低叶绿素b水稻突变体类囊体膜的比较蛋白质组学

采用蓝绿温和胶凝胶电泳(blue-nativepolyacrylamidegel-electrophoresis,BN-PAGE),以及改进的第二向SDS-PAGE分离了水稻低叶绿素b突变体ZH249-Y和野生型ZH249-W类囊体膜蛋白复合物,系统比较了突变体和野生型各复合物亚基的表达差异.结果显示,第一向BN-PAGE分离了PSⅠ-LHCⅠ、LHCⅠ缺失的PSⅠ、ATP合成酶、细胞色素b6f、CP43缺失的PSⅡ及LHCⅡ六种复合物.上述各复合物经第二相SDS-Urea-PAGE分离后,利用胶内酶解,高效液相层析分离肽段,电喷雾串联质谱鉴定了复合物的亚基.结合免疫印迹研究,证明和野生型相比,突变体光系统Ⅱ捕光天线复合体的表达量适度下降,但光系统Ⅰ捕光天线破坏严重,同时光系统Ⅱ核心蛋白和ATP合成酶的表达量上升.研究结果对揭示低叶绿素b水稻突变体较高光化学效率和光稳定性的分子基础提供了线索,同时也表明,改进的BN/SDS-PAGE双向电泳不仅可以有效地分离膜蛋白复合物及亚基,也可以进行不同生理条件下,或野生型和突变体之间膜蛋白质组的比较研究.     

叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab基因转录研究

与野生型油菜相比．叶绿素缺乏油菜突变体Cr3529 LHC Ⅱ多肽组成并未发生改变,但其含量却都明显降低。RNA印迹及点杂交结果都显示出Cr3529cab基因的转录增加。这些结果表明：该叶绿素缺乏突变体仅影响LHCI多肽的蛋白含量;并未影响其组成;突变体LHC Ⅱ蛋白量的减少并非cab基因转录降低所致。可见转录水平的调节仅对LHC Ⅱ在类囊体膜上的积累起有限作用;cab核编码基因转录活性的维持和质体信号的产生并不要求有结构完整的叶绿体的存在。     

定位于类囊体膜的PPF1在转基因拟南芥中的表达影响叶绿体的发育

PPF1是一个与植物营养生长相关的基因.它编码的产物可能是一个膜蛋白并与拟南芥叶绿体中的类囊体蛋白ALB3有很高的同源性.免疫电镜分析表明PPF1蛋白同样主要定位于类囊体膜,而且在短日照G2豌豆开花两周后仍发育良好的叶绿体中有很高的表达,在长日照豌豆同时期非正常叶绿体中丰度非常低.对转基因拟南芥和野生型植株的叶片衰老进程比较发现, PPF1在拟南芥中的过量表达可以延缓叶片的衰老,而用PPF1反义mRNA抑制拟南芥中的同源基因ALB3则明显加快叶片衰老速度.对转基因拟南芥的超微结构分析显示,PPF1在拟南芥中过量表达时,转基因植株的叶绿体比野生型植株的叶绿体大并含有更多的基粒和基质类囊体膜;相反,反义PPF1表达抑制其在拟南芥中的同源物时,转基因植株的叶绿体比野生型植株的叶绿体小并含有较少的基粒和发育较差的类囊体膜系统.这些数据表明叶绿体的发育状况与PPF1或拟南芥同源物ALB3的表达水平呈正相关.我们的结果提示PPF1基因可能通过控制叶绿体的发育状况来调节植物的发育.     

拟南芥叶绿体中DEG蛋白酶功能的研究进展

DEGP家族蛋白酶广泛分布于原核生物和真核生物细胞中。在拟南芥中有16个DEGP类似的蛋白酶,根据蛋白质组学数据,其中有4个定位于叶绿体中,分别命名为DEG1、DEG2、DEG5和DEG8。结合生物化学和分子生物学等研究手段对拟南芥叶绿体中的DEGP蛋白酶进行了分析,现有的研究初步证明了这些蛋白酶参与光系统II（PSII）复合物反应中心D1蛋白的降解,从而在PSII复合物的修复循环和功能维护中起重要作用。该文概述了拟南芥叶绿体中DEG蛋白酶的结构和功能的最新研究进展。     

