成人急性髓性白血病SOCS-1 基因及其甲基化的研究

目的:通过检测成人急性髓性白血病中SOCS-1基因表达水平及其甲基化水平,研究其在白血病发病中的作用。方法:运用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)方法,对24例急性髓性白血病患者和4株白血病细胞株(Jurkat、Raji、U 937、NALM 17),进行SOCS-1基因甲基化水平的研究;同时运用Real-time PCR法定量分析SOCS-1基因表达水平。以10例健康人为正常对照组。结果:24例成人急性髓性白血病患者中,15例有SOCS-1基因甲基化(62.5%),而正常对照组无SOCS-1基因甲基化(0%),二者有显著差异(P<0.05);SOCS-1基因甲基化组与无SOCS-1基因甲基化组相比较,其SOCS-1基因相对表达量明显减少(P﹤0.05);与患者临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因的甲基化与患者年龄、性别和病程阶段无相关。4株白血病细胞株中,Jurkat和U 937表现有SOCS-1甲基化(50%),Raji和NALM 17无SOCS-1甲基化,前者SOCS-1基因表达量较后者也明显降低(P<0.05)。结论:SOCS-1基因在成人急性髓性白血病中甲基化水平明显增高,且SOCS-1基因甲基化后表达水平受到抑制,提示SOCS-1基因及其甲基化在急性髓性白血病的发生发展中可能具有一定作用。     

白血病患者骨髓中RASSFlA基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的：通过检测各类型白血病骨髓中RASSFlA基因启动子区甲基化水平,探讨其对白血病分型的临床检测意义。方法：抽选93例不同类型白血病患者（观察组）予以甲基化特异性PCP（MSP）方法进行骨髓RASSFlA基因甲基化状态检测,研究不同类型白血病甲基化状态差异,同期抽选93例非白血病者为对照研究（对照组）。结果：观察组中有13例（13．98％）检测到RASSFlA基因甲基化,而对照组中RASSFlA基因甲基化率为0％,比较差异显著（P〈0．05）。不同类型白血病RASSFlA甲基化率比较：淋巴系显著高于髓系（P〈O．05）,急性与慢性白血病比较差异无显著性（P〉0．05）。结论：白血病骨髓中MSP法检测存在RASSFlA甲基化;而RASSFlA基因在淋巴系白血病中的甲基化概率明显增高,因此,对RASSFlA进行甲基化检测有可能作为白血病临床诊断分型的生物学指标之一。     

CHFR基因在B细胞淋巴瘤细胞中的表达及意义(英文)

目的:探讨CHFR基因在B细胞淋巴瘤Raji细胞中的表达,以及CHFR基因甲基化对Raji细胞增殖和凋亡中所产生的影响。方法:体外培养人B细胞淋巴瘤细胞株Raji细胞,用不同浓度的去甲基化试剂5-氮杂-2脱氧胞苷处理Raji细胞株,通过RT-PCR检测CHFR基因表达水平的变化,通过MS-PCR检测CHFR基因甲基化变化,CCK法及流式细胞术检测Raji细胞增殖及凋亡变化。结果:CHFR基因在Raji细胞中出现弱表达,经去甲基化试剂处理后CHFR基因表达水平增高,随药物浓度增加Raji细胞的抑制率及凋亡率增高。结论:5-氮杂-2脱氧胞苷可以恢复CHFR基因表达水平,抑制Raji细胞的增殖,促进凋亡。CHFR基因在细胞增殖起负向调控的作用。     

