MicroRNA-141在上皮性卵巢癌患者组织和血清中的表达及临床意义的探讨

目的：探讨微小RNA-141（miR-141）在卵巢癌患者组织和血清中的表达情况并初步探讨其作为肿瘤标记物早期诊断上皮性卵巢癌的可行性。方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-timeRT—PCR）检测16例上皮性卵巢癌患者和4例正常人卵巢组织及血清标本中miR-141的表达;检测4例良性卵巢肿瘤血清中miR-141的表达。结果：miR-141在卵巢癌患者组织中相对表达量分别为（72．846±76．671）显著高于正常人（2．869±3．201）（P〈0．05）;miR-141在卵巢癌患者血清中相对表达量（31．581±52．885）显著高于良性卵巢肿瘤患者（0．668±1．196）和正常人（1．690±1．697）（P〈0．05）,后两组间表达无差异（P〉0．05）;miR-141表达随卵巢癌临床分期的进展呈上升趋势（P〈0．01）,在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组（P〈0．05）,与组织分级和CA125的升高无关（P〉0．05）。在组织中miR-141表达水平与上皮性卵巢癌临床病理特征均未见明显差异（P〉0．05）。结论：miR-141可能在上皮性卵巢癌的发生发展中发挥癌基因的作用;miR-141用于检测上皮性卵巢癌敏感性和特异度较高,有望成为上皮性卵巢癌早期诊断的新指标。     

上皮性卵巢癌患者血清 microRNA-21 的水平及其临床意义研究

目的:检测上皮性卵巢癌患者血清中microRNA-21的表达,并探讨其作为标记物预测上皮性卵巢癌化疗耐药患者预后的可行性。方法:采用探针型实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测和比较20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人卵巢血清标本中microRNA-21的表达,并分析血清microRNA-21水平与上皮性卵巢癌患者化疗耐药及其临床病理特征的相关性。结果:正常人、上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中micro RNA-21的相对表达量分别为0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710,上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中miR-21的相对表达量均显著高于正常人血清中miR-21的相对表达量(P<0.05),而上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清中miR-21表达显著高于上皮性卵巢癌化疗敏感患者,差异有统计学意义(P<0.05)。上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清miR-21表达水平与其手术-病理分期无及是否发生淋巴结转移均无明显相关性(P>0.05)。结论:上皮性卵巢癌患者血清microRNA-21水平显著升高,可能作为其化疗耐药的预测参考指标,但血清microRNA-21水平与上皮性卵巢癌化疗耐药患者的不良预后并无显著相关性。     

微小RNA-21与PTEN在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:检测微小RNA-21(miR-21)和抑癌基因PTEN在上皮性卵巢癌组织中的表达,探讨二者的相关性及其与临床病理特征间的关系.方法:采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测48例上皮性卵巢癌组织、24例良性上皮性卵巢肿瘤及15例正常卵巢组织标本中miR-21表达.采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶(SP)免疫组化方法检测上述组织中PTEN蛋白表达,分析mir-21表达和PTEN表达的相关性及其与临床病理特征的关系.结果:茎环Real-time RT-PCR检测miR-21表达的敏感性和特异性良好;miR-21在卵巢癌组织中的相对表达量(4.849±1.813)显著高于良性卵巢肿瘤(1.133±0.291)及正常卵巢组织(P<0.01),PTEN在卵巢癌组织中阳性表达率为(41.66%),明显低于卵巢良性肿瘤(83.33%)及正常卵巢(100%).卵巢癌组织中miR-21表达量与PTEN阳性表达率存在显著负相关(r=-0.447,P<0.01).miR-21及PTEN表达随卵巢癌的临床分期和组织分级的进展分别呈上升及下降趋势,而且二者表达均与淋巴结转移相关(P均<0.01),而与组织病理类型无关.结论:miR-21在上皮性卵巢癌组织中的表达升高,可能通过负性调节PTEN表达在卵巢癌的发生发展中发挥致癌基因的作用,并且与卵巢癌的演进及不良预后密切相关.     

趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,以及其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法:收集上皮性卵巢癌组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织以及正常卵巢组织标本各30例,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量反转录聚合酶链反应[poly(A)-RT-qPCR]检测其CCR3的表达,并分析上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者临床病理特征之间的关系。结果:上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达显著高于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组,差异有统计学意义(P0.05);且上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者的分期、组织分级及淋巴结转移均显著相关(P0.05)。结论:CCR3在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,且在上皮性卵巢癌的发生和发展过程中均起着十分重要的作用。     

上皮性卵巢癌组织中uPA及uPAR的表达(英文)

目的:研究uPA和uPAR在卵巢癌中的表达,分析其与卵巢癌的发展和预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测60例上皮性卵巢癌、20例交界性卵巢肿瘤及20例良性卵巢肿瘤组织中uPA、uPAR及表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:(1)uPA、uPAR、在上皮性卵巢癌中的表达率(75%,66.7%)明显高于交界性卵巢肿瘤(40%,30%)及良性卵巢肿瘤组织(30%,25%),差异均有统计学意义(uPAx2=22.078,P0.001;uPARx2=19.510,P0.05),而交界性卵巢肿瘤与良性卵巢肿瘤组织间差异无统计学意义(P0.05)。(2)uPA、uPAR在恶性卵巢肿瘤中阳性表达率与手术病理分期、组织分级和有无淋巴结转移有关;晚期癌组阳性表达率高于早期癌组(uPAx2=14.400,P0.05;uPARx2=9.6,P=0.002);低分化癌组的阳性表达率高于中高分化癌(uPAx2=15.002,P0.05;uPARx2=36.906,P0.05);有淋巴结转移癌组阳性表达率高于无淋巴结转移癌组(uPAx2=13.333,P0.05;uPARx2=15.313,P0.05);差异均有统计学意义;但是与癌症病理类型、病人年龄、肿瘤大小无关。uPA与uPAR的表达存在正相关。结论:在uPA和uPAR可通过促进血管生成和降解细胞外基质(基质)和基底膜,在肿瘤的侵袭和转移中发挥重要作用。uPA及uPAR在上皮性卵巢癌组织中表达上调,支持这些因子在肿瘤浸润和转移中发挥重要作用,二者有可能作为预测上皮性卵巢癌预后的重要参考指标。     

上皮性卵巢癌组织miR-338-3p、miR-1294的表达及临床意义

摘要 目的：探讨上皮性卵巢癌组织中微小RNA（miR）-338-3p、miR-1294表达与患者临床病理参数的关系,并分析其表达对上皮性卵巢癌预后的影响。方法：收集2010年6月～2015年6月我院行手术治疗的上皮性卵巢癌患者的石蜡组织样本（癌组织和癌旁正常组织）,实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测组织样本中miR-338-3p、miR-1294的表达情况;分析癌组织中miR-338-3p、miR-1294表达与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-338-3p、miR-1294表达与患者预后的关系;Cox回归模型分析上皮性卵巢癌患者的预后影响因素。结果：与癌旁正常组织相比,上皮性卵巢癌组织中miR-338-3p、miR-1294表达均降低（均P<0.05）;miR-338-3p表达与组织学分级、淋巴结转移、FIGO分期相关（均P<0.05）;miR-1294表达与肿瘤直径、淋巴结转移、FIGO分期相关（均P<0.05）。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,miR-338-3p低表达组患者、miR-1294低表达组患者的预后较差（均P<0.05）。Cox回归模型分析结果显示,淋巴结转移、较高FIGO分期、miR-338-3p低表达、miR-1294低表达是上皮性卵巢癌预后的危险因素（均P<0.05）。结论：上皮性卵巢癌组织中miR-338-3p、miR-1294均低表达,且均与较差临床病理参数、预后不良相关;miR-338-3p、miR-1294可能是上皮性卵巢癌患者预后预测的潜在指标。     

