一种环境激素联合冷应激大鼠模型阴茎组织中 Sprouty 2、ERK1/2表达的研究

目的:研究Sprouty 2(Spry 2)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)在环境激素联合冷应激大鼠模型阴茎组织中的表达,并观察伊木萨克片对二者表达的影响。方法:选用30只正常的雄性SD大鼠,其中10只为正常对照组(N组),余20只为造模组,采用富含环境雌激素饲料+寒冷环境的干预条件建立复合性应激大鼠模型(20 w),其中10只大鼠采用伊木萨克片干预2 w(Y组),剩余10只为模型组(M组)。采用免疫组化方法检测各组大鼠阴茎组织中Spry 2、ERK1/2的表达。结果:M组大鼠阴茎组织中Spry2表达低于N组(P0.05),Y组大鼠阴茎组织中Spry 2表达明显高于M组(P0.05)。三组大鼠阴茎组织中总ERK1/2(t-ERK1/2)的表达比较差异均无统计学意义(P0.05)。M组大鼠阴茎组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达高于N组(P0.05),Y组大鼠阴茎组织中p-ERK1/2表达明显低于M组(P0.05)。结论:Spry 2表达下调和ERK1/2活化可能促进应激反应的发生发展,伊木萨克片可能通过上调Spry 2的表达和减少ERK1/2的活化发挥抗应激作用。     

伊木萨克片对异常黏液质证候大鼠阴茎组织中Sprouty 2、ERK1/2表达的影响

目的:研究伊木萨克片对异常黏液质证候大鼠模型阴茎组织中Sprouty 2 (Spry 2)和细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases1/2, ERK1/2)表达的影响。方法:选用30只性功能正常的雄性SD大鼠,其中10只为正常对照组(N组),余20只为造模组,采用湿寒饲料+湿寒环境的干预条件建立异常黏液质证候大鼠模型(20 w),其中10只大鼠采用伊木萨克片干预2 w,采用免疫组化方法检测各组大鼠阴茎组织中Spry 2、ERK1/2的表达。结果:B1组大鼠阴茎组织中Spry 2表达低于N组(P0.05),B3组大鼠阴茎组织中Spry 2表达明显高于B1组(P0.05)。三组大鼠阴茎组织中总ERK1/2(t-ERK1/2)的表达比较差异均无统计学意义(P0.05)。B1组大鼠阴茎组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达高于N组(P0.05),B3组大鼠阴茎组织中p-ERK1/2表达明显低于B1组(P0.05)。结论:Spry 2表达下调和ERK1/2活化可能促进异常黏液质证候的发生发展,伊木萨克片可能通过上调Spry 2的表达和减少ERK1/2的活化对异常黏液质证候大鼠模型发挥治疗作用。     

复合应激型ED大鼠模型促炎细胞因子IL-6、TNF-α和TGF-β1水平的研究

目的:探讨环境雌激素样饲料联合冷刺激诱导的ED大鼠血清与阴茎组织中促炎因子IL-6、TNF-α和TGF-β1的变化及其对ED大鼠阴茎组织纤维化的影响。方法:取100只SD雄性大鼠,20只为正常组(N),其余120只为建模组,以环境雌激素样饲料联合冷刺激予以复合干预,24周后通过APO阴茎勃起实验和交配实验筛选ED大鼠,并从中随机选取20只大鼠为勃起功能障碍组(ED组),以ELISA和Western blot法分别检测各组大鼠血清和阴茎组织中IL-6、TNF-α和TGF-β1表达水平,Masson染色观察阴茎组织纤维化情况。结果:(1)ED组大鼠血清中IL-6、TNF-α和TGF-β1含量较N组显著升高(P<0.05);(2)ED组大鼠阴茎组织中IL-6、TNF-α和TGF-β1蛋白相对表达水平较N组显著升高(P<0.05);(3)ED组大鼠阴茎组织平滑肌/胶原纤维比值显著低于N组(P<0.05)。结论:环境雌激素样饲料联合冷刺激建立的复合应激型ED大鼠阴茎组织发生纤维化是其发生ED的重要组织病理学原因之一,具体机制可能和血清和组织中促炎细胞因子高表达密切相关。     