基因在B 细胞淋巴瘤细胞中的表达及意义

目的：探讨基因CHFR在B细胞淋巴瘤Raji 细胞中的表达,以及基因甲基化对Raji 细胞增殖和凋亡中所产生的影 响。方法：体外培养人B细胞淋巴瘤细胞株Raji 细胞,用不同浓度的去甲基化试剂5- 氮杂-2 脱氧胞苷处理Raji 细胞株,通过 RT-PCR 检测CHFR 基因表达水平的变化,通过MS-PCR 检测基因甲基化变化,CCK 法及流式细胞术检测Raji 细胞增殖 及凋亡变化。结果： 基因在Raji 细胞中出现弱表达,经去甲基化试剂处理后基因表达水平增高,随药物浓度增加Raji 细胞的抑制率及凋亡率增高。结论：5-氮杂-2 脱氧胞苷可以恢复基因表达水平,抑制Raji 细胞的增殖,促进凋亡。基 因在细胞增殖起负向调控的作用。     

N-糖基化修饰在髓性白血病耐药中的作用

目的研究N-糖基化修饰、糖基因表达调控在髓性白血病耐药中的作用,明确N-糖基化修饰、糖基因与白血病耐药的相关性,从而为预测和诊断髓性白血病耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。方法通过修饰白血病耐药细胞株的N-糖基化（衣霉素Tunicamycin和PNGase F处理）,Western Blot检测Pgp、CD147糖蛋白的表达水平;MTT法检测N-糖基化修饰前后髓性白血病耐药细胞株的生长情况及对化疗药物的敏感性,观察上述细胞膜型N-糖基化修饰后对化疗药物耐药性的影响;进一步通过RNA干扰技术干预差异表达的糖基因,MTT法检测干扰前后白血病耐药细胞株的生长情况及对化疗药物的敏感性,观测糖基因的表达调控对髓性白血病耐药的影响。结果 NB4/ADR细胞经N-糖基化修饰后,P-gp、CD147糖蛋白的表达水平发生改变,同时该细胞的药物敏感性也增强（P〈0.05）;当通过RNA干扰技术特异性使NB4/ADR细胞中B3GNT8和ST8SIA4表达下调时,该细胞的药物敏感性增强（P〈0.05）。结论髓性白血病细胞株中N-糖基化修饰、糖基因的改变均与白血病多药耐药具有相关性,为预测和诊断髓性白血病耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。     

探讨髓系白血病细胞株糖酵解表型特征

探讨髓系白血病细胞株的糖酵解表型特征及其潜在的调控机制。葡萄糖试剂盒和乳酸试剂盒分别检测5株白血病细胞培养上清液中的葡萄糖消耗（G）和乳酸生成含量（L）,计算L／G比值来评估糖酵解水平：定量PCR检测糖酵解相关基因GLUT、MCTlmRNA表达;CCK8法检测细胞体外增殖能力;Western blot检测NAKT蛋白磷酸化水平。结果显示,KG1和K562细胞体外培养24h后的L／G比值分别为1．78和1．71,接近糖酵解表型时L／G为2的比值,同时这两株细胞高表达糖酵解相关基因GLUTl和MCT1mRNA。低糖（0．5mmol／L）、中糖（5mmol／L）、高糖（10mmol／L）处理KGla和K562细胞40h后,两株细胞的增殖能力、葡萄糖消耗和乳酸生成随葡萄糖浓度增加而增强,高糖组增加更为显著（P〈0．05）。相反,若糖酵解抑制剂2-DG（0,5,10mmol／L）处理白血病细胞40h后,两株细胞的增殖能力及糖酵解代谢水平随2．DG浓度增加而降低,高浓度2．DG组（10mmol／L）降低更为显著（P〈0．05）。此外,AKT抑制剂低浓度（5gmol／L）短时间（12h）处理后能抑制白血病细胞AKT蛋白磷酸化水平,同时降低细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成（P〈0．05）。该研究提示髓系白血病细胞具有高糖酵解表型,AKT可能参与调控白血病的糖代谢过程,这有助于阐明白血病的能量代谢特征以及为白血病的靶向抗代谢治疗奠定基础。     

