不同产地冬虫夏草的质量参数测定

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是传统的名贵中药,其不同产地的质量评价存在争议。本文对从青海、四川、西藏和云南采集的冬虫夏草进行形态和分子鉴别,测定腺苷、肌苷、麦角甾醇、虫草酸和多糖的含量,检测甲醇提取物抗DPPH自由基和抗小鼠乳腺癌细胞MT-1的活性。结果表明,采集的样品均为冬虫夏草;在四种样品中,虫草酸和多糖的含量高于腺苷、肌苷和麦角甾醇的含量;采自云南和青海冬虫夏草的五种活性成分含量均高于西藏和四川冬虫夏草的含量;云南和西藏的冬虫夏草清除DPPH自由基活性高于青海和四川的冬虫夏草;不同产地的冬虫夏草抑制MT-1活性没有显著性差异。结果为综合科学评价冬虫夏草质量提供参考。     

冬虫夏草提取物的美白作用

以冬虫夏草提取物(Chinese cordyceps extract)为研究对象,通过蘑菇酪氨酸酶活性抑制试验和小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)黑素合成抑制试验考察冬虫夏草提取物的美白活性。结果显示冬虫夏草提取物(质量浓度40～200 mg/m L)呈剂量依赖性抑制蘑菇酪氨酸酶的活性,且在安全剂量(质量浓度0.1～0.5 mg/m L)下显著抑制小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)内的黑色素合成(P0.05)。说明冬虫夏草提取物能通过抑制酪氨酸酶活性有效阻滞黑色素的合成,从而实现美白作用。     

PAG-OA衍生物Ⅰ5对酿酒酵母转化合成ATP的影响

一种新型促渗透剂PAG-OA(聚氧烯油酸二醇)I 5,甲苯、气流干燥及吐温100等,对酿酒酵母进行细胞渗透性增强处理,考察了酿酒酵母的促渗透性对三磷酸腺苷生产的影响.结果表明,与其他促渗透方式相比,I 5对酿酒酵母三磷酸腺苷的产量有很大的提高.加入0.022 mol/L腺苷,三磷酸腺苷得率为0.038 mol/L,转化率98%;三磷酸腺苷合成时间缩短为1.5 h.经促渗透化处理的酿酒酵母细胞能很好的释放胞内代谢的极性物质;其三磷酸腺苷生产活性大幅度提高.     

PAG-OA衍生物I5对酿酒酵母转化合成ATP的影响

一种新型促渗透剂PAG-OA（聚氧烯油酸二醇）I5,甲苯、气流干燥及吐温100等,对酿酒酵母进行细胞渗透性增强处理,考察了酿酒酵母的促渗透性对三磷酸腺苷生产的影响。结果表明,与其他促渗透方式相比,I5对酿酒酵母三磷酸腺苷的产量有很大的提高。加入0．022mol／L腺苷,三磷酸腺苷得率为0．038mol／L,转化率98％;三磷酸腺苷合成时间缩短为1．5h。经促渗透化处理的酿酒酵母细胞能很好的释放胞内代谢的极性物质;其三磷酸腺苷生产活性大幅度提高。     

舒敏中药提取物制备及其功效评价研究CSCD

本文对香薷、山慈菇、独活、三棱、孩儿茶、远志六味中药进行提取,采用抑制透明质酸酶活性、清除自由基、抑制组胺释放实验来验证组方提取物的活性,并将其添加到乳液配方中,进行舒敏功效评价。结果表明:质量分数为6%的组方提取物对透明质酸酶抑制率达80.06%,对超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH自由基清除率均在70%以上;浓度为200μg/mL的组方提取物抑制组胺释放率达52%,这表明组方提取物对透明质酸酶、组胺释放及三种自由基均有一定的抑制或清除作用。人体功效评价结果表明,添加了组方提取物的乳液能够显著减少皮肤血红素(P<0.01),减少皮肤水分散失(P<0.01),提高皮肤水分含量(P<0.01),这表明该乳液能有效舒缓皮肤过敏症状,增强皮肤屏障功能。     

胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下植物细胞损伤和过氧化氢及其清除酶水平的调节

细胞外三磷酸腺苷（extracellular adenosine-5'-triphosphate）是植物细胞的重要信号分子。以烟草悬浮细胞BY-2（Nicotiana tabacum L.cv.Bright Yellow-2）为材料,探讨了胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下细胞损伤、H₂O₂（过氧化氢）含量及H₂O₂清除酶活性的影响。结果显示,随着Pb（NO₃）₂浓度的不断提高（30~400 μmol·L^-1）,细胞外三磷酸腺苷含量呈现出逐渐下降的趋势,但胞内三磷酸腺苷含量及细胞的受损伤程度逐渐增大;同时,H₂O₂含量和过氧化氢酶的活性均有所上升,并在200 μmol·L^-1 Pb（NO₃）₂处理下达到最大值,而过氧化物酶的活性则不断降低。较之Pb（NO₃）₂胁迫下的细胞,对Pb（NO₃）₂胁迫的细胞加入外源三磷酸腺苷使得细胞受损伤程度显著降低,H₂O₂含量减少,过氧化氢酶活性减弱,而过氧化物酶活性增强。实验结果表明,Pb（NO₃）₂胁迫诱导的植物细胞损伤和H₂O₂及其清除酶水平的变化能受到细胞外三磷酸腺苷水平的调节。     

腺病毒5型E1A基因对永生化人支气管上皮细胞生长的抑制作用及其机理

腺病毒 5型早期区 1 A( Ad5E1 A)基因是新近发现的一个肿瘤抑制基因 .其产物 E1 A蛋白是多功能转录因子 ,它能从正、负 2个途径调控多种细胞基因的转录 ,具有降低体内致瘤性及抗转移等活性 .为了探讨 E1 A基因对代表肺癌癌前病变的永生化人支气管上皮细胞的生长是否具有抑制作用 ,构建了在真核细胞高表达 E1 A基因的重组质粒 p CEP4- E1 A.通过脂质体介导将 E1 A基因转入永生化人支气管上皮细胞第 1 68代 ( MP1 68)中 ,经潮霉素筛选 ,获得稳定表达 E1 A的永生化人支气管上皮细胞 ( MP1 68- E1 A) .结果表明 :E1 A基因的稳定表达抑制了 HER- 2 / neu基因的表达 .转染细胞 ( MP1 68- E1 A)回复扁平形态、恢复细胞生长的接触性抑制 ,细胞群体生长缓慢 (倍增时间是 MP1 68- vect细胞的 1 .41倍 ) ,细胞周期 G1期阻滞并出现凋亡 ,软琼脂集落形成抑制率达73.86% .结果说明 E1 A基因的稳定表达明显抑制了永生化人支气管上皮细胞的生长 .该作用可能与 E1 A抑制 HER- 2 / neu基因的表达及诱导永生化人支气管上皮细胞凋亡有关 .     

本斯石斛花的香气成分及抗氧化活性研究

为探究本斯石斛鲜花的香气组成及抗氧化活性,本文采用溶剂辅助风味蒸馏法对本斯石斛鲜花的挥发性成分进行提取,采用3种体外自由基清除模型结合人永生化皮质细胞内SOD酶活力修复模型对本斯石斛花的提取物进行抗氧化活性评价。通过GC-MS对挥发物的化学组成进行分析,峰面积归一化法确定各化合物的相对百分含量,结合嗅觉阈值所计算得到的气味活度值,确定了本斯石斛鲜花中的关键香气化合物。结果显示:从本斯石斛花挥发物中共鉴定出51种化合物,约占总含量的90.0%,其中关键香气成分16个,包括苯甲醇(45.5%)、香草醛(17.0%)、己醛(3.4%)、苯乙醇(2.7%)等,修饰性香气化合物6个以及潜在香气化合物3个,这些成分共同构成了本斯石斛鲜花具有的青草香、甜香、花香等的香气特征。本斯石斛鲜花高浓度乙醇提取物在羟基自由基清除、DPPH自由基清除、ABTS自由基清除模型、人永生化皮质细胞内SOD酶修复模型评价中均表现出较强的抗氧化活性。本研究为本斯石斛花相关香型日化产品和抗氧化活性物质的研发提供了科学依据。     

