胡杨质膜的纯化及其H~ -ATPase活性的研究

用DextranT 5 0 0 ,PEG 335 0两相分配法分离并纯化了悬浮培养的胡杨细胞质膜 .不同聚合物浓度(5 5 %、 5 7%、 5 9%、 6 1%、 6 3%、 6 5 % )和KCl浓度 (0、 5、 10、 15mmol/L)对分离效果影响的研究结果表明 ,采用聚合物浓度为 5 9%和无盐存在的两相分配体系可获得纯度较高的胡杨细胞质膜 .纯化的质膜H ATPase的活力提高 8倍 ,且酶定向程度较高 ,这为进一步研究胡杨细胞质膜特性及获得高纯度H ATPase提供了良好基础     

胡杨质膜的纯化及其H＋-ATPase活性的研究

用Dextran T-500, PEG 3350两相分配法分离并纯化了悬浮培养的胡杨细胞质膜.不同聚合物浓度(5.5%、5.7%、5.9%、6.1%、6.3%、6.5%)和KCl浓度(0、5、10、15 mmol/L)对分离效果影响的研究结果表明, 采用聚合物浓度为5.9%和无盐存在的两相分配体系可获得纯度较高的胡杨细胞质膜.纯化的质膜H^＋-ATPase的活力提高8倍,且酶定向程度较高,这为进一步研究胡杨细胞质膜特性及获得高纯度H^＋-ATPase提供了良好基础.     

大麦根质膜微囊的制备及其H~ ,Ca~(2 )转运活性

用蔗糖密度梯度离心法制备出密闭程度较高的大麦根细胞质膜微囊。喹吖咽荧光猝灭和~(45)Ca~(2 )同位素示踪测定表明所制备的微囊具H~ ,Ca~(2 )转运活性。对制备出的质膜制剂纯度和膜朝向进行了分析,并探讨了质膜纯化中影响膜微囊密闭性的因素。匀浆液和悬浮液巾的单价离子盐有利于密闭膜微囊的形成。蔗糖密度梯度和葡聚糖密度睇度离心法均可得到密闭性较高的膜微囊,但后者的纯化效果较差。     

两相法分离纯化橡胶树树皮质膜

橡胶树树皮质膜H~+-ATPase在橡胶树产排胶过程中扮演着重要角色,制备高纯度及高活性的质膜是研究质膜H~+-ATPase特性和功能的必要条件。该研究以一年生巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)树皮为材料,利用差速离心法获得粗膜微粒体,通过两相分配法分离纯化质膜,并研究两相体系中不同浓度聚合物(5.9%、6.1%、6.3%、6.5%、6.7%,W/W)和KCl(2、5、8、11、14 mmol·L~(-1))对质膜蛋白得率和纯化效率的影响。通过Bradford法对质膜蛋白得率进行检测,同时采用酶活性检测法对质膜纯度进行检测,分析结果表明选用6.4%(W/W)聚合物浓度和5mmol·L~(-1)KCl组成的两相体系可获得较高纯度和得率的橡胶树树皮质膜。通过电镜观察法在形态学上对质膜纯度进一步评价,利用铅铀能侵染全部膜组分使其染色,而磷钨酸只能专一性地侵染质膜并使其染色这一特性,分别使用铅铀和磷钨酸对切片进行染色,并通过透射电镜对切片染色程度进行直接观察,结果表明提取的粗膜微粒体中质膜组分较少,存在大量的细胞器膜污染,而纯化后的质膜膜组分较单一,其他膜组分污染较少,而且质膜大小较均一,可以用于进行后续橡胶树树皮质膜H~+-ATPase特性和功能的研究。     

茶树叶绿体及其蛋白的分离研究

茶树叶片叶绿体的有效分离纯化是进行茶树叶绿体代谢组学和蛋白质组学研究的基础.本文以茶树鲜叶为材料,通过叶绿体得率、希尔反应等纯度和完整度指标,比较了Percoll密度梯度离心法和蔗糖密度梯度离心法对叶绿体分离纯化的效果;通过蛋白质含量和SDS-PAGE电泳图谱,比较了涨破法和冻融法对叶绿体蛋白的提取效果.结果发现Per...     