卵巢上皮癌中ING4基因启动子的甲基化状态及其临床意义

目的：探讨卵巢上皮癌中ING4基因启动子的甲基化状态及其临床意义。方法：收集2005年7月至2012年6月哈尔滨医科大学附属第一医院行全面分期手术并经病理检查确诊的150例卵巢上皮癌组织标本,并以同期因子宫肌瘤或子宫腺肌症行子宫全切除术或次全切除术并经病理检查确诊为正常卵巢组织的150例标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测卵巢上皮癌组织与正常卵巢组织中ING4基因启动子的甲基化状态,蛋白印迹法检测1NG4蛋白的表达,并分析ING4基因启动子的甲基化状态与卵巢上皮癌临床病例特征的关系。结果：卵巢上皮癌组织中ING4基因启动子的甲基化阳性率为42．7％（64／150）,明显高于正常卵巢组织（4％,6／150）,差异有统计学意义（P〈0．05）。ING4基因启动子甲基化阳性的卵巢上皮癌组织中ING4蛋白表达阴性或弱阳性;1NG4基因启动子甲基化阴性的卵巢上皮癌和正常卵巢组织中ING4蛋白表达阳性;在64例1NG4基因启动子甲基化的卵巢上皮癌组织中,ING4蛋白表达强度与ING4基因启动子的甲基化程度呈负相关（r=-0．435,P〈0．05）。卵巢上皮癌组织中,1NG4基因甲基化的阳性率随着手术病理分期和组织学分级的增加而增加（P〈0．05）;卵巢透明细胞癌（55．6％,10／18）和卵巢子宫内膜样癌（59-3％,16／27）中ING4基因甲基化的阳性率显著高于浆液性囊腺癌（33．9％,20／59）和粘液性囊腺癌（39．1％,18／46）（P〈0．05）;ING4基因启动子的甲基化状态与患者的年龄、有无腹水及淋巴结转移均无显著相关性（P〉0．05）。结论：ING4基因启动子的甲基化可能促进了其在卵巢上皮癌组织中的表达失活,进而促进了卵巢上皮癌的生长和分化。     

急性白血病的P16基因表达分析

应用免疫组织化学方法．对61例急性白血病患者P16基因表达进行检测和分析。结果表明：AML和ALL患者的P16表达均显著低于对照组（P＜0.001）,ALLP16表达又显著低于AML（P＜0．05）。AL亚型中P16表达率以M2最高,L3最低。比较耐药组和药敏组,P16表达两组间有显著差异（P＜0．05）,但初诊组与复发组、缓解组与未缓解组比较未见统计学差异（P＞0．05）。上述结果提示：P16基因表达异常在急性白血病的发生、发展中起重要作用,但与白血病患者的治疗和预后无明显关系。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导鼻咽癌细胞株Syk基因启动子去甲基化的研究

利用5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR）处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用BS-PCR、Q-RT-PCR及Westernblot方法分别检测经5μmol/L的5-aza-CdR处理前后,各细胞株中Syk基因启动子甲基化状况及SykmRNA和蛋白质表达情况。探讨去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对鼻咽癌细胞株中脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）启动子甲基化水平及其表达的影响。结果显示,Syk基因启动子甲基化水平与鼻咽癌细胞分化程度呈负相关,两种鼻咽癌细胞株的Syk mRNA和蛋白质表达水平显著低于NP-69细胞（P〈0.01）;经5-aza-CdR处理后两种鼻咽癌细胞株的Syk基因启动子甲基化水平降低,Syk mRNA及蛋白质表达升高（P〈0.05）;高分化鼻咽癌细胞株对药物敏感性高于低分化鼻咽癌细胞株（P〈0.01）。由此可见,两种鼻咽癌细胞株中存在不同程度的Syk基因启动子甲基化状态,5-aza-CdR能有效逆转鼻咽癌细胞株Syk基因启动子的甲基化状态,升高Syk mRNA及蛋白质表达,同时鼻咽癌细胞分化程度越高恢复Syk基因表达的比率越高。     

