一种HBV研究的新动物模型-喜马拉雅旱獭β-actin基因的克隆及序列分析

目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白（β-actin）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体（pMD18-T）,构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp（nt887～1 235）,其中编码序列为323 bp（nt-887～1209）,编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点（氨基酸16和氨基酸105）及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高（99.69 %）,其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高.     

青海海晏县热水滩和乌兰脑滩喜马拉雅旱獭的繁殖生物学特征

研究喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)繁殖生物学特征,对阐明其种群数量变动,进行数量监测以及探索动物流行病学有着实践和理论意义。国内赵中石(1982)对天山旱獭(Marmota baibacina)有过研究,而喜马拉雅旱獭尚无报道。作者于1982-1984年对青海湖东北岸热水滩地区(下称研究区,该区于1960-1979年进行了持续地灭獭工作)进行了连续3年的调查,并与未经人群干扰的乌兰脑滩地区(下称对照区)作对比,研究了喜马拉雅旱獭繁殖生物学特征。     

青海同德县疏林草原喜马拉雅旱獭数量及其繁殖

喜马拉雅旱獭(MarmotahimalayanaHodgson)是青藏高原及其毗邻地区的草原害鼠之一,其皮毛具有经济价值。作者于1985年5—8月对青海同德县河北地区沟谷疏林草原的喜马拉雅旱獭进行数量和繁殖调查。其面积为350平方公里。材料和方法用路线法(每小时5公里速度)目测左右各50米范围内景观植被、土壤与獭数量。5—8月解剖雌獭101只、雄獭110只,检查胚胎及子宫斑,根据臼齿咀嚼面鉴定年龄。结果与讨论一、景观与密度旱獭栖息景观可分五种:(一)高山草甸:主要在4,000米以上的高山地带,植被以嵩草为主,伴有垫状植物,盖度不大,土壤为高寒草甸土,旱獭不多…     

喜马拉雅旱獭血液生理指标测定

首次测定了45只人工饲养条件下喜马拉雅旱獭的血液生理值.结果显示人工饲养条件下除淋巴细胞和中性粒细胞百分率因动物年龄不同而有显著性差异外(P<0.05),不同性别、不同饲养时间喜马拉雅旱獭的白细胞数、白细胞分类计数百分率、红细胞、血小板、血红蛋白和平均血红蛋白浓度等7项指标都没有显著性差异,说明建立的旱獭人工饲养管理方法可保证动物的血液生理指标的稳定性,所测血液生理指标也可作为喜马拉雅旱獭饲养管理和疫病检测判断的参考依据.     

人工饲养条件下喜玛拉雅旱獭寄生虫病综合防治

目的制订规模化饲养喜玛拉雅旱獭寄生虫病综合防治措施,提高喜马拉雅旱獭的数量和质量及保证动物实验结果的准确性.方法 根据喜玛拉雅旱獭寄生虫检测结果,选择1%伊维菌素注射液按每千克体重0.02 ml皮下注射,连用5～7 d,制定并落实标本兼治的防疫措施和日常卫生消毒管理制度.结果给药后10 d和30 d取新鲜粪便检测,体内外寄生虫0%感染,停药90 d后未检测到寄生虫成虫和虫卵.结论通过采取药物驱虫和日常卫生管理及综合防治措施,使喜马拉雅旱獭寄生虫病控制收到良好效果.     

滇西北部喜马拉雅旱獭的生态观察

滇西北部的喜马拉雅旱獭 Marmota himalayana rabusta(Milen-Edwards)(下称旱獭)据现有资料,仅分布于德钦及中甸。现将1965年5—10月在德钦地区所获生态观察资料整理于后,供参考。     

喜马拉雅旱獭的洞型观察

旱獭与医学关系密切,又有很高的经济价值。过去国内外对蒙古旱獭(Marmota sibirica)、灰旱獭(M. baibacina)、草原旱獭(M. bobac)和长尾旱獭(M. caudata)等的洞型都有报道。本文系作者1960-1975年在甘肃省洮江县和青海省共和县,剖析观察了喜马拉雅旱獭(M. himalayana)150余个洞型结构资料,现简报如下。     

我国首例白化喜马拉雅旱獭家族的发现及其描述

喜马拉雅旱獭Marmota himalayana 属啮齿目Rodentia 松鼠科Sciuridae 旱獭属Marmota,是大型地栖动物,为青藏高原特有种.其正常体色为自鼻端经两眼眉间到两耳前方之间有似三角形的黑色毛区.     