树莓粗多糖对UVB诱导HaCaT细胞光损伤的防护作用

多糖是树莓功能性成分之一,具有抗炎、抗氧化、抗疲劳、降血糖、免疫调节等多种药理作用。但树莓多糖对紫外线造成的皮肤细胞光损伤是否具有防护作用尚未见报道。本研究旨在探究树莓粗多糖(raspberry crude polysaccharide,RCP)对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用。通过建立HaCaT细胞的UVB光损伤模型,利用CCK-8法测定细胞活力,酶联免疫吸附法(enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)和微板法测定HaCaT细胞中炎症因子、基质金属蛋白酶和抗氧化因子的含量,评估RCP的抗UVB活性。采用体外自由基清除实验检测RCP对DPPH自由基(DPPH·)和ABTS自由基(ABTS·⁺)的清除能力。结果表明,RCP能明显提高被UVB损伤的HaCaT细胞活力,且随浓度升高作用增强(P < 0.01或P < 0.05)。与未加入RCP处理的HaCaT细胞比较,人基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、人白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、人白介素-6(interleukin-6,IL-6)、人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的含量明显降低(P < 0.01或P < 0.05),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)以及人硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)的含量显著升高(P < 0.05)。此外,RCP对DPPH·和ABTS·⁺的最大清除率分别为91%和94%。以上结果表明,RCP能够通过降低炎症水平和缓解氧化应激来预防UVB对HaCaT细胞造成的光损伤,为天然抗UVB物质的研发提供新思路,也为树莓资源的高值化利用和精深开发提供参考。     

水淹对杨树木材提取物清除DPPH有机自由基活性影响初探

以生长在长江滩地三种类型(江滩、洲滩、湖滩)上、三种水淹状况下2个品系的人工林杨树木材(欧美杨无性系72杨、美洲黑杨无性系69杨)木材为研究对象,用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)酶标仪法,对其80%甲醇提取物的自由基清除活性进行了比较,发现相同立地上杨树边材和心材提取物的自由基清除活性存在显著差异;且边材提取物的自由基清除活性普遍较高.不同立地上杨树心材提取物的自由基清除活性差异不显著;但边材提取物的自由基清除活性存在较大的差异,其中水淹深度为1 m和3 m的杨树边材提取物自由基清除活性差异达到极显著水平.相关性分析表明,心材提取物的IC50与水淹深度呈显著的负相关,边材提取物的IC50与水淹深度呈极显著的正相关.     

5''-磷酸腺苷对小鼠脾细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究5'-磷酸腺苷(5'-AMP)体外抗氧化和对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力。方法用化学比色法测定5'-AMP体外清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)的能力;建立过氧化氢(H2O2)氧化损伤体外培养小鼠脾细胞模型,用MTT法检测5'-AMP修复受损伤脾细胞的作用,并分析其对细胞抗氧化体系及抗氧化能力的影响。结果5'-AMP具有剂量依赖性的体外抗氧化和清除活性氧能力,添加0·5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L5'-AMP均能显著修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤(P<0·05),总抗氧化能力和抗氧化酶类活力(P<0·01),5'-AMP添加量大于1mmol/L时,可显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0·01)。其细胞培养液的氧自由基(ROS)水平逐渐降低,5'-AMP添加量为10mmol/L时,ROS水平接近对照组水平。结论5'-磷酸腺苷能显著修复氧化损伤,具有显著的抗氧化作用。     

内质网蛋白44(ERp44)通过1, 4, 5-三磷酸肌醇受体介导基因转录

细胞核内钙离子浓度的增加可以引起包括钙离子激活的基因转录在内的很多生理功能.运用Western blot、免疫荧光、实时定量聚合酶链反应、钙成像以及外源三磷酸腺苷刺激细胞释放钙离子等试验方法,发现1,4,5-三磷酸肌醇受体和内质网蛋白44(ERp44)在内质网和核膜上都有很好的共定位.外源三磷酸腺苷可以通过1,4,5-三磷酸肌醇受体刺激核内钙瞬变并磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)、刺激原癌基因c-Myc的表达.但是,这些功能都能被1,4,5-三磷酸肌醇受体抑制剂2-氨乙氧基二苯酯硼酸(2-APB)和过表达内质网蛋白44(ERp44)所抑制.这些结果均提示在子宫颈癌HeLa细胞中内质网蛋白44(ERp44)通过1,4,5-三磷酸肌醇受体而介导基因转录.     