肺内调节肽对支气管上皮细胞ICAM-1表达及NF-κB活性的调控

细胞间粘附分子—1(ICAM—1)是介导细胞与细胞之间粘附的重要生物分子;核因子—κB(NF—κB)是体内普遍存在、能迅速对刺激产生反应的重要核转录因子。越来越多的证据显示,ICAM—1表达与NF—κB激活是炎症反应的重要步骤。我们应用免疫组化、RT—PCR、凝胶阻滞电泳(EMSA)等多种实验方法,观察了肺内调节肽对支气管上皮细胞ICAM—1表达及NF—κB活性的影响,以及NF—κB抑制剂MG—132对ICAM—1表达的影响。实验结果发现,VIP、EGF可使臭氧应激BECS的ICAM—1表达降低;ET—1、CGRP可使未受应激BECs的ICAM—1表达增加。NF—κB抑制剂MG—132可阻断O3、ET—1、CGRP引起的ICAM—1表达,提示NF—κB在调控ICAM—1表达中起重要作用。EMSA结果显示,BECs中NF—κB在臭氧应激下反复激活,CGRP与ET—1可促进NF—κB的激活;VIP与EGF可抑制臭氧应激的BECs中NF—κB的激活。以上结果说明,VIP、EGF可通过下调ICAM—1转录及NF—κB激活减轻炎症反应,而ET—1、CGRP可通过上调ICAM—1转录及NF—κB激活、加大炎症反应。ICAM—1与NF—κB的持续表达和反复激活是炎症持续加重发展的重要因素。     

血管活性肠肽、降钙素基因相关肽及其受体在气道高反应动物肺内的时空分布

为探讨内源性神经肽在气道高反应性形成中的作用,我们以臭氧应激损伤动物气道上皮细胞,建立气道高反应性动物模型,并观察臭氧应激不同时间肺内血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related CGRP)含量变化以及VIP受体(VIPR1)、CGRP受体(GRPR1)mRNA在肺内表达、分布的改变。实验观察到,臭氧应激组动物吸入乙酰甲胆碱后气道阻力高于正常对照组,肺内呈现明显的炎症改变。随臭氧应激时间延长,肺组织匀浆中VIP、CGRP浓度呈先增高后降低的双向改变,CGRP达峰值时间早于VIP。VIPR1、CGRPR1 mRNA表达亦经历了双向过程,VIPR1峰值持续时间长于CGRPR1。在无应激对照组动物,肺间质、支气管上皮细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞均有VIPR1、CGRPR1 mRNA表达。随应激时间的延长,阳性细胞呈斑片状集中于气管、血管周围,染色强度增加,至臭氧应激第8天,阳性染色细胞减少。因此我们推测,臭氧应激可以诱导动物气道高反应性的形成。在炎症的早期,以CGRP的作用为主,与肺损伤早期炎症信号的传递有关,以清除刺激原、及时终止致病原的作用;炎症后期以保护机体、促进修复、减轻损伤为主,VIP发挥主要作用。     