上皮性卵巢癌患者组织P53、Ki67表达及其临床意义

摘要 目的：探讨上皮性卵巢癌患者组织P53、Ki67表达及其临床意义。方法：选择卵巢肿瘤102例,其中病理诊断为良性卵巢肿瘤40例(良性组)和上皮性卵巢癌62例(恶性组),采用免疫组化法检测组织P53、Ki67表达水平,调查患者的临床病理特征并进行相关性分析。结果：恶性组的P53、Ki67表达阳性率为80.6 %和72.6 %,显著高于良性组的10.0 %和12.5 %(P<0.05)。在恶性组中,不同浸润转移、分化程度、病理分期患者的P53、Ki67表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)。直线相关分析显示上皮性卵巢癌患者P53表达阳性率与Ki67表达阳性率呈现显著正相关性(r=0.872,P=0.000)。多因素logistic回归分析显示浸润转移、分化程度、病理分期都为影响P53、Ki67表达阳性率的主要因素(P<0.05)。结论：上皮性卵巢癌患者组织P53、Ki67都呈现高表达状况,与患者的临床病理特征显著相关,两者也可互相影响,共同参与上皮性卵巢癌的发生与发展。     

雌激素受体GPR30在上皮性卵巢癌中的表达及其与MMP-9表达的相关性

本文旨在研究新型雌激素受体——G蛋白耦联受体30(G protein-coupled receptor30,GPR30)在上皮性卵巢癌中的表达,及其与基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的相关性。收集39例上皮性卵巢肿瘤组织标本,包括上皮性卵巢癌30例(浆液性囊腺癌19例、粘液性囊腺癌5例和子宫内膜样癌6例)、良性上皮性卵巢肿瘤9例,并取4例正常卵巢组织进行对照,应用免疫组织化学法检测GPR30和MMP-9的表达,使用?2检验、Fisher’s精确检验和Spearman等级相关分析等统计学方法对所得数据进行统计分析。结果显示,上皮性卵巢癌中GPR30的高表达率显著高于良性卵巢肿瘤(P0.01)和正常卵巢组织(P0.05);上皮性卵巢癌中MMP-9的高表达率显著高于正常卵巢组织(P0.05),但与良性卵巢肿瘤无明显差异。肿瘤病理类型、分期和患者年龄因素与GPR30高表达率的相关性分析显示:不同病理类型上皮性卵巢癌的GPR30高表达率之间存在显著性差异(P0.05),而各病理类型的MMP-9高表达率之间没有差异;临床III~IV期上皮性卵巢癌的GPR30高表达率显著高于I~II期(P0.05),二者MMP-9高表达率之间没有差异;三个年龄组病例中的GPR30高表达率之间未见明显差异,三者MMP-9高表达率之间亦没有差异。Spearman等级相关分析显示上皮性卵巢癌组织中GPR30与MMP-9的表达之间具有正向相关性(P0.01)。以上结果提示,GPR30可能参与上皮性卵巢癌的发生发展,并与其侵袭和转移具有一定的相关性,可作为卵巢癌早期诊断和恶性程度判断的指标之一。     

miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭

[目的]探讨miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭作用。[方法]检测40例肺癌患者癌组织和癌旁组织中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并分析NFIC表达与肺癌患者病理特征的相关性。按Lipofectamine 2000方法分别将miR-NC、miR-550a-3 mimics和miR-550a-3inhibitor转染到HCC827细胞,48h后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,同时检测细胞中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并检测细胞中NFIC、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。[结果]肺癌组织中miR-550a-3表达水平(1.83±0.19)高于癌旁组织(1.00±0.15),NFIC mRNA表达水平(0.62±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.10)(P<0.05);以miR-550a-3 mRNA均数为标准,将肺癌患者分为高表达组(22例)和低表达组(18例),miR-550a-3与病理类型和TNM分期相关(P<0.05),与年龄、性别、是否吸烟和肿瘤直径不相关(P>0.05)...     