拟南芥Psrp-4基因参与光合作用机制的研究

叶绿体核糖体是植物特有的细胞器之一,其主要功能是合成质体基因编码的蛋白质。已有研究表明在叶绿体核糖体内含有6个质体特有蛋白PSRP(plastid-specific ribosomal protein),分别命名为PSRP1~PSRP6。然而,这些蛋白在叶绿体蛋白合成过程以及光合作用中的作用机制研究尚处初级阶段。在本研究中,为了阐明PSRP-4蛋白在叶绿体发育过程中的作用机制,我们利用Gateway系统构建了Psrp-4基因(At2g38140)的RNAi表达载体,转化野生型拟南芥后获得了Psrp-4基因表达量明显降低的psrp-4突变体。研究结果表明:psrp-4突变体比野生型生长略微缓慢,但叶片颜色与野生型差别不大,能够进行正常的光合作用。在高光胁迫条件下,测定psrp-4突变体光合化学效率,发现与野生型差异不明显;进一步的蛋白免疫印记实验证明Psrp-4基因表达量的降低对PSⅡ反应中心D1蛋白的周转也没有明显影响。因此,推测PSRP-4蛋白可能不是叶绿体蛋白合成以及光合作用的正常进行所必需的。     

菲白竹组培苗白化、绿化突变体的超微结构及15个叶绿体编码基因的表达

以菲白竹（Pleioblastus fortunei）组培苗绿化突变体及经60Coγ射线辐射获得的白化突变体为实验材料,从生长特性、超微结构及15个叶绿体编码基因的拷贝数及转录水平方面进行了研究。结果显示,白化突变体具有分化不定芽和不定根的能力,其叶肉细胞中叶绿体缺失或结构不完整,基因拷贝数与野生型无明显差异,部分基因转录水平低于野生型,psbA基因的转录水平高于野生型。绿化突变体叶色一致且能稳定遗传,与野生型绿色组织细胞的超微结构相比,其叶绿体基粒片层数量少,结构松散,基因拷贝数低或相当于野生型,多数叶绿体编码基因转录水平较野生型呈下调趋势,atpI基因转录水平高于野生型。psaA基因在两种突变体中均不表达,仅在野生型中有微弱表达。     

拟南芥叶绿体中DEG 蛋白酶功能的研究进展

DEGP家族蛋白酶广泛分布于原核生物和真核生物细胞中。在拟南芥中有16个DEGP类似的蛋白酶, 根据蛋白质组学数据, 其中有4个定位于叶绿体中, 分别命名为DEG1、DEG2、DEG5和DEG8。结合生物化学和分子生物学等研究手段对拟 南芥叶绿体中的DEGP蛋白酶进行了分析, 现有的研究初步证明了这些蛋白酶参与光系统II (PSII)复合物反应中心D1蛋白的降解, 从而在PSII复合物的修复循环和功能维护中起重要作用。该文概述了拟南芥叶绿体中DEG蛋白酶的结构和功能的最新研究进展。     

一种分析叶绿体类囊体膜色素蛋白复合物的蓝绿温和胶电泳系统

采用蓝绿温和胶电泳系统可以非常有效地分离叶绿体蛋白质复合物,包括PSⅠ, PSⅡ, ATP合酶,细胞色素b₆f复合物,捕光色素复合物和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶.还结合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳将叶绿体多亚基复合物的50多种蛋白质分开,利用免疫印迹对蛋白质复合物进行了初步鉴定,同时还应用蓝色温和胶电泳分析基质、基粒类囊体复合物的组成.     

定位于类囊体膜的PPF1在转基因拟南芥中的表达影响叶绿体的发育

PPF1是一个与植物营养生长相关的基因。它编码的产物可能是一个膜蛋白并与拟南芥叶绿体中的类囊体蛋白ALB3有很高的同源性。免疫电镜分析表明PPF1蛋白同样主要定位于类囊体膜 ,而且在短日照G2豌豆开花两周后仍发育良好的叶绿体中有很高的表达 ,在长日照豌豆同时期非正常叶绿体中丰度非常低。对转基因拟南芥和野生型植株的叶片衰老进程比较发现 ,PPF1在拟南芥中的过量表达可以延缓叶片的衰老 ,而用PPF1反义mRNA抑制拟南芥中的同源基因ALB3则明显加快叶片衰老速度。对转基因拟南芥的超微结构分析显示 ,PPF1在拟南芥中过量表达时 ,转基因植株的叶绿体比野生型植株的叶绿体大并含有更多的基粒和基质类囊体膜 ;相反 ,反义PPF1表达抑制其在拟南芥中的同源物时 ,转基因植株的叶绿体比野生型植株的叶绿体小并含有较少的基粒和发育较差的类囊体膜系统。这些数据表明叶绿体的发育状况与PPF1或拟南芥同源物ALB3的表达水平呈正相关。我们的结果提示PPF1基因可能通过控制叶绿体的发育状况来调节植物的发育。     