糖基因在髓性白血病耐药性中特征性改变

目的通过研究糖基因在髓性白血病中的差异表达,明确这些糖基因与白血病耐药的相关性,从而为预测和诊断髓性白血病耐药性,寻求逆转药物提供新策略和靶点。方法采用real-time PCR技术筛选髓性白血病细胞及其耐药细胞株中差异表达的糖基因,筛选出两组细胞差异表达3倍以上的糖基因,初步探索糖基因在髓性白血病耐药性中的特征性改变;采用流式细胞仪分析髓性白血病耐药细胞株与多种FITC标记植物凝集素的结合能力,表征比较细胞膜表面糖链的特征。结果 12个糖基因在NB4和NB4/ADR细胞株中表达具有显著的差异;高表达的糖基因与FITC标记植物凝集素的结合能力增强。结论髓性白血病细胞及其耐药细胞株中糖基因、细胞膜表面糖链特征均有显著差异,这些特征性改变与白血病多药耐药具有相关性。     

RASSF1A和Runx3基因启动子区甲基化在胃癌组织中的表达及意义

目的：检测胃癌组织中RASSFlA和Runx3基因启动子区甲基化状态,探讨二者与胃癌发生发展的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测57例胃癌组织和相应癌旁组织及30例正常胃黏膜组织中RASSFlA和Runx3基因启动子区甲基化状态。结果：RASSFlA和Runx3甲基化在正常组未见表达。胃癌组RASSFlA基因甲基化率为64．9％（37／57）,明显高于癌旁组的7．0％（4／57）,差异有统计学意义（P〈0．05）,胃癌组Runx3基因甲基化率为49．1％（28／57）,明显高于癌旁组5．3％（3／57）,差异有统计学意义（P〈O．05）。胃癌组RASSFlA和Runx3基因甲基化率为68．4％（39／57）,明显高于癌旁组的8．8％（5／57）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：RASSFlA和Runx3基因启动子区高甲基化与胃癌的发生密切相关,有望为胃癌的早期诊治提供理论依据。     

mdr1甲基化与宫颈癌新辅助化疗疗效相关性研究

目的：研究宫颈癌肿瘤细胞多药耐药基因1（mdr1）甲基化与宫颈癌新辅助化疗疗效相关性,探索适用于预测临床化疗多药耐药性的敏感指标。方法：采用MassARRYEpiTYPERDNA甲基化分析技术定量分析宫颈鳞癌（n=40）新辅助化疗前后、正常对照组（n=30）中的mdr1基因启动子区15个CpG位点的甲基化状态。结果：新辅助化疗敏感组（n=31）CpG2、3、4位点甲基化率高于行新辅助化疗耐药组（n=9）,差异有统计学意义（P〈0．05）;与新辅助化疗前组相比,化疗后组CpG_7、CpG_8、CpG_12、13、CpG_18、CpG_19、20、CpG_23、CpG_24位点甲基化率减低,差异有统计学意义（p〈0．05）;与正常组织（n=30）相比,宫颈癌（n=80）CpG_2、3、4、CpG_5、CpG6、CpG_7、CpG_8、CpG_9、10、CpG-12、13、CpG_18、CpQ_19、20、CpG_22、CpG_23、CpG_24位点甲基化率较低,差异有统计学意义（p〈0．05）。结论：宫颈癌mdr1基因甲基化水平高低与宫颈癌NACT疗效有一定相关性。     

利用RNAi抑制PARs防治脑缺血性损伤的实验研究

目的：利用RNA干扰技术,通过重组腺病毒导入,抑制脑组织中PARs基因的表达,观察神经功能缺陷评分、缺血脑组织梗死体积的变化,为缺血性脑血管疾病的基因治疗提供实验依据。方法：雄性Wistar大鼠随机分组。以重组腺病毒介导的无序PARs基因shRNA片段、生理盐水进行干预,干预3天后以线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉永久闭塞模型,各组分别于线栓后24h、72h进行神经功能缺陷评分并断头取脑,应用4％TTC染色测脑梗死体积。结果：1．缺血后24h、72h同一时间点：①实验组分别与对照组、生理盐水组对比,神经功能缺陷评分明显降低（P〈0．05）,脑梗死体积明显减小（P〈0．05）;②对照组与生理盐水组对比,神经功能缺陷评分、脑梗死体积无明显差异（P〉0．05）。2．各组组内缺血后24h、72h对比,神经功能缺陷评分、脑梗死体积各组均有明显差异（P〈0．05）。结论：重组腺病毒介导的RNAi能有效抑制脑组织中PARs基因的表达,缩小脑梗死体积,改善神经功能缺陷评分。     