名刊封面

《科学》(2005.1.14) 抗肺结核新药一组三磷酸腺苷酶(ATP)正穿过一个细菌细胞膜的图案构成了本期《科学》杂志的封面。在导致肺结核的细菌细胞内部, 一种大有前途的二芳基喹啉新型药物能够与这种横跨膜的酶的一部分发生反应,从而通过阻碍为肺结核菌提供能量的三磷酸腺苷酶的合成来杀死这种细菌。生物试验表明,这种药能长期存留在体内,意味着可以减少剂量的服用次数,新药一个月获得     

金樱子总黄酮体外抗氧化活性的研究

本文研究了金樱子总黄酮(RLTF)体外清除自由基的能力,并观察其对过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗氧化作用的影响。采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法、DPPH法分别测定RLTF对超氧阴离子自由基(O-·2)、羟自由基(·OH)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率;Hoechst染色法分析各组细胞凋亡情况;MTT法测定细胞活力;分光光度法检测各组细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性。结果显示,在20~200μg范围内,随着样品加入量增大,RLTF对·OH和DPPH·的清除率逐渐增大,而对O-·2的清除率则是先增大后减少;RLTF对O-·2的清除作用偏低,对·OH的清除率与芦丁相当,对DPPH·的清除能力则强于芦丁而弱于Vc。Hoechst染色观察结果表明RLTF预处理细胞后,能明显提高细胞的抗凋亡作用。与H2O2损伤组比较,不同浓度RLTF预处理组的细胞活力均显著升高(P0.01);不同浓度RLTF预处理组细胞中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P0.01),且呈剂量依赖性。上述结果表明,RLTF具有较强的自由基体外清除能力,能有效提高氧化损伤HUVEC细胞中SOD、CAT、GSH-Px的酶活性,其可能通过清除细胞内自由基和提高细胞抗氧化酶活性来提高细胞的抗氧化活性。     

γ-聚谷氨酸的抗氧化及对UV辐射致皮肤细胞光老化的修复作用

寻找天然抗氧化物用于修复皮肤光老化问题是目前的研究热点之一。γ-聚谷氨酸(γ-PGA)是由微生物发酵制备的一种天然高分子聚合物材料,具有清除自由基的能力,但其抗氧化、抗皮肤光老化效果及与γ-PGA分子量的关系尚未明确。本文中,笔者考察不同分子量的γ-PGA对超氧阴离子自由基(·O~-_2)、羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(·DPPH)的清除能力。结果显示:不同分子量的γ-PGA对以上3种自由基均表现出一定程度的自由基清除活性,清除率可分别达31.36%、97.55%和74.64%。通过构建紫外线诱导小鼠皮肤成纤维细胞(L929)氧化损伤光老化模型,确定不同分子量的γ-PGA都能一定程度修复光老化细胞损伤并能减少光老化细胞中氧自由基(ROS)、氮自由基(NO)的增加,其中分子量3.0×10~5的γ-PGA修复光老化细胞损伤的效果最佳。     

冬虫夏草对缺血再灌注损伤修复和作用机制的研究进展

冬虫夏草是珍贵中药材,内含丰富的生物活性成分,冬虫夏草对器官缺血性再灌注损伤具有一定的保护作用。文中首次总结了冬虫夏草对心、脑和肾缺血再灌注损伤的修复作用和相关调控机制最新的研究进展。冬虫夏草在肾缺血再灌注损伤过程中能够清除多余的自由基,抑制炎症级联反应、肾细胞凋亡、内质网应激和调控抗氧化基因的表达,降低氧化应激水平;通过调节VEGF和NGAL,来改善血管内皮损伤及慢性缺氧损伤,从而起到一定的保护肾脏作用。冬虫夏草能有效促进脑组织中SOD、GSH-PX和CAT活性,降低MAD含量,抑制脂质过氧化反应,改善自由基代谢;通过抑制炎症因子TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达,促进脑缺血损伤功能恢复;冬虫夏草增加Hcn2、S1c6a1基因表达上调和Hspa12a表达,对脑神经元起到保护作用。冬虫夏草通过减缓心律失常、提高机体耐缺氧能力、稳定溶酶体膜以及改善心肌的能量代谢,保护心肌缺血再灌注损伤MIRI后的心肌损伤;冬虫夏草能使Grp78和Caspase-12的m RNA及mi R-455的含量均降低,从而减少MIRI后内质网应激介导的细胞凋亡。上述研究结果的总结为后续系统地研究冬虫夏草保护器官性缺血再灌注损伤的作用提供参考。     