上皮性卵巢癌患者血清及肿瘤中Prostasin 变化及意义

目的:检测prostasin在上皮性卵巢癌患者血清及组织中的表达,探讨prostasin在上皮性卵巢癌中的临床意义。方法:运用免疫组织化学发检测组织prostasin在20例正常卵巢组织、40例卵巢上皮性良性肿瘤以及26例卵巢癌中的表达,分析其与各临床参数间的相关性,并通过ELISA法检测26例上皮性卵巢癌患者血清prostasin水平,探讨血清prostasin与组织prostasin的相关性。结果:prostasin在正常卵巢组织中无表达,在卵巢良性及恶性肿瘤中的表达率分别为24.00%和71.47%,差异具有统计学意义(x2=16.37,P<0.005);prostasin表达与病理类型、分化程度呈正相关(P=0.001,P=0.002),与临床分期无明显相关性(P=0.154);血清prostasin在卵巢上皮性癌组为14.07μg/ml,明显高于良性肿瘤组及正常对照组(P<0.001);卵巢癌组术后7天血清prostasin水平7.88μg/ml,明显低于术前(P=0.000);术前血清prostasin浓度与组织prostasin表达呈线性相关(r=0.601)。结论:prostasin对上皮性卵巢癌的发生发展、诊断及预后评估具有意义。     

壳聚糖酶的克隆表达与壳寡糖的制备分析

目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。     

国内外蝗害治理技术现状与展望

本文首先概述了国内外蝗虫发生与为害的态势,总结了现阶段我国蝗虫发生与为害的主要特点:即农田飞蝗暴发频繁而且严重,草原土蝗的发生时常造成严重的经济损失,而且侵入城市干扰市民生活,我国与周边国家之间蝗虫过境迁移频繁,使用化学农药污染环境和农产品;分析了国内外蝗虫防治对策与技术的发展现状,重点介绍了应急防治和可持续治理对策、...     

Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin

The nanomechanical properties of the coiled-coils of myosin are fundamentally important in understanding muscle assembly and contraction. Force spectra of single molecules of double-headed myosin, single-headed myosin, and coiled-coil tail fragments were acquired with an atomic force microscope and displayed characteristic triphasic force-distance responses to stretch: a rise phase (R) and a plateau phase (P) and an exponential phase (E). The R and P phases arise mainly from the stretching of the coiled-coils, with the hinge region being the main contributor to the rise phase at low force. Only the E phase was analyzable by the worm-like chain model of polymer elasticity. Restrained molecular mechanics simulations on an existing x-ray structure of scallop S2 yielded force spectra with either two or three phases, depending on the mode of stretch. It revealed that coiled-coil chains separate completely near the end of the P phase and the stretching of the unfolded chains gives rise to the E phase. Extensive conformational searching yielded a P phase force near 40 pN that agreed well with the experimental value. We suggest that the flexible and elastic S2 region, particularly the hinge region, may undergo force-induced unfolding and extend reversibly during actomyosin powerstroke.     

放牧对牧草光合作用、呼吸作用和氮、碳吸收与转运的影响

研究放牧对草地植物生理活动的影响,对于揭示草地放牧演替的生理机制有重要意义.大量研究表明,家畜放牧对牧草光合作用、呼吸作用以及C和N吸收与转运的影响,可以分为生理伤害和生理恢复2个阶段.放牧通过改变草地冠层结构影响牧草光合作用,净光合作用速率短期内迅速下降,随着叶面积指数增加又逐渐上升,呼吸作用有相似的变化趋势.牧草放牧后再生长所需的C和N最初主要来自根系和留茬中的贮藏物质,此后随着牧草生长恢复逐渐由同化作用供给,C代谢与土壤N水平负相关.放牧后牧草生理活动变化与牧草遗传特性、种间竞争、家畜放牧特征、非生物环境等因素密切相关.     