p38-MAPK信号通路在HHPH中的作用及三七总皂苷干预

目的:研究p38-MAPK信号通路在大鼠低O2高CO2性肺动脉高压(HHPH)发生发展中的动态变化;探讨三七总皂苷(PNS)防治低O2高CO2性肺动脉高压的机制。方法:复制慢性HHPH大鼠模型,分为正常组(N),低O2高CO23 d组(H3d)、1周组(H1w)、2周组(H2w)、4周组(H4w),及PNS治疗组(Hp),Hp组腹腔注射血塞通注射液(成分为PNS和生理盐水)。Western印迹法、免疫组织化学技术检测肺组织及肺血管P-p38、p38蛋白的表达。结果:①H1w、H2w、H4w和Hp组的WA/TA均高于N组(P均<0.05),但H3d组较N组增加不明显(P>0.05),Hp组WA/TA明显低于H4w组(P<0.05)。②肺组织P-p38蛋白在N组表达不明显,在H3d、H1w、H2w、H4w组均有高水平表达。③肺小动脉壁P-p38蛋白在N组和H3d组表达呈阴性或弱阳性,在H1w、H2w、H4w组有高水平表达,较N组差异有统计学意义(P<0.05)。④Hp组肺组织P-p38,肺小动脉壁P-p38蛋白表达较低O2高CO2组降低(P<0.05)。结论:p38-MAPK信号通路介导了大鼠HHPH的形成。PNS可减轻这一过程,其机制可能和PNS抑制P-p38表达有关。     

血管活性肠肽对支气管上皮细胞趋化迁移的影响及机制

为探讨肺内神经肽在气道损伤修复中的作用 ,采用blind wellBoydenchamber测定原代培养的支气管上皮细胞 (bronchialepithelialcells,BEC)趋化性 ,观察血管活性肠肽 (vasoactiveintestinalpeptide ,VIP)对BEC趋化迁移的影响及其机制 ,并测定经热应激后BEC分泌VIP及表达VIP受体 (vasoactiveintestinalpeptidereceptor,VIPR)的变化。结果显示 :(1)以胰岛素作为趋化因子所建立的BEC趋化性测定方法稳定 ,重现性好 (r =0 970 3,P <0 0 1) ;(2 )VIP (0 0 0 1～ 1μmol/L)均显示剂量依赖性地增强BEC的趋化迁移 ,其效应可被钙调蛋白阻断剂及蛋白激酶C阻断剂有效地抑制 (P <0 0 1) ;(3) 4 2℃、30min热应激后BEC分泌VIP (P <0 0 1)及表达VIPR明显增加 (P <0 0 5 )。实验表明 :肺内神经肽VIP可增强BEC的趋化迁移 ,其细胞内信号转导途径与钙调蛋白及蛋白激酶C有关。而热应激时VIP及VIPR的高表达进一步提示局部微环境的VIP可能是气道上皮损伤修复网络中的重要分子     

戊己丸对炎症后肠易激综合征大鼠脑肠肽的调控作用

目的寻找诊断和治疗肠易激综合征(IBS)的生物学指标。方法采用乙酸加束缚应激法建立炎症后肠易激综合征(PI-IBS)动物模型;采用大鼠结肠运动指数(MI)、2 h内排出的粪粒数以及玻璃小球排出时间评价大鼠结肠的运动能力;观察PI-IBS模型大鼠的形成以及戊己丸对其的治疗作用;采用ELISA法检测PI-IBS大鼠脑和结肠组织中的降钙素基因相关肽(CGRP)、胃动素(MTL)、神经肽Y(NPY)、P物质(SP)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)、胆囊收缩素(CCK)水平。结果成功建立PI-IBS大鼠模型。模型大鼠体重降低;摄食量减少;排便量增多;出现稀便和无定形软便;自主运动量减少;结肠MI显著增加(P0.05);大鼠排出的粪粒数显著增加(P0.05);玻璃小球排出时间显著缩短(P0.05)。戊己丸治疗7 d后能够明显改善以上症状。与正常对照组相比,PI-IBS大鼠脑组织中的CGRP、SS和VIP水平显著增加(P0.05),NPY浓度显著降低(P0.05);而戊己丸给药可以显著降低CGRP、SS和VIP浓度水平(P0.05),显著升高NPY浓度水平(P0.05)。与正常对照组相比,PI-IBS大鼠结肠组织中的CCK、NPY、MTL、SS和VIP均显著降低(P0.05);戊己丸给药能够显著升高CCK和VIP水平(P0.05)。结论戊己丸可通过调节IBS大鼠脑和结肠组织内多种脑肠肽的水平用来治疗IBS,这些可被调节的异常变化的脑肠肽可以成为潜在的诊断和治疗IBS的生物学指标。     

