TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成     

N-糖链合成抑制剂对NIH3T3细胞粘附作用和整合蛋白表达的影响

研究了Ｎ－糖链合成抑制剂——Ｄｅｏｘｙｍａｎｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（ＤＭＭ）和衣霉素（ＴＭ）对ＮＩＨ３Ｔ３细胞粘附作用和细胞表面α５β１整合蛋白含量的影响．研究结果发现甘露糖苷酶Ⅰ抑制剂－ＤＭＭ处理ＮＩＨ３Ｔ３细胞后,３Ｈ－甘露糖（３Ｈ－Ｍａｎ）参入ＮＩＨ３Ｔ３细胞较对照细胞增加一倍,多天线复杂型糖链增加１８％,而细胞表面α５β１整合蛋白与纤连蛋白粘附能力却下降１７％,但对膜整合蛋白α５和β１亚基表达量无明显影响,提示不成熟的糖链对整合蛋白参与的细胞粘附功能有一定影响,但不影响糖蛋白运输及整合到膜上．十四糖二磷酸长萜醇合成抑制剂——ＴＭ为０．５μｇ／ｍｌ时,Ｎ－糖链合成显著抑制,３Ｈ－Ｍａｎ参入减少了５２％,细胞粘附能力下降了３７％,细胞表面膜整合蛋白α５亚基下降了２２％,而β１亚基无明显变化,提示ＴＭ的脱糖基化作用可引起α５亚基转运至细胞膜表面下降,以至影响了细胞的粘附能力．此外,脱糖整合蛋白与纤连蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ,Ｆｎ）的结合力下降也是原因之一．     

TNF—α—IL—1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的…

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶基因表达及ＮＯ生成的影响,结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显诱导ＶＳＭＣｉＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用,ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分凶制     

一氧化氮抑制内皮素促血管平滑肌细胞增殖作用的信号转导途径

培养的家兔胸主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）分别以内皮素（ＥＴ－１）、一氧化氮（ＮＯ）前体Ｌ－Ａｒｇ和ＮＯ供体ＳＩＮ－１刺激,或用ＥＴ－１＋Ｌ－Ａｒｇ、ＥＴ－１＋ＳＩＮ－１联合刺激,测ＶＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性及蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的改变,以研究ＮＯ抑制ＥＴ－１促ＶＳＭＣ增殖作用的信号转导途径。结果表明：（１）ＥＴ－１ １０＾－８ｍｏｌ／Ｌ单独刺激,＾３Ｈ－     

眼镜王蛇蛇毒神经毒素CM—11二级结构单元的判定

眼镜王蛇毒液抽提物ＣＭ－１１为含７２个残基的长链神经毒素,对其进行了ＤＱＦ－ＣＯＳＹ,ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ等一系列２Ｄ－ＮＭＲ谱测定,通过系统地分析各种ＮＯＥ信息,化学位移的分布等数据推测了蛋白质有规律二级结构,最后利用ＭＣＤ主链引导法确定它的二级结构,其中有三段反平行β折叠股（Ｉ２０～Ｗ２６,Ｒ３７～Ａ４３和Ｖ５３～Ｓ５９）,一段α螺旋构象（Ｗ３０～Ｇ３５）和四个可能的转角（Ｐ７～Ｋ１０,Ｃ１     

当归对高脂血清所致ECV_(304)细胞损伤的保护作用

实验观察了高脂血清对培养的人脐静脉内皮细胞（ＥＣＶ３０４）的损伤及传统中药当归的保护作用,以探讨当归的抗动脉粥样硬化作用及其可能机制。培养人脐静脉内皮细胞,以高脂血清作损伤因子,用扫描电镜观察细胞的超微结构,分光光度法检测细胞培养液中一氧化氮（ＮＯ）的含量,免疫细胞化学方法检测细胞表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）及转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）的表达。与高脂血清孵育２４ｈ后,内皮细胞的超微结构明显收损,且细胞表面ＩＣＡＭ－１、ｂＦＧＦ的表达明显增加,而细胞培养液中ＮＯ的量及细胞表达ＴＧＦβ１明显减少。加入当归后,高脂血清对内皮细胞的这些作用均可被逆转。当归对内皮细胞中ＩＣＡＭ－１、ｂＦＧＦ、ＴＧＦβ１及ＮＯ表达改变的影响可能与其抗动脉粥样硬化的作用有关。     