喜马拉雅旱獭迁移特征研究

喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)是祁连山地区的主要啮齿动物,也是该地区鼠疫疫源地主要的贮存宿主。研究旱獭生态对鼠疫流行病学和生产活动具有重要的意义。1973-1975年,我们在甘肃省肃南县皇城上石桥地区对旱獭生态进行了系统的观察研究。本文仅报道其中有关迁移方面的研究结果。     

白化喜马拉雅旱獭的血液生理指标

喜马拉雅旱獭Marmota himalayana是属啮齿目Rodentia松鼠科Sciuridae旱獭属Marmota的大型地栖性啮齿动物,为青藏高原特有种。2008年8月和2009年7月作者分别在青海海西乌兰县和青海海北门源县进行鼠疫监测工作时发现两个白化喜     

提高人工饲养条件下喜马拉雅旱獭成活率的几点体会

喜马拉雅旱獭（Marmota himalayaana）属啮齿目（Rodentia）松鼠科（Sciuridae）旱獭属（Marmnota）的大型地栖性啮齿动物,为青藏高原特有种,是我国和青海省哺乳动物资源开发利用的重点对象之一。近年来应用旱獭制作人类疾病的动物模型的研究越来越深入,乙肝病毒感染动物模型——中国旱獭的研究（国家自然科学基金项目,30271170）正在进行,对其的需求量越来越大,对动物的质量要求也越来越高。     

喜马拉雅旱獭血液生化指标测定

本文首次测定了人工饲养条件下喜马拉雅旱獭Marmota himalayana的血液生化值。结果显示雄性喜马拉雅旱獭谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著高于雌性(P<0.05);人工喂养1年后,喜马拉雅旱獭血清谷丙转氨酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)和肌酐(CREA)水平降低,提示饲料中可适当增加蛋白的含量;冬眠后血清总蛋白(TP)含量明显下降,白蛋白水平略低于冬眠前。不同性别、年龄、不同饲养时间喜马拉雅旱獭其他指标差异均无统计学意义,说明建立的喜马拉雅旱獭人工饲养管理方法可保证动物血液生化指标的稳定性,所测血液生化指标值也可作为喜马拉雅旱獭饲养管理和疫病检测判断的参考依据。     

喜马拉雅旱獭线粒体DNA控制区遗传多样性及系统发育

喜马拉雅旱獭是青藏高原的优势种,数量多、分布广,全面了解其遗传背景对该地区旱獭资源的保护与合理利用具有重要的意义。本研究以青藏高原云南、西藏和青海三省区共13个地理种群计258只旱獭为研究对象,PCR扩增获得线粒体DNA控制区基因部分序列(887 bp),并运用种群遗传学方法进行遗传多样性分析。结果显示:258份样品共发现了84个变异位点(9.40%),定义了68种单倍型,其单倍型多样性(h)平均值为0.968±0.003、核苷酸多样性(π)平均值为0.017 25±0.016 37,种群总体遗传多样性较高。AMOVA方差分析显示13个地理种群间存在着明显的遗传分化(Fst=0.620 67,P<0.001),种群间基因交流多数较低(Nm<1)。基于单倍型构建的系统发育树中13个地理种群的喜马拉雅旱獭聚为两支,其中来自青藏高原西南地区(西藏安多、青海格尔木、青海囊谦、云南迪庆)的18个单倍型聚成一个大的分支(A支),其余50个单倍型聚为一个大的分支(B支),在NETWORK网络图中也可见到相似网络拓扑结构。研究结果显示青藏高原喜马拉雅旱獭种群以唐古拉山脉为界分为两个大的种群,说明地理隔离是影响喜马拉雅旱獭种群动态变化的主要因素。     

青海省厉螨科一新属新种(蜱螨目:革螨股)

1982年夏在青海省的喜马拉雅旱獭 Marmota himalayana Hodgson 体上采得一种革螨,经鉴定,认为是厉螨科Laelaptiae Berlese 中未经描述过的种类,并为之建立新属,订名为旱獭青厉螨 Qinghailaelaps marmotae。现记述于后,所用量度单位均为微米.     

喜马拉雅旱獭种群微卫星变异及遗传多样性

为了解不同地理种群喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)的种群数量变化并探讨其内在的遗传学机制,通过构建部分基因组文库的方法筛选出8个高变异微卫星位点,根据微卫星位点的测序结果设计相应引物,PCR扩增检测了青藏高原4个地理种群(德令哈、乌兰、沱沱河、安多)喜马拉雅旱獭的遗传多态性及其种群结构.研究结果显示:8个位点在喜马拉雅旱獭种群中均为高度多态,观察等位基因数、有效等位基因数、多态信息含量分别为4.75、3.033 2、0.610 2;喜马拉雅旱獭种群总的期望杂合度和观察杂合度分别为0.670、0.699;3个喜马拉雅旱獭种群显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)偏离H-W平衡状态,且这些偏离平衡的位点均由杂合过度导致(FIS＜0);喜马拉雅旱獭种群的部分位点已经偏离了突变-漂移平衡.结论:筛选出的8个微卫星位点适合于喜马拉雅旱獭种群遗传多样性的研究,所研究的喜马拉雅旱獭种群有较高的遗传多样性,安多地理种群在近期可能经历过瓶颈效应,种群数量曾经下降.     

