电镜Formvar膜制备要点

在光学显微镜下研究各种对象时,标本都是放在载玻片上,但在电镜下,由于电子不能穿透玻璃,所以不能用玻片作为标本的支持物,于是便采用一种很薄的电子透明薄膜附着在金属网上作为支持膜,用以支持所要观察的各种样品。金属载网一般有直径3毫米与2毫米两种,常用的载网是铜质的,故称铜网,铜网上的这层薄厚度约200A。如果膜太薄时,样品容易漂移或被电子束打破,膜太厚时,分辩率将降低。支持膜除了有一定的厚度和机械强度外,这层膜还应具有透明,在电镜下无可见的结构及与所装载的样品不起化学反应等特性。常用的支持膜有火棉胶膜和Formvar膜。高分辩研究时用碳膜或微筛膜(即带孔的膜)。由于Formvar膜     

家鸡联会复合体的制备

本文以家鸡为例介绍了联会复合体的制备方法,改进了原有界面铺展法制备联会复合体的程序,易于将光镜下观察到的材料直接转移到铜网上作电镜观察,为分析鸟类和其他动物的组型提供了一个新的方法。     

冰冻断裂方法在豌豆叶光合膜亚分子结构观察中的初步应用

当前在光合作用研究领域内,光合膜结构与功能的研究极为活跃;而电子显微镜冰冻断裂和冰冻蚀刻方法则是揭示生物膜(包括光合膜)亚分子结构的一种有效手段。冰冻断裂就是将生物材料迅速冷却固定后施以外力,使之断裂,再利用低温真空复型技术将材料的断裂面制成复型后于电镜下观察。如果材料断裂后,使其温度适当上升,让断裂     

大豆根瘤细菌周膜的冷冻复型研究

用冷冻复型电镜技术研究了中国丰收１１号大豆根瘤中的细菌周膜。细菌周膜的断裂面上有颗粒状物质,但Ｐ面和Ｅ面有所不同,前者颗粒密度较大。即使都在Ｐ面或Ｅ面上,不同的细菌或同一细菌不同部位的颗粒密度也不一样。在细菌周膜与细菌细胞壁之间有一个环形腔隙,腔的大小随细菌和细菌部位不同而异。腔中不仅有泡状和管状结构,有时也有类寄主细胞质物质。细菌周膜表面有近似半球形或嵴形隆起,它们可能是腔中管泡状结构压迫细菌周     

乳胶溶液电镜在检测线状和棒状植物病毒中的应用

建立了一种检测线状或棒状植物病毒的新的电镜技术。用聚苯乙烯乳胶预先包被铜网用以测定烟草花叶病毒,马铃薯X、Y病毒,玉米矮化花叶病毒表明,铜网上沾附的病毒数量与免疫电镜法相似,比直沾法多几倍至十几倍。乳胶溶液电镜法不需制备特异抗血清,方法简便快速,特别适合于植物样品的初次病毒检测工作。     

浮游病毒的电镜观察

直接用戊二醛固定水样中的浮游病毒,通过超速离心使已固定的浮游病毒沉淀到覆有Formvar膜和碳支持膜的铜网上,经醋酸双氧铀染色后,利用透射电镜对湖水中的浮游病毒进行观察．结果可观察到球形、杆状和蝌蚪状等形态各异的浮游病毒颗粒及球形病毒的囊膜子粒、杆状病毒的核衣壳、具有不同尾部的蝌蚪状病毒等的精细超微结构．从而建立了一种简便、快捷和高效研究浮游病毒的电镜方法．     

聚乳酸纳米粒穿透血脑屏障的分析电镜研究

观察以聚乳酸 (D ,L-polylacticacid,PLA)为材料制备、经吐温-80(T-80)表面改性的纳米粒对血脑屏障的穿透效果并探讨其机制 ,分别将FITC-Dextran、叶绿素铜作为PLA纳米粒的示踪标记 ,应用荧光显微镜、透射电镜及分析电镜观察经静脉注射入小鼠体内的PLA纳米粒在脑组织中的分布、穿透血脑屏障的特性。荧光显微镜观察到小鼠脑组织中散在及沿毛细血管壁分布的荧光颗粒 ,透射电镜可观察到小鼠脑毛细血管内皮细胞及周围脑组织中圆形或类圆形的外源性纳米粒 ;进一步采用分析电镜对颗粒处组织进行能谱分析证实其为叶绿素铜标记的PLA纳米粒。证实了T-80修饰的PLA纳米粒具有穿透血脑屏障的特性 ,机制可能是毛细血管内皮细胞的胞吞转运作用 ,同时 ,为研究纳米粒在组织内的定位提供了新的标记方法.     