中缝大核在刺激视上核镇痛中的作用

运用核团灌流液的放免测定和高压液相色谱法以及核团内注射拮抗剂,观察了化学刺激下丘脑视上核（ＳＯＮ）对中缝大核（ＮＲＭ）灌流液内催产素（ＯＴ）、精氨酸加压素（ＡＶＰ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）含量的影响以及ＮＲＭ内注射ＡＶＰ、５－ＨＴ或ＯＴ受体拮抗剂对痛阈（ＰＴ）的影响。结果表明：ＳＯＮ内注射Ｌ－谷氨酸（Ｌ－Ｇｌｕ）１０μｇ后动物痛阈明显升高,ＮＲＭ灌流液中ＯＴ和５－ＨＴ的含量明显高于对照组水平,ＡＶＰ的含量仅有一过性增加。ＮＲＭ内注射ｏＴ或５－ＨＴ拮抗剂可逆转化学刺激ＳＯＮ引起的镇痛作用;而ＡＶＰ的Ｖ＿(１／２)受体拮抗剂也轻度抑制这种镇痛作用,但Ｖ＿１拮抗剂对此作用无影响。以上结果提示：在刺激ＳＯＮ镇痛中,ＯＴ起着重要作用,Ｌ－Ｇｌｕ刺激ＳＯＮ的ＯＴ细胞释放ＯＴ,作用于ＮＲＭ细胞的ＯＴ受体和Ｖ＿２受体而产生镇痛作用,５－ＨＴ在此过程中也发挥重要作用。     

日本续断中新五糖皂甙的结构及其核磁共振光谱

从日本续断（Ｄｉｐｓａｃｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ Ｍｉｑ．）根的乙醇提取物中分得一个新的三萜皂甙,其结构被鉴定为３．－Ｏ－〖β－Ｄ－吡喃葡萄糖（１→）〗〖α－吡喃鼠李糖（１→３）〗－β－Ｄ－吡喃葡萄３９糖（１→３）－α－Ｌ吡喃鼠李糖（１→２）－α－吡喃阿拉伯糖－齐墩酸。采用一维ＳＥＭＤＹ谱和转坐标ＮＯＥ差谱核磁共振新技术相结合的方法,对糖体间和９糖体与甙元间的连接顺连接位置进行了研究。该方法的结果     

白细胞介素－1β对新生大鼠胰岛素分泌的作用及其机制分析

本实验采用分离培养的新生大鼠胰岛，观察了白细胞介素１β（ＩＬ－１β）和Ｎ￣Ｇ－甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＭＡ，ＮＯ合成酶的竞争性阻断剂）对胰岛素分泌及对胰岛中ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度的影响。结果如下：（１）ＩＬ－１β（５、１０、２０Ｕ／ｍｌ）能抑制基础的和由葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌。ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用呈明显的量效关系，抑制率分别为５３．％，６０．５％和７０．７％。（２）ＮＭＭＡ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）能阻断ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用。（３）ＩＬ－１β能增加胰岛内ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度，而ＮＭＭＡ能阻断这一效应。以上结果表明，ＩＬ－１β能抑制新生大鼠胰岛β细胞的功能，这一作用可能是通过ＮＯ实现的。     