菠菜和芫荽对雄性大鼠性功能的影响与植物雌激素样作用研究

目的:研究菠菜、芫荽对雄性大鼠性功能的影响,探讨植物雌激素样作用机制。方法:60只正常雄性SD大鼠,随机分为正常组(N组)、大豆对照组(A组)、菠菜组(B组)、芫荽组(C组)和菠菜+芫荽组(D组),每组12只,不同饲料干预20周后,进行性行为学试验并取材。采用放免法检测各组外周血清中T、E2、LH、FSH和PRL等性腺轴激素含量,HE染色观察睾丸组织形态学变化,IHC和western blot法检测大鼠睾丸中ERα,ERβ蛋白表达。结果:(1)性行为学检测结果:C和D组插入、射精潜伏期较N组显著延长(P0.05),爬背、插入,射精次数较N组显著减少(P0.05);D组插入潜伏期较A组显著延长(P0.05)(2)性激素水平检测结果:D组T水平较N组显著降低(P0.05);C组E_2水平较A组显著升高(P0.05),D组E_2水平较N、A组显著升高(P0.05);C和D组LH水平较N组显著降低(P0.05),同时C组LH水平亦较A组显著降低(P0.05);FSH水平在各组之间无显著差异(P0.05);D组PRL水平较N组显著降低(P0.05)。(3)睾丸HE染色结果:光镜下N组睾丸组织结构完整,B、C和D组睾丸组织形态结构发生明显变化,生精小管间连接疏松,间质细胞减少,生精细胞减少。(4)ERα和ERβ的表达结果:ERα和ERβ分别在睾丸中精原细胞和间质细胞中表达,其中ERα在B、C和D组表达较N组显著增多(P0.05),ERβ在各组间无显著差异(P0.05)。结论:芫荽及菠菜和芫荽联合干预可延长大鼠爬背、插入、射精潜伏期和减少其爬背、插入和射精次数,导致大鼠性功能障碍;具体机制可能与发挥雌激素样作用,升高血清中E_2水平,使ERα在睾丸间质中的表达增多,进而降低T水平有关。芫荽与大豆相比具有更强的雌激素样作用,而菠菜与大豆雌激素样作用接近,菠菜和芫荽联合干预出现累加效应。     

CGRP和NPY 在大鼠股骨闭合骨折愈合不同阶段的变化及意义

目的:探讨交感神经分泌的神经肽Y(NPY)和感觉神经分泌的钙基因相关肽(CGRP)在体内骨折愈合的不同阶段的变化及意义。方法:选择6-8月龄的雄性大鼠,建立大鼠的股骨闭合骨折模型,术后2、4、8、12周取材。进行扫描电镜,免疫组织荧光染色和血清Elisa检测。结果:1骨折愈合不同时期感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY都有表达,且其含量有先增加后减少的趋势,并在骨折后8周含量达到最高。2骨折愈合不同阶段的大鼠血清感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY均呈上升趋势,差异有统计学意义(P0.05),且NPY的含量比CGRP的含量高。骨折后2-4周,CGRP含量增加较快;骨折后4-8周NPY含量增加较快。结论:骨折愈合的不同阶段,感觉神经肽类物质CGRP和交感神经肽类物质NPY含量先升后降,对不同阶段的骨形成及骨吸收产生影响。     

内毒素结合肽模拟肽P11的体外活性研究

目的对从噬菌体展示随机肽库筛选获得的内毒素结合肽模拟肽进行体外拈抗内毒素活性鉴定。方法采用FMOC固相合成法化学合成内毒素结合肽模拟肽P11,并进行拮抗内毒素活性和细胞毒性测定。结果亲和ELISA检测显示P11与LPS有较高的亲和力,通过生长曲线和流式细胞学分析细胞周期显示P11对人U937细胞生长无明显影响。流式细胞检测显示P11呈剂量依赖性抑制FITC—LPS与人外周血单核细胞（PBMC）结合。细胞因子生成抑制实验显示10μg/mlP11可显著抑制LPS诱导PBMC和U937细胞TNF—αmRNA转录和蛋白表达。结论体外活性鉴定结果表明化学合成的模拟肽P11可抑制LPS诱导的炎性反应。     