金属铜在日本沼虾体内的分布和积累

应用组织化学、透射电镜和原子吸收光谱分析等方法,研究了铜在日本沼虾各主要器官和组织中的分布和积累情况。结果表明,在铜离子浓度为0.08 mg.L-1的溶液中暴露10 d后的日本沼虾肝胰脏内,具有大量的电子密度较高的铜颗粒,主要分布在肝胰脏的肝小管和R细胞中,在血腔中有从R细胞排出的铜颗粒;电镜观察发现铜主要分布在细胞内的溶酶体中,少量颗粒吸附在滑面内质网上;这些铜颗粒通过积聚,在细胞顶端逐渐增多,从而出现外排现象。中肠细胞内也分布有铜颗粒,细胞质出现空泡化,线粒体内嵴部分解体,并有铜颗粒附着在线粒体上。在触角腺中分布有少量的铜颗粒,触角腺细胞内的铜颗粒主要分布于溶酶体中,内质网出现弯曲。原子吸收光谱分析结果表明,肝胰脏中铜的含量最高,达到546.39 mg.kg-1,肝胰脏有储藏铜元素的功能。     

一种冰冻刻蚀装置的设计及应用

冰冻刻蚀(或断裂)技术与其他常规电镜技术相比具有许多优点。样品的快速冰冻可起到物理固定的作用这不仅减少了化学固定引起的人为改变,而且也省去了固定和脱水等步骤;对生物标本进行不同时期的冰冻可以得到不同阶段的细胞复型;在膜的研究方面;它可与生物化学方法相辅,同样起到生物化学方法所起的弱化膜疏水键的作用,从而使两层疏水性面的任何侧面的三维结构暴露出来,远比超薄切片所得到的两维片层结构要丰富。     

甜菊愈伤组织分生区细胞中膜内含物的超微结构研究

生长在分化培养基上的甜菊（Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）愈伤组织分生区细胞中存在双膜和多膜内含物。电镜观察表明,这些膜内含物是由一圈或多圈呈同民贺或卷绕状排列的内质网包围部分细胞质而形成的。双膜内含物内外层膜的靠细胞质表面有核糖体附着,而多膜内含物仅在其最外层潴泡的外膜上偶有和量核糖体附着。附着细胞液泡化程度的提高,多膜内含物通过液泡膜内陷而转移到液泡中或通过消化其中被包围的细胞质及内膜而转     

光学衍射技术分析生物样品的电镜照片

光学衍射技术在当前已成为生物电子显微术中一个重要的组成部分,它不仅是高分辨率电镜工作所不可缺少的手段,而且还可以用来帮助处理电镜照片,分析样品的结构。我们利用自己改装的光学衍射仪观察分析了一些生物样品,充分显示了这种技术的优点。下面举例说明:     

在被支持的膜筏上培养兰花组织

最近几年,由微孔聚丙烯膜或聚酯筛板制成的膜筏己被用来改进植物细胞和原生质体的培养.该技术(1)与固化的琼脂培养基相比能促进生长,(2)在培养基中容易从抑制物中移出,(3)对细胞次级代谢产物的回收仅有极微的阻碍作用,(4)简化了的无菌称量,(5)容易改变培养基,(6)能在同一容器中长期培养,(7)不需搅拌即可进行加氧作用和营养,(8)能够促进机械化.膜筏技术的一个缺点是该膜筏将会因植物组织生长所产生的重量而下沉. 在新加坡国立大学,C.S.Hew和同事们已经采用了修改的聚丙烯膜筏技术,培养兰     

日本鬼You背鳍棘毒腺中Ⅰ,Ⅱ型毒腺细胞关系的探讨

日本鬼Ｙｏｕ背鳍棘毒腺中有两种类型毒腺细胞－－Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞。两咱细胞结构明显不同。本文用形态学方法探讨Ⅰ型与Ⅱ型的细胞的关系。结果表明：毒腺组织中Ⅰ型细胞光镜下有的胸质内可见浅洒点样结构,并且在不同的细胞内其浅染点状结构的多少有差异;电镜下Ⅰ型细胞腊结构差异较大,有的Ⅰ型细胞的脂质双层膜性结构清楚;有的细胞膜外侧可见膜包小泡;有的细胞内侧面也见小泡形成、融合,使脂质双层膜间隙变宽,其内可见膜     