去甲肾上腺素对棕色脂肪组织募集反应的调节作用

去甲肾上腺素（ＮＡ）可引起棕色脂肪组织（ＢＡＴ）的产热作用,也是ＢＡＴ募集反应主要的调节物质。ＢＡＴ中存在的肾上腺素受体（ＡＲ）至少包括α１,α２,β１和β２四型。ＢＡＴ的产热作用主要由β３－ＡＲ介导;其细胞增殖和细胞分化分别由β１－ＡＲ和β３－ＡＲ介导。与ＢＡＴ募集有关的几种转录因子的表达也受ＮＡ的调控,例如ｃ－ｆｏｓ和非成熟细胞Ｃ／ＥＢＰα基因的表达受β－和α１－ＡＲ的调节;Ｃ／ＥＢＰβ和成熟     

天花粉蛋白T18肽片段的溶液构象及T14,TDK和T18肽…

用＾１Ｈ ＮＭＲ法测定Ｔ１８肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１８）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１８）中的溶液构象。ＭＳ１８含有Ｉｌｅ３￣Ｇｌｕ７和Ａｌａ１２￣Ｇｌｎ１６两段β－折叠链;而ＦＰ１８则转变为α－螺旋结构。综合分析Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ三个模型肽的结构性质和稳定性,比较肽链序列和溶剂作用,提出肽链局部优势结构的概念,并据此讨论天花粉蛋白小结构域折叠起始过程。     

ET—1,NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者,也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素－１（ＥＴ－１）一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响,结果表明ＥＴ－１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流;ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴ－１诱导的钙内流,其作用呈剂量依赖性,ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制了ＰＡＳＭＣ的胶原合成,而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白,用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８：１的金属：蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ＰＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域,通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白（ａｐｏＭＴ）．用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８１的金属蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ｐＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ｉ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域．通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了Ｎ末端为Ｍｅｔ,分子量３０００左右,金属蛋白摩尔比为５～５．５１的ＭＴβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符     

白细胞介素—1β对新生大鼠胰岛素分泌的作用及其机制分析

本实验采用分离培养的新生大鼠胰岛,观察了白细胞介素１β（ＩＬ－１β）和Ｎ＾Ｇ－甲基－Ｌ－精氨酸（ＮＭＭＡ,ＮＯ合成酶的竞争性阻断剂）对胰岛素分泌及对胰岛中ｃＧＭＰ水平和亚硝酸盐浓度的影响。结果如下：（１）ＩＬ－１β（５、１０、２０Ｕ／ｍｌ）能抑制基础的和由葡萄糖（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）刺激的胰岛素分泌。ＩＬ－１β对葡萄糖刺激的胰岛素分泌的抑制作用呈明显的量效关系,抑制率分别为５３．４％,６０．５％和７     

滇重楼地上部分的配糖体

从滇重楼ＰａｒｉｓｐｏｌｙｐｈｙｌｌａＳｍ．ｖａｒ．ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ（Ｆｒ．）Ｈ－Ｍ,地上部分,分离出４个微量的配糖体,经光谱分析和化学降解证明其化学结构分别为２５Ｓ－异钮替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）］－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ａ）,２６－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基－纽替皂甙元－３－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→２）［α－Ｌ－鼠李吡喃糖基（１→４）－β－Ｄ－葡萄吡喃糖甙（Ｂ）,山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄吡喃甙（Ｃ）,７－Ｏ－α－Ｌ－鼠李吡喃糖基－山奈酚－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→６）－β－Ｄ－葡萄糖甙（Ｄ）。     