菲白竹组培苗白化、绿化突变体的超微结构及15个叶绿体编码基因的表达

以菲白竹(Pleioblastus fortunei)组培苗绿化突变体及经⁶⁰Co γ射线辐射获得的白化突变体为实验材料, 从生长特性、超微结构及15个叶绿体编码基因的拷贝数及转录水平方面进行了研究。结果显示, 白化突变体具有分化不定芽和不定根的能力, 其叶肉细胞中叶绿体缺失或结构不完整, 基因拷贝数与野生型无明显差异, 部分基因转录水平低于野生型, psbA基因的转录水平高于野生型。绿化突变体叶色一致且能稳定遗传, 与野生型绿色组织细胞的超微结构相比, 其叶绿体基粒片层数量少, 结构松散, 基因拷贝数低或相当于野生型, 多数叶绿体编码基因转录水平较野生型呈下调趋势, atpI基因转录水平高于野生型。psaA基因在两种突变体中均不表达, 仅在野生型中有微弱表达。     

糖基化、非糖基化、重组PAI－1功能和性质的比较

对从ＨｅｐＧ２细胞培养液中分离得到植基化和非糖基化ＰＡＩ－１（１型纤溶酶原激活物抑制剂）,以及从ｐＹＺＨＢＩ－６６表达菌中纯化的非糖基化重组ＰＡＩ－１的某些性质和功能进行比较,结果显示,糖基化ＰＡＩ－１对ｔＰＡ（组织型纤溶酶原激活物）有较强的抑制,能较显著地被蛋白质变性剂所激活,对热有较强的稳定性,糖基化与非糖基化ＰＡＩ－１在ｐＨ２．５－９．０的范围内都相当稳定。纤维蛋白原和肝素能明显提高两者对ｔＰＡ的抑制作用。     

Occurrence of two different endorphins in the salmon pituitary

Two endorphins have been identified in the teleost pituitary, $\text{Oncorhynchus}\text{keta}$ (chum salmon). Endorphin I is a nonacosa peptide and the primary structure was reported previously. Endorphin II has been elucidated to be a triaconta peptide with the following primary structure: Ac-Tyr-Gly-Gly- Phe-Met-Lys-Ser-Trp-Asn-Glu-Arg-Ser-Gln-Lys-Pro-Leu-Leu-Thr- Leu-Phe-Lys-Asn-Val-Ile-Ile-Lys-Asp-Gly-Gln-Gln-OH. It is evident that these endorphins are highly homologous to each other, but are different molecules, and that endorphin II is much more similar to the mammalian endorphins than endorphin I.     

当归对大鼠缺血性脑损伤后Flt-1、Flk-1 mRNA表达的影响

目的：研究大鼠缺血性脑损伤后不同时间点Flt-1、Flk-1 mRNA的表达及当归对其表达的影响。方法：雄性Wistax大鼠,随机分为缺血损伤组和当归治疗组。采用线栓法制作大鼠短暂性大脑中动脉阻断（MCAO）与再灌模型。治疗组腹腔注射当归注射液（剂量5g／kg）。36只大鼠（每组各18只）在脑缺血／再灌后1d、3d、7d神经行为学评分完成后被处死,取大脑行氯化三苯四唑（TTC）染色以测脑梗死比;另取72只大鼠（每组各36只）在脑缺血／再灌后3h、6h、12h、1d、3d、7d分别被处死,应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测缺血侧Flt-1、Flk-1 mRNA的表达。结果：在同时间点神经功能缺损评分比较,缺血损伤组明显高于当归治疗组（P〈0．05）;在同时间点当归治疗组梗塞比明显小于缺血损伤组（P〈0．01）。RT-PCR检测表明,缺血损伤组Flt-1、Flk-1 mRNA在缺血／再灌后3h即开始表达增强,于3d达高峰,后逐渐降低;当归治疗组Flt-1、Flk-1 mRNA表达比缺血损伤组明显增加,于3d达到高峰后缓慢降低至第7d仍保持较高水平。缺血损伤组和当归治疗组中Flt-1 mRNA与Flk-1 mRNA的表达呈正相关性,相关系数为r=0．957（P〈0．01）。结论：当归可增强缺血性脑损伤后Flt-1、Flk-1 mRNA表达。Flt-1、Flk-1 mRNA的表达紧密相关。     

Identification of the alternative splice products encoded by the human protein phosphatase inhibitor-1 gene

We have isolated three major cDNA fragments of protein phosphatase inhibitor-1 from human brain and liver by RT-PCR. The 536 bp fragment encoded the wild-type of inhibitor-1 while two other fragments were alternative splice products of the inhibitor-1 gene, which was confirmed by partial genomic DNA sequencing. The 380 bp fragment encoded an in-frame 51-residue-deleted inhibitor-1, named inhibitor-1alpha, and the deletion occurred from residue 84 to 134 of inhibitor-1. The 316 bp fragment termed inhibitor-1beta was derived from an internal deletion of 536 bp fragment. This deletion resulted in an out of frame shift, allowing the 316 bp fragment that encoded the partial sequence of inhibitor-1. Based on the reported mRNA sequence of inhibitor-1 and evidence from our RT-PCR, we suggested that inhibitor-1beta consisted of 132 amino acids of which the N-terminal 61 amino acid sequences were identical to inhibitor-1 while the sequence after residue-61 was markedly different.     