模拟鸡胚肝脏液晶类脂滴的体外构建

鸡胚发育肝脏组织中,特定时期大量出现的液晶态类脂滴（ｌｉｑｕｉｄｃｒｙｓｔａｌｌｉｐｏｉｄｄｒｏｐｌｅｔ,ＬＣＬＤ）脂组分主要由卵磷脂、胆固醇和油烯基胆固醇酯等组成。本文中,我们以此三组分在体外进行了模拟构建,结果表明构建的类脂滴具有与ＬＣＬＤ相同的光学织构（马尔它十字）,其冰冻蚀刻复型膜的电镜观察显示其结构也为同心圆片层;构建的类脂滴与鸡胚肝ＬＣＬＤ具有相似的相变特征,经冷冻处理也形成结晶,并在室温下保持这种状态,该结晶的冰刻结构也与胚肝ＬＣＬＤ类似     

冰冻断裂电子显微镜技术研究鸡败血支原体细胞膜

近年来冰冻断裂电子显微镜技术是研究生物膜的超微结构最有效的方法之一。有人采用此种技术对莱氏衣原体、丝状支原体山羊变种、鸡败血支原体A5969、以及螺旋支原体等进行研究中。发现有些为家畜、家禽病原体,其膜断裂面复型上存在直径约为50—100A的球形蛋白质颗粒。本文报道用鸡败血支原体S_6菌株为实验材料,用仿制的Bullivant-AmesⅡ型简易冰冻断裂装置,对完整的支原体细胞或分离的支原体膜进行的实验结果。     

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术,研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒,形态与披膜病毒相似,大小多在５５～６５ｎｍ,圆形,有包膜,边缘略有突起或比较平滑,有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外,ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋,尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部,表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。     

植物样品制备的两种定向包埋方法

用作电镜观察的植物样品的制备,一般只能将植物样品平放在胶囊底部包埋。如果需要观察植物组织一定部位的细微结构,例如观察叶片或根的横断面的组织超微结构等,则一般包埋方法就不适用,即或在粘稠的环氧树脂中植物样品也是不易直立的,这只有采用定向包埋方法。     

用冷冻复型法制备生物样品

冷冻复型法作为电镜的样品制备方法及研究膜结构的手段目前已经有许多单位在开展,但是,操作进程中许多小问题掌握不好都影响成功率。根据我们的经验,认为有如下几个问题:     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒囊膜内核衣壳排列图式的电镜观察

核型多角体病毒有单核衣壳包埋型和多核衣壳包埋型之分,单核衣壳包埋型是在一个病毒囊膜内只包含一个核衣壳,而多核衣壳包埋型的特点是在一个病毒囊膜内包含有２个以上的核衣壳,由于多个核衣壳成束地被包装在同一个病毒囊膜内,又称病毒束［１,２］。Ｈｕｎｔｅｒ等表明在干果斑螟核型多角体病毒中,病毒囊膜内包含２～２３个核衣壳［３］。Ｆｒａｓｅｒ将苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒接种于秋粘虫细胞系,超薄切片电镜观察,病毒囊膜内包含的核衣壳数变动于２～１７粒,但未研究其核衣壳在病毒囊膜内的排列结构［４］。本研究用苜蓿丫纹…     

慢性扁桃体炎与细菌L型感染

通常认为,慢性扁桃体炎主要致病菌是金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌。通过50例慢性扁桃体炎的病原微生物培养、组织切片细菌学及电镜等研究,发现慢性扁桃体炎组织中细菌L型也相当常见,L型培养阳性率是88.5％,且组织切片L型感染率与培养阳性率基本一致(P>0.05)。电镜在扁桃体组织间质及上皮细胞、淋巴细胞等多种细胞内均见到细菌L型。提示慢性扁桃体炎与细菌L型感染关系极为密切。并认为,L型侵入组织并在宿主细胞内生长的特性,可能是慢性扁桃体炎反复发作、迁延不愈的重要原因。