EGFR、HER2、CXCR4在tied,细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：研究EGFR（epidermal growth factor receptor）、HER2（ human epidermalgrowth factor receptor-2）及CXCR4（chemokine（C-X-C motif） receptor 4）在NSCLC 中的表达,分析它们与NSCLC 临床病理特征的的关系。方法：选择我科2009 年7 月-2012年12 月收治的75 例非小细胞肺癌（NSCLC）患者为研究对象,支气管镜活检得到NSCLC肿瘤组织标本,免疫组织化学技术分别检测EGFR、HER2、CXCR4在NSCLC 组织中的表达,并分析EGFR、HER2、CXCR4 的表达与NSCLC 患者临床病理指标和生存期的相关性。结果：EGFR、HER2 及CXCR4在NSCLC中的表达与患者淋巴转移及远处转移有关（P〈0.05）。EGFR、HER2 及CXCR4在NSCLC 中的表达均呈正相关,EGFR 与HER2,EGFR 与CXCR4,HER2 与CXCR4 的相关系数分别为r=0.296（P〈0.01）,r=0.578（P〈0.01）,r=0.426（P〈0.01）。3 种基因表达越多,患者中位生存时间越短（P〈0.05）。结论：EGFR、HER2 及CXCR4 与NSCLC的发生发展关系密切,针对性的多个靶向抑制,可更好发挥抑癌作用。根据三者不同的表达情况初步筛选出针对靶向治疗的单一或联合靶点,有助于为NSCLC 患者提供个体化的治疗方案。为进一步治疗提供依据。     

麦冬不同提取物对过氧化氢损伤人血管内皮细胞ICAM-1、VEGF、Bcl-2表达的影响

目的：观察麦冬不同提取物对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）间黏附分子-1（ICAM-1）和VEGF、Bcl-2表达的影响。方法：体外培养HUVEC,用过氧化氢（H2O2）制造HUVEC损伤模型。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活数量,用流式细胞仪检测HUVEC表面ICAM-1的表达量;免疫细胞化学方法检测HUVEC的VEGF、Bcl-2的分布情况。结果：模型组较正常对照组细胞增殖活性明显降低（P〈0．01）。与模型组相比,经麦冬水提物、正丁醇提取物处理组细胞增殖活性明显增加（P〈0．05,P〈0．01）。流式细胞仪检测显示正丁醇提取物可降低过氧化氢增加的ICAM-1基因的表达。Bcl-2的表达,模型组明显低于正常对照组,而正丁醇组表达明显高于模型组（P〈0．01）。VEGF的表达,模型组明显高于正常对照组,麦冬水提物、正丁醇提取物处理组高于模型纽（P〈0．05,P〈0．01）。结论：麦冬提取物具有抗凋亡、促增殖、降低细胞间黏附分子-1表达的作用,尤以正丁醇提取物效果更为显著。     