非核糖体多肽合成酶研究进展

细菌和真菌采用非核糖体系统合成一些重要的多肽类物质.近年来的研究表明,在该系统中发挥关键作用的是一类分子巨大的非核糖体多肽合成酶.它们由顺序排列的组件构成,酶分子结构本身即蕴涵着多肽合成的信息.对非核糖体多肽合成酶结构和功能的了解,使人们期望可以通过对这类酶的修饰和重组来合成一些新的多肽类物质.     

Peptide inhibitors against herpes simplex virus infections

Herpes simplex virus (HSV) is a significant human pathogen causing mucocutaneous lesions primarily in the oral or genital mucosa. Although acyclovir (ACV) and related nucleoside analogs provide successful treatment, HSV remains highly prevalent worldwide and is a major cofactor for the spread of human immunodeficiency virus. Encephalitis, meningitis, and blinding keratitis are among the most severe diseases caused by HSV. ACV resistance poses an important problem for immunocompromised patients and highlights the need for new safe and effective agents; therefore, the development of novel strategies to eradicate HSV is a global public health priority. Despite the continued global epidemic of HSV and extensive research, there have been few major breakthroughs in the treatment or prevention of the virus since the introduction of ACV in the 1980s. A therapeutic strategy at the moment not fully addressed is the use of small peptide molecules. These can be either modeled on viral proteins or derived from antimicrobial peptides. Any peptide that interrupts protein–protein or viral protein–host cell membrane interactions is potentially a novel antiviral drug and may be a useful tool for elucidating the mechanisms of viral entry. This review summarizes current knowledge and strategies in the development of synthetic and natural peptides to inhibit HSV infectivity. Copyright © 2013 European Peptide Society and John Wiley & Sons, Ltd.     

多肽和蛋白质药物的吸入给药

概述了多肽和蛋白质药物的肺吸收机制和用于吸入给药的研究进展,并简要讨论了多肽和蛋白质药物在用于吸入给药时存在的问题及今后的发展方向,为多肽和蛋白质药物的吸入给药研究提供一定的参考。     

Tandem Peptide Ligation for Synthetic and Natural Biologicals

We describe the concept and methods of peptide ligation and tandem peptide ligation for preparing synthetic and natural biologicals. Peptide ligation is a segment coupling method for free peptides or proteins through an amide bond without the use of a coupling reagent or a protecting group scheme. Because unprotected peptides or proteins prepared from either a chemical or biochemical source are being used as building blocks, the ligation removes the size limitation for peptide and protein synthesis. A key feature of the peptide ligation is that the coupling reaction is orthogonal, i.e. it is specific to a particular alpha-amino terminus (NT). This NT-amino acid-specific feature permits the development of a tandem peptide ligation method employing three unprotected peptide segments containing different NT-amino acids to form consecutively two amide bonds, an Xaa-SPro (thiaproline) and then an Xaa-Cys. This strategy was tested in peptides ranging from 28 to 70 amino acid residues, including analogues of somatostatins and two CC-chemokines MIP-1alpha and MIP-1beta. The thiaproline replacements in these peptides and proteins did not result in altered biological activity. By eliminating the protecting group scheme and coupling reagents, tandem ligation of multiple free peptide segments in aqueous solutions enhances the scope of protein synthesis and may provide a useful approach for preparing protein biologicals and synthetic vaccines.     