灵芝抗氧化清除自由基作用的研究

文中综述了灵芝的抗氧化清除自由基作用。灵芝对各种因素引起的脑、心脏、胰腺、肝脏、胃肠道、肾脏和其他重要脏器的脂质过氧化损伤具有明显的保护作用。灵芝可显著减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,增强抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)以及其他抗氧化酶的活性。稹灵芝对体外培养的巨噬细胞(小鼠)、胰岛细胞(小鼠)、大脑皮层细胞(大鼠)、嗜铬细胞瘤细胞(大鼠)、血管内皮细胞(大鼠、人)和皮肤角质细胞(人)的氧化损伤具有明显保护作用。灵芝在体内外对不同动物模型和细胞模型的抗氧化清除自由基作用可能与其免疫调节、抗肿瘤、降血压、降血糖、保肝、心血管保护和抗衰老作用的机制有关。     

海藻多糖的单糖组成对体外抗氧化活性的影响

比较广西北部湾石莼(Ulva lactuca L.)、海带(Laminaria japonica)、裙带菜(Undaria pinnatifida Surin-gar)、紫菜(Porphyra)的单糖组成及抗氧化活性的差异,揭示多糖结构与其体外抗氧化活性的关系。利用PMP柱前衍生化HPLC分析海藻多糖的单糖组成,采用羟自由基清除试验、超氧阴离子自由基清除试验及DPPH自由基清除试验指征其体外抗氧化活性,结果表明,4种海藻多糖的单糖组成在主成分空间分布离散,石莼及紫菜主要由葡萄糖组成,海带主要由甘露糖组成,裙带菜则主要由半乳糖组成;其体外抗氧化活性存在显著差异,裙带菜多糖对DPPH的清除能力(半抑制浓度IC₅₀值为0. 56±0. 02 mg/mL)显著高于其他3种海藻多糖;石莼、裙带菜与海带对羟自由基均有较强的清除活性,而紫菜多糖对羟自由基的清除能力较差(IC₅₀值为26. 59±0. 98mg/mL);石莼与裙带菜对超氧阴离子的清除活性较强,显著高于海带与紫菜,其中石莼显著高于裙带菜,IC₅₀值分别为1. 61±0. 17、2. 73±0. 06 mg/mL。相关性分析及冗余分析结果表明,对抗氧化活性影响较为显著的因子为葡萄糖(Glc)、核糖(Rib)、木糖(Xyl)(P <0. 01)。     

蒜瓣在温度调节下解除休眠前后的细胞化学观察

恒温30℃贮存大蒜可以延长休眠10来个月,短时期的放置在4℃下就能解除休眠。蒜瓣外表皮细胞核的变化可以作为判断休眠解除与否的指标。解除休眠后蒜瓣外表皮细胞核显示出酸性磷酸酶、三磷酸腺苷酶与过氧化物酶的活性;处于休眠状态的表皮细胞中细胞核一直保持休眠期所特有的圆形,位于细胞中央,细胞内没有上述三种酶的活性。在30℃中保存一年以上,细胞也会发生局部解体与细胞内含物的撤离,细胞内明显地分布着许多蛋白质颗粒,细胞间有“核穿壁”现象。     

小鼠胸腺皮质外位腺苷三磷酸酶的细胞化学定位

对探索细胞之间相互作用的机制,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠胸腺皮质内腺苷三磷酸酶进行了细胞化学定位。结果表明该酶活性主要位于毛细血管基膜,内此细胞皮膜和吞饮小泡;上皮性网状细胞和胸腺细胞的质膜外层,特别是二者的相邻面。巨噬细胞及上皮性网状细胞的溶酶和囊泡也具有此酶活性。本文对外位腺苷三磷酸酶有抑制腺苷三磷酸诱发胸腺细胞凋落死亡的可能性进行了讨论。