非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏SOCS-3的表达与吡格列酮干预研究

目的：探讨SOCS-3在非酒精性脂肪肝病（NAFLD）发病中的作用以及吡格列酮的干预作用。方法：29只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（8只）,高脂饮食组（21只）。饲养8周后,从高质饮食组随机抽取5只大鼠证实造模成功后,将该组余下的16只大鼠继续以高脂饲料喂养,并随机分为NAFLD对照组（8只）;吡格酮干预组（8只）,予以吡格列酮3mg·kg^-1·d^-1灌胃。16周末,处死所有大鼠,检测血糖、血胰岛素、血脂、肝脏SOCS-3mRNA和SREBP-lcmRNA表达及肝脏病理学。结果：与正常对照组相比,NAFLD组血糖、血胰岛素、血脂、肝脏脂肪变水平及肝组织SOCS-3mRNA、SREBPlCmRNA表达显著上调。吡格列酮干预组sOCS．3mRNA、SREBP-1cmRNA表达较NAFLD组下调,且血糖、血胰岛素、血脂、肝脏脂肪变水平下降。SOCS-3mRNA表达水平与胰岛素抵抗指数、SREBP．1cmRNA表达水平、肝脂肪变成显著正相关。结论：SOCS-3可能通过胰岛素抵抗及上调肝组织SREBP-lcmRNA表达参与NAFLD发病,吡格列酮能抑制肝脏SOCS-3的表达,对NAFLD有一定治疗作用。     

腰硬联合麻醉下术中静脉右美托咪啶对术后硬膜外镇痛的影响

目的：观察腰硬联合麻醉下术中静脉持续输注0．5μg·kg-1．h-1的右关托咪啶对腹式全子宫切除术病人术后吗啡硬膜外自控镇痛（PCEA）的影响及相关不良反应发生的情况。方法：选择ASAI或II级、择期行腹式全子宫切除术病人50例,腰硬联合麻醉成功后,随机分为Ⅰ组（右关托咪啶组）和Ⅱ组（盐水对照组）,每组25例,术后镇痛采用硬膜外镇痛。观察患者术后第一疼痛出现时间,术后24h和术后24--48h吗啡用量、PCEA泵按压次数和有效次数,VAS评分法评估患者术后不同时点的疼痛程度;记录围术期血流动力学的变化和血管活性药物的使用情况;记录镇痛期间恶心呕吐及皮肤瘙痒等不良反应的发生情况。结果：患者术后第一疼痛时间Ⅰ组较Ⅱ组延长（P〈0．05）;术后24小时吗啡用量、PCEA泵按压次数及有效按压次数Ⅰ组较Ⅱ组显著减少（P〈0．05）,24---48小时两组病人无差异（P〉0．05）;病人术后0．5小时、6小时静息和运动VAS评分Ⅰ组较Ⅱ组显著减低（P〈0．05）,其余时点无差异（P〉0．05）;麻醉后15min时Ⅰ组较Ⅱ组心率下降（P〈0．05）,其余各时点比较无差异（P〉0．05）,各时点平均动脉压两组无差异（P〉0．05）;阿托品和麻黄碱Ⅰ组使用量较Ⅱ组增多（P〈0．05）;恶心的发生率Ⅰ组较Ⅱ组降低（P〈0．05）。结论：腰硬联合麻醉下行腹式全子宫切除术,术中静脉持续输注0．5μg·kg-1．h-1的右美托咪啶可在术后24小时内减轻患者的疼痛反应,减少硬膜外镇痛吗啡的用量,且无明显不良反应。     

胃癌组织中MEG3基因甲基化状态及其临床意义

目的：探讨胃癌中MEG3基因差异性甲基化区域甲基化水平及其与MEG3表达之间的关系,并分析其临床病理意义。方法：利用荧光定量PCR检测38例胃癌组织及其对应癌旁正常组织中MEG3的表达水平,并利用甲基化特异性PCR检测MEG3基因差异性甲基化区域的甲基化水平。结果：①胃癌组织中MEG3表达水平明显低于正常癌旁对照组织（P〈0.05）;②胃癌组织MEG3差异性甲基化区域的甲基化率（21/38,55.3%）显著高于正常对照组织（10/38,26.3%,P〈0.05）③胃癌组织MEG3差异性甲基化区域的甲基化率在性别、年龄、发病部位的差异无统计学意义（P〉0.05）;在肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度上差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：胃癌组织中MEG3呈低表达水平,其差异性甲基化区域的甲基化与肿瘤的大小,淋巴结转移,浸润深度有关。