谢氏山蚤生活史的初步观察

<正> 谢氏山蚤Oropsylla silantiewi(Wagner)是喜马拉雅旱獭Marmota himalayana(Hodgson)的主要寄生蚤之一,是旱獭鼠疫自然疫源地的主要媒介昆虫。该蚤在獭体和窝巢数量之多,仅次于斧形盖蚤Callopsylla dolabris(Jordan ＆Rothschild)占第二位。对此蚤的野外调查已有较多的报告,但室内人工养殖未见有成功的报     

喜马拉雅旱獭制动性麻醉方法

目的将盐酸氯胺酮用于喜马拉雅旱獭的麻醉,探讨不同剂量麻醉效果,为合理使用提供参考。方法将30只喜马拉雅旱獭随机分为3组,按15、45、90mg/kg体重给予盐酸氯胺酮,行后肢肌肉注射麻醉,观察临床表现和诱导时间及麻醉时间。结果给予盐酸氯胺酮后喜马拉雅旱獭分别在402.0±60.7s、372.0±72.0s、222.0±66.0s进入麻醉状态,维持时间分别为558.0±96.0s、1344.0±264.0s、3366.0±696.0s。随剂量的增加,麻醉时间相应增加。结论盐酸氯胺酮对喜马拉雅旱獭进行肌肉注射麻醉是有效和安全的,在应用中还可以根据实验需要选择3种剂量进行麻醉,为喜马拉雅旱獭得到广泛应用奠定了基础。     

喜马拉雅旱獭的能量代谢初试

喜马拉雅旱獭(Marmota himalayana)是青藏高原上的特有种,目前还未见有关生理学研究资料。我们于1982年12月1-10日,对5只喜马拉雅旱獭作了能量代谢的初步测定,现报道如下。 喜马拉雅旱獭捕自青海省海晏县热水滩地区,11月初送到我所饲养房喂养。12月份,饲养室气温为5-15℃,旱獭仍进食未冬眠。试验时,室温控制在10-13℃。用半导体点温计测肛温,由心电图计算心率。能量代谢试验通过改装的口鼻罩收集连续5分钟呼出气体,用煤气流量计测呼出气体量,用英国的Corning165型pH/Blood gas分析仪测定呼出气中CO₂与O₂含量,计算出O₂耗量与CO₂产生量,进而推算出呼吸商,产热量及基础代谢量。又用密闭式呼吸室法测得呼吸商与其口鼻罩法测得的结果讲行比较。     

中国青海地区喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染的组织学研究

应用原位杂交技术、免疫组化技术以土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)的检测系统检测50份 喜马拉雅旱獭肝组织可能存在的嗜肝病毒c基因、s抗原及c抗原的表达,同时检测肝脏组织病理学改变。结果显示 旱獭肝组织中嗜肝病毒s抗原、c抗原的阳性率分别为26％(13／50)、36％(18／50);在抗原双阳性的10份肝组织标本 中有c基因的阳性表达,阳性率为50％。c抗原定位于肝细胞胞浆和／或胞核,呈散在、片簇状分布,c基因定位于肝细 胞的细胞核,阳性细胞散在分布。50份标本中5份出现肝炎的病理改变,与抗原检出间无明显相关性。使用WHV 的病毒检测系统证实青海地区喜马拉雅旱獭可能存在类似WHV的嗜肝病毒感染,从组织学的角度为中国青海地区 喜马拉雅旱獭嗜肝病毒自然感染提供证据,此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染的动物模型。     

青海省东部地区喜马拉雅旱獭种群遗传结构

本研究利用11个微卫星标记对采自青海省东部地区的13个喜马拉雅旱獭（Marmota himalayana）种群149个个体进行了基因分型,并运用种群遗传学方法对其遗传多样性和遗传结构进行分析。结果显示,11个微卫星标记位点共计检测到97个等位基因,各种群的平均观测杂合度和期望杂合度范围分别为0.58~0.82和0.60~0.79,种群遗传多样性水平相对较高;遗传结构分析表明,青海省东部地区的喜马拉雅旱獭种群具有显著的遗传结构,13个地理种群形成了3个遗传聚类群,且3个遗传聚类群与湟水河和黄河上游干流所划分出的地理单元完全一致,因此我们认为湟水河和黄河上游干流是阻碍该地区喜马拉雅旱獭种群进行迁移扩散和基因交流的天然屏障。同时,STRUCTURE分析结果还显示3个遗传聚类群间仍有明显的基因流,AMOVA分析也显示3个聚类群间变异百分比为6.60%,仅略高于聚类群内种群间的变异（4.51%）,而远低于种群内变异水平（88.90%）,表明三个聚类群间的分化程度并不是很深。这说明喜马拉雅旱獭可能通过桥梁或在枯水期等穿越河流进行基因交流。以上结果为该地区的旱獭种群监控和鼠疫防控提供了科学的理论基础。