二甲亚砜与维甲酸对人卵巢癌细胞COC1的生长抑制及转化生长因子β_1表达的影响

本实验以人卵巢癌细胞株（ＣＯＣ１）为模型,观察诱导分化剂二甲亚砜（ＤＭＳＯ）与维甲酸（ＲＡ）对该细胞生长增殖、ＤＮＡ合成和转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在细胞内表达的影响。结果显示：ＤＭＳＯ与ＲＡ对人卵巢细胞ＣＯＣ１生长有明显的抑制作用,生长曲线表明作用５天后其生长抑制率分别为６２．７％和４２．１％;３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入实验说明ＤＭＳＯ组与ＲＡ组的单位时间计数率（ＣＰＭ）明显低于对照组（Ｐ＜０．０１）。用药３天后百分掺入抑制率分别为６０．４％与３７．９％,表明ＤＭＳＯ与ＲＡ抑制ＣＯＣ１细胞的ＤＮＡ合成;免疫细胞化学反应表明,ＤＭＳＯ或ＲＡ处理５天后,对照组细胞ＴＧＦβ１表达为阳性,定位于胞浆,而处理组细胞ＴＧＦβ１呈阴性或弱阳性反应。以上结果提示ＤＭＳＯ和ＲＡ对人卵巢癌细胞有一定的诱导分化作用。     

金属硫蛋白抗内皮素损伤膜蛋白的电子顺磁共振自旋标记研究

以大鼠红细胞膜为研究对象,以脂肪酸自旋标记物５ＮＳ,１６ＮＳ插入膜脂,蛋白自旋标记物ＭＳＬ标记膜蛋白,观察内皮素（ＥＴ）损伤后膜脂流动性、膜蛋白构象的变化及金属硫蛋白（ＭＴ）抗ＥＴ保护生物膜作用。结果表明ＥＴ（１×１０－９,１０－８及１０－７ｍｏｌ／Ｌ）对膜脂流动性无明显影响,但在５×１０－９及１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ浓度下均改变膜蛋白构象,而且对膜蛋白构象的影响呈剂量依赖性。１×１０－５ｍｏｌ／ＬＭＴ能抵抗５×１０－９ｍｏｌ／ＬＥＴ对膜蛋白损伤,保护生物膜。     

大萼香茶菜庚素的化学结构

从大萼香茶菜（Ｒａｂｄｏｓｉａ ｍ ａｃｒｏｃａｌｙｘ （Ｄｕｎｎ） Ｈａｒａ）叶的乙醇提取物中又分离到３ 个二萜成分（结晶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）,通过ＩＲ、ＭＳ、１Ｈ－１Ｈ ＣＯＳＹ、１３Ｃ－１Ｈ ＣＯＳＹ和ＮＯＥ等光谱分析及衍生物的制备,确定结晶Ⅰ的结构为ｅｎｔ－７β－２０－ｅｐｏｘｙ－６α, ７α,１４α,１５α,１６α－ｐｅｎｔａｈｙｄｒｏｋａｕｒａｎｅ－１７－ａｃ－ｅｔａｔｅ,为新的二萜化合物,命名为大萼香茶菜庚素;结晶Ⅱ和Ⅲ为已知化合物ｒａｂｄｏｐｈｙｌｌｉｎ Ｈ和ｐｏｎｉｃｉｄｉｎ。     

NMR法研究天花粉蛋白T14肽片段的溶液构象

本文报道用１ＨＮＭＲ法测定Ｔ１４肽在ＤＭＳＯ（ＭＳ１４）,Ｈ２Ｏ（ＨＯ１４）,５０％甲醇（ＭＥ１４）和５０％六氟异丙醇（ＦＰ１４）中的溶液构象。通过ＮＯＥ效应,偶合常数,Ｈ／Ｄ交换速率表征和定位二级结构和疏水域,计算两面角φ和螺旋形成几率。结果表明序列Ｓｅｒ９～Ｔｌｅ１７在ＨＯ１４中较为有序,存在强流水作用。推测是类似螺旋样的亚稳结构;而在ＤＭＳＯ中序列ＳＡＬＳＫＱ存在形成α－螺旋结构的可能性,且六氟异丙醇（ＨＦＰ）促进α－螺旋的稳定性,并综合分析Ｈ２Ｏ,ＤＭＳＯ,ＭｅＯＨ和ＨＦＰ４种溶剂对Ｔ１４肽二级结构形成的作用。