Kinetics and thermodynamics of peroxidase- and laccase-catalyzed oxidation of N-substituted phenothiazines and phenoxazines

N -substituted phenothiazines (PTs) and phenoxazines (POs) catalyzed by fungal Coprinus cinereus peroxidase and Polyporus pinsitus laccase were investigated at pH 4–10. In the case of peroxidase, an apparent bimolecular rate constant (expressed as k _cat/K _m) varied from 1 ×10⁷M⁻¹s⁻¹to 2.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ at pH 7.0. The constants for PO oxidation were higher in comparison to PT. pH dependence revealed two or three ionizable groups with pK _a values of 4.9–5.7 and 7.7–9.7 that significantly affected the activity of peroxidase. Single-turnover experiments showed that the limiting step of PT oxidation was reduction of compound II and second-order rate constants were obtained which were consistent with the constants at steady-state conditions. Laccase-catalyzed PT and PO oxidation rates were lower; apparent bimolecular rate constants varied from 1.8×10⁵M⁻¹s⁻¹ to 2.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ at pH 5.3. PO constants were higher in comparison to PT, as was the case with peroxidase. The dependence of the apparent bimolecular constants of compound II or copper type 1 reduction, in the case of peroxidase or laccase, respectively, was analyzed in the framework of the Marcus outer-sphere electron-transfer theory. Peroxidase-catalyzed reactions with PT, as well as PO, fitted the same hyperbolic dependence with a maximal oxidation rate of 1.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ and a reorganization energy of 0.30 eV. The respective parameters for laccase were 5.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ and 0.29 eV. Received: 20 September 1999 / Accepted: 24 February 2000     

Synthesis of hapten and conjugates of coumestrol and development of immunoassay

3-O-Carboxymethylcoumestrol was prepared as the hapten for immunoassay by a partial alkylation of coumestrol with ethyl chloroacetate in acetone alkalized with potassium carbonate. 3-O-Ethoxycarbonylmethylcoumestrol was separated by column chromatography and finally was hydrolyzed with formic acid. 1H and 13C NMR data (APT, COSY, HMQC, and HMBC) revealed that the reaction was regioselective, as 3-O-ethoxycarboxymethylcoumestrol was the only monosubstituted derivative. The hapten was then conjugated to bovine serum albumin and used for immunization of rabbits. A radioimmunoassay (RIA) system was established based on the polyclonal antiserum and a 125I-labeled hapten-tyrosine methyl ester conjugate as the radioligand. Parameters of the RIA: sensitivity: 12 pg per tube, 50% intercept: 140 pg per tube, working range: 20-4000 pg per tube. The cross-reactivity of a panel isoflavonoid and lignan phytoestrogens was either negligible (e.g. formononetin 0.07%; biochanin A 0.06%) or not detectable at all. The major immunoreactive peak in HPLC fractions from an alfalfa extract had the same retention time as coumestrol standard and represented 94.8% of the signal. The remaining 5.2% of immunoreactivity was distributed between five minor peaks. We conclude that after the validation for particular matrices, the method will be a useful tool for analysis of coumestrol, especially in low volume and low concentration samples.     

白术同源四倍体的诱导和鉴定及其与二倍体过氧化物酶的比较

以白术（Atractylodes macrooephala Koidz.）二倍体组培苗为材料,对其四倍体诱导方法进行研究,共获得45个白术同源四倍体株系,为优良株系的选育提供了材料。此外,还分析比较了其中8个白术四倍体株系与二倍体的过氧化物酶同工酶（POD）的酶谱差异,发现四倍体各株系过氧化物酶同工酶谱比二倍体的均多了Rf0.310的谱带,且总过氧化物酶比活力也发生了很大改变,对探讨白术四倍体优良株系的生理生化机理具有一定的参考价值。