Determinants of the nucleolar targeting of protein phosphatase-1

The ubiquitously expressed protein Ser/Thr phosphatase-1 isoforms PP1alpha, PP1beta and PP1gamma1 are dynamically targeted to distinct, but overlapping cellular compartments by associated proteins. Within the nucleus of HeLa cells, EGFP-tagged PP1gamma1 and PP1beta were predominantly targeted to the nucleoli, while PP1alpha showed a more diffuse distribution. Using PP1 chimaeras and point mutants we show here that a single N-terminal residue, i.e., Gln20 for PP1alpha, Arg19 for PP1beta and Arg20 for PP1gamma1 accounts for their distinct subnuclear distribution. Our data also suggest that the N-terminus of PP1beta and PP1gamma1 harbours an interaction site for one or more nucleolar interactors.     

Exploring the limits of sequence and structure in a variant betagamma-crystallin domain of the protein absent in melanoma-1 (AIM1)

βγ-Crystallins belong to a superfamily of proteins in prokaryotes and eukaryotes that are based on duplications of a characteristic, highly conserved Greek key motif. Most members of the superfamily in vertebrates are structural proteins of the eye lens that contain four motifs arranged as two structural domains. Absent in melanoma 1 (AIM1), an unusual member of the superfamily whose expression is associated with suppression of malignancy in melanoma, contains 12 βγ-crystallin motifs in six domains. Some of these motifs diverge considerably from the canonical motif sequence. AIM1g1, the first βγ-crystallin domain of AIM1, is the most variant of βγ-crystallin domains currently known. In order to understand the limits of sequence variation on the structure, we report the crystal structure of AIM1g1 at 1.9 Å resolution. Despite having changes in key residues, the domain retains the overall βγ-crystallin fold. The domain also contains an unusual extended surface loop that significantly alters the shape of the domain and its charge profile. This structure illustrates the resilience of the βγ fold to considerable sequence changes and its remarkable ability to adapt for novel functions.     

人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化过程中Notch通路信号分子表达的变化

本研究探讨Noah信号通路在人骨髓间充质干细胞（human mesenchymal stem cells,hMSCs）体外增殖及向神经细胞分化过程中的作用。采集健康自愿者骨髓,体外培养获得hMSCs,取第3代hMSCs,在诱导剂（β-ME,DMSO,BHA）作用下向神经细胞分化。诱导后用免疫细胞化学鉴定神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）和尼氏体的表达以确定诱导效果：用流式细胞术检测细胞生长周期时相的变化。在诱导前后,用免疫荧光和RT-PCR方法检测Notch通路中Notch1受体蛋白、配体Jagged1（JAG1）、调节蛋白活化相关物早老素1（presenilin 1,PS1）、靶基因hairy and enhancer of split1（HES1）信号分子表达的变化。结果显示：诱导前,处于G0/G1期的hMSCs占58．5％,S＋G2/M期的细胞占41．5％;诱导后,G0/G1期细胞比例升高,而S＋G2/M期细胞比例下降,NSE阳性细胞率达（77±0．35）％,细胞质中可见深蓝色的块状或颗粒状尼氏体。免疫荧光显示,诱导前后hMSCs内Notch1和JAG1均呈阳性表达,但RT-PCR检测发现诱导后Notch1、JAG1、PSl和HES1 mRNA表达量较诱导前明显降低（均P〈0．05）。结果表明,诱导hMSCs向神经细胞分化能抑制Notch信号分子表达,低水平的Notch信号激活可能有利于神经细胞的分化。     

Growth reference charts and the nutritional status of Indian children

We evaluate the growth performance of Indian children of age 0-3 using data from the 1998-1999 National Family and Health Survey, making use of the new child growth standards developed by the World Health Organization’ Multicentre Growth Reference Study. We find that the new charts lead to an increase of 4.2 million in the estimated number of stunted children, and an increase of 2.3 million in the estimated number of wasted children. The estimated number of underweight children decreases instead by 2.1 million. We also use data on ethnic Indians living in the United Kingdom to provide evidence on the height genetic potential of Indians. We find that children of Indian ethnicity who live in the UK have anthropometric outcomes comparable to those in commonly used growth standards and that the height of ethnic South Asian in the sample is negatively related with the amount of time spent outside the United Kingdom.