一种高效、快捷、经济的小鼠胰岛细胞分离纯化方法

采用改良的胶原酶P胆总管内逆行灌注膨胀胰腺的分离方法,比较Ficoll-400不连续密度梯度离心法和人工挑取法两种纯化胰岛的方法,用双硫腙(DTZ)对胰岛细胞团进行特异性染色计算胰岛产量及纯度,用台盼蓝染色判定胰岛细胞活性,使用间接免疫荧光法检测体外培养7 d后胰岛的功能.采用人工挑取法平均每只小鼠可获取的胰岛细胞团(245±35.6个)明显高于密度梯度离心法(120±26.3个)(n=5,P<0.05),两种方法分离纯化的胰岛活力均大于98%;但人工挑取法获得胰岛细胞团的纯度(100%)要高于密度梯度离心法(90%);纯化胰岛所用时间,采用人工挑取法(22±4 min)也少于密度梯度离心法(31±3 min).间接免疫荧光染色检测体外培养7 d后的胰岛细胞团,两种方法分离纯化的胰岛细胞团均具有良好的功能.胶原酶P胆总管内灌注消化分离法联合人工挑取纯化胰岛细胞团的方法,是一种高效、快捷、经济的小鼠胰岛细胞团分离纯化方法.     

一种新的免疫吸附亲和层析柱的制备及其应用

本文介绍用加工成颗粒性的硝酸纤维素作为固相配体支持物,制备一种新的免疫吸附亲和层析柱,用于纯化AFP。该法制备简单,固相支持物连接抗体之前不需活化处理和使用化学交联剂。实验结果表明,纯化的AFP纯度较高,收获量也大,是一种实用的柱层析技术。     

蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯度分析及与层析法的比较

通过对蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯化工艺进行分析,发现现行工艺中收取的病毒组分中,不同蔗糖浓度中病毒的纯度是不同的,而呈峰型且与病毒效力峰及蛋白浓度峰不重合。实验结果对今后工艺的改进具有指导意义。另外应用Sephacryl-s-1000凝胶层析法对乙脑病毒进行了纯化研究和分析,发现蔗糖梯度离心法和层析法纯化的病毒的纯度及回收率分别为291．46u／mg、96．01％和309．41 u／mg 65．08％,Sephacryl-s-1000凝胶层析法同样可以获得较高的纯度和收率。     

一种制备λ-DNA的简便方法

一定纯度的λ-DNA是基因工程研究常用的材料。目前所通用的提纯方法氯化铯密度梯度离心法或聚乙二醇6000沉淀-柱层析法,或则耗费昂贵,或则不易纯化。我们采用了一种较简便有效的差速离心法制备和纯化λ-DNA,介绍如下: 采用λ噬菌体溶源性大肠杆菌[Escherichia     

密度梯度离心分离大鼠卵巢卵泡膜细胞

探讨用密度梯度离心法快速、有效地分离大鼠卵泡膜细胞.选取23～25 d雌性大鼠卵巢,用Percoll密度梯度离心法将卵泡膜细胞分离纯化,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)组织化学染色用于卵泡膜细胞纯度检测.分别用0.1 U/mL和1.0 U/mL卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)处理细胞,无血清培养48 h后,酶联免疫法检测培养液中雄烯二酮和雌二醇的水平.分离所得细胞中,3β-HSD染色阳性细胞与总细胞数之比大于90％; LH组的雄烯二酮水平显著高于对照组和FSH组(P＜0.05),LH组中1.0 U/mL组的雄烯二酮水平又高于0.1 U/mL组.各组均未检测到雌二醇及孕酮.3β-HSD组织化学染色可快速有效地检验所分离的卵泡膜细胞的纯度,分离所得的卵泡膜细胞可对LH产生反应,且其中几乎没有混杂颗粒细胞.