牛气管黏膜抗菌肽成熟肽基因的克隆及序列分析

目的:获得牛气管黏膜抗菌肽(bTAP)成熟肽的基因序列,为后续的研究工作奠定基础。方法:从新屠宰的黄牛气管黏膜中提取总RNA,反转录获得cDNA,以此cDNA为模板进行PCR扩增目的片段,并将其克隆至pMD18-T载体中,经鉴定随机挑选1个阳性重组子进行测序,将测序结果与已报道的序列进行比较,并做NCBIBlast比对。结果:PCR扩增出bTAP成熟肽基因,核苷酸序列测定验证了其正确性;NCBIBlast比对表明,与bTAP成熟肽基因同源性较高的分别是牛β-防御素11、牛β-防御素12、牛β-防御素402、牛β-防御素403、绵羊β-防御素1、绵羊β-防御素2、山羊β-防御素1及山羊β-防御素2,核苷酸序列同源性分别为78.07%、78.95%、80.70%、83.33%、83.33%、80.70%、81.58%和81.58%,氨基酸序列同源性分别为68.42%、65.79%、68.42%、76.32%、71.05%、63.16%、63.16%和68.42%。结论:成功克隆了bTAP成熟肽的基因序列,NCBIBlas比对表明bTAP与防御素可能来自一个共同的祖系基因。     

多肽噬菌体展示

噬菌体展示技术已被广泛地应用于生物学研究的各个方面.利用它可融合表达多肽、蛋白质结构域和蛋白质.尤其是多肽噬菌体展示,已被作为一种便利的研究工具去发现和研究那些与受体、酶、凝集素、抗体、核酸以及其他生物分子亲和的多肽配基和酶的底物专一性,该技术在药物的发现,疫苗的设计等医学领域也有着潜在的应用价值.     

Peptide oligomers from ultra-short peptides using sortase

Sortase A catalyzed ligation of ultra-short peptides leads to inter/intra-molecular transpeptidation to form either linear or cyclic oligomers dependent upon the peptide length. Cyclic peptides were the main products for peptides with more than 15aa. However, for ultra-short (<15aa) peptides, cyclic oligomers became predominant in prolonged reactions. Peptides with 1–3 aminoglycines were equally active but peptide oligomers from peptide containing more than one aminoglycine were prone to hydrolysis.     

一种新阿片肽的分离纯化

报道了一种新阿片肽OP1的分离纯化。将重组毕赤酵母经适宜的生长和表达培养后,所得的发酵液经离心得无细胞上清液,上清液经超滤后过Sephadex G-10柱。将经Sephadex G-10柱所得具有阿片活性的粗组分用HPLC-MS分析,根据阿片肽N-端均有一个酪氨酸残基,且在肽链的第三或第四位上有一个芳香族氨基酸残基这一性质,依据分子量确定活性组分中可能存在的所有阿片肽,然后根据这些阿片肽的等电点,利用AKTA Purifier 100快速纯化系统的DEAE-阴离子交换纤维素柱将其进一步分离,活性组分再用Sephasil peptide C18反相高压液相柱分离得到活性组分OP1肽,鉴定纯度后测定其氨基酸组成。最后确定该肽的一级序列为YPFPGPIRYG,该阿片肽序列目前尚未见报道。     

Peptide autoinducers in bacteria

The review classifies and analyzes the literature data on bacterial peptide autoinducers (AIs), responsible for intra- and interspecies communication (quorum sensing) between bacterial populations. The most important families of peptide AI are discussed, including a large group of bacteriocins, subdivided into lantibiotics (class I), unmodified heat-stable bacteriocins (II), large bacteriocins with M_r > 30 kDa (III), and “circular” bacteriocins (IV), as well as CSP peptides (Competence-Stimulating Peptides), peptides with thiolactone and lactone cycles, and short tryptophan-containing peptides with pheromone activity. The sensor systems are discussed, which recognize peptide AIs and regulate the activity of bacterial intracellular effector systems. For different families of peptide AIs, the typical features of structural organization are determined, which are responsible for their biological activity