(P0.05);③A、B两组组术后2年内宫颈癌复发率分别为2.2%、11.9%,复发率无统计学差异(P0.05)。结论:宫颈癌术前TP新辅助化疗方案较之BIP方案具有比较优势,更具备临床推广价值。     

骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中miR-27a、miR-146a表达的影响

目的:探讨骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a表达的影响。方法:选取我院收治的骨性关节炎患者46例,随机分为两组,每组各23例。对照组予抗骨增生治疗,实验组在对照组基础上加以骨碎补治疗。观察和比较两组患者的临床疗效、炎性因子水平的变化以及骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达情况。结果:1治疗后,两组患者的临床症状均有所改善,且实验组疗效高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2治疗后,两组患者的IL-1β、PGE2水平均较治疗前显著降低,且实验组降低较对照组更明显,差异均有统计学意义(P0.05)。3治疗后,两组患者的骨关节滑膜组织中的mi R-27a、mi R-146a表达均降低,且与对照组比较,实验组较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:骨碎补能够降低骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达,降低IL-1β、PGE2的水平,提高临床疗效。     

Chemotherapy response and resistance

Apoptosis and premature senescence, an acutely inducible terminal cell-cycle arrest, are known to be the ultimate cellular defense programs that counteract oncogenic transformation. Thus, activated oncogenes may sensitize cells to other stimuli that also recruit these programs. Recent evidence demonstrates that both apoptosis and premature senescence respond to drugs and can therefore contribute to the outcome of cancer therapy. However, manifest malignancies may have acquired mutations that compromise these programs at different levels, and hence may become chemoresistant to varying degrees as a result of defects in either or both programs.