CD4-CCR5工程类重组二价抗体的慢病毒包装及制备

人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染与白细胞分化抗原分子CD4和趋化因子受体分子CCR5有着紧密的联系。为了研制可与HIV病毒特异性结合,并能有效预防和治疗HIV感染的抗HIV基因工程二价类重组药物,将人抗体重链恒定区IgG与CD4相连接,CCR5与人抗体轻链恒定区连接,分别构建慢病毒质粒,共转染并筛选,得到高效稳定表达的细胞株。重组抗体经分子生物学及细胞免疫学检测,证实具有抗HIV病毒感染的功能,有一定的经济价值。     

双特异性抗体在肿瘤治疗中的研究

双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)有两个抗原结合位点,其中一个位点可与靶细胞表面抗原结合,另一个位点则可与载荷物(如效应细胞,分子等)结合。将BsAb应用于肿瘤治疗,发挥抗肿瘤效应的思想已有二十多年历史,随着对效应细胞生物学了解的加深和抗体工程的飞速发展,各种形式的BsAb相继出现,多种BsAb药物已进入临床初期试验或治疗使用阶段。本文就BsAb的各种新形式及其在肿瘤治疗中的应用新进展作简要概述。     

双特异性抗体的结构及应用研究进展

双特异性抗体(bi-specific antibody,BsAb)是具有双功能的抗体分子,可同时结合两种不同的抗原或表位,将T细胞和自然杀伤细胞重定向到肿瘤细胞,在功能分子(细胞)和靶细胞之间架起桥梁,产生导向性作用。目前,BsAb已广泛应用于癌症、炎症、病毒感染及其他疾病的治疗。现就BsAb的结构、应用等方面的研究进展作一综述。     

抗α2δ1/CD3双特异性抗体的制备和功能的初步研究

目的:构建抗α2δ1和CD3的双特异性抗体,并在体外初步评价其杀伤肝癌细胞的功能。方法:通过基因工程技术,构建BiTE形式的anti-α2δ1/CD3双特异性抗体(BsAb),转染Expi 293F细胞96h后,使用镍离子亲和色谱纯化出双特异性抗体,使用流式细胞术检测anti-α2δ1/CD3BsAb对α2δ1和CD3的结合性质,使用Perkin Elmer Operetta高内涵成像仪测定anti-α2δ1/CD3BsAb介导细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对高表达α2δ1的人肝癌细胞Hep-12的杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中CTLs分泌hIL-2和hIFN-γ的变化。结果:anti-α2δ1/CD3 BsAb可以特异性结合α2δ1和CD3,anti-α2δ1/CD3 BsAb可以有效介导CTLs靶向杀伤高表达α2δ1的人肝癌细胞Hep-12,其介导杀伤Hep-12细胞的EC_(50)为8pmol/L,对于低表达α2δ1的人肝癌细胞Hep-11,anti-α2δ1/CD3 BsAb不能介导CTLs发挥杀伤作用,并且在杀伤过程中Hep-12细胞组CTLs释放的hIL-2和h IFN-γ比Hep11细胞组显著增多(P 0.05)。结论:anti-α2δ1/CD3 BsAb能有效介导CTLs体外杀伤高表达α2δ1的人肝癌细胞Hep-12,为双特异性抗体的肝癌免疫治疗奠定了一定的基础。     

Medarex的双抗体优于单一MAb

将两个分离的单克隆抗体(MAb)连接起来制成的 Bispecific~(TM)抗体能起到其中任何一个抗体所起不到的作用。对此,Medarex,Inc.(Princeton,NJ)似乎掌握了足够的证据。特别是这种双特异性抗体能体外保护免疫细胞不受 HIV 侵染,而任何一个 MAb 则做不到。此项双特异性技术包括将两个结合不同抗原的 MAb 连接起来,因此,所产生的单一分子能结合两种抗原。治疗 HIV 侵染的双特异性抗体由结合 AIDS 病毒 gp41表面蛋白的 MAb 和结合巨噬细胞上 Fc 受体的MAb 组成。这种受体一旦被结合,巨噬细即摧毁结合另一种抗体的细胞或病原体。HIV 就是这种情     

重组痘苗病毒表达人免疫缺陷病毒中国株B'亚型Gag蛋白及免疫效果观察

为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因,利用痘苗病毒载体构建表达HIV-1 B′亚型中国流行株RL42的Gag蛋白的重组病毒rVV-RL42gag,并免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组)亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应.结果显示:重组病毒能很好地表达Gag蛋白,它具有与7株单克隆抗体结合的抗体表位;电镜下可观察到Gag蛋白形成的颗粒.rVV-RL42gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL,抗体具一定的中和活性,且检测到与C(B′/C重组)亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应.这些结果表明,rVV-RL42gag具有良好的免疫原性,可进一步构建表达HIV B′亚型中国流行株RL42的Gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗.     

双特异性抗体构建在肿瘤临床治疗中的应用

双特异性抗体(Bispecific antibody,BsAb)是具有两个不同抗原结合位点的抗体,可分为含Fc段和不含Fc段的BsAb,不同结构的BsAb具有不同的特点和应用领域。相比于传统的单克隆抗体,BsAb的灵敏度和特异性更高。更重要的是,BsAb具有募集免疫细胞、双重阻断信号通路等功能,在免疫诊断和治疗中扮演重要角色。随着全球环境的恶化以及人们生活习惯的不规律,肿瘤的发病率越来越高,成为仅次于心脑血管疾病的全球第二大致死疾病,全球每年有1200万新发癌症病例。肿瘤的治疗手段包括手术切除、放化疗和靶向治疗等。肿瘤免疫疗法是近几年新兴的治疗方法,其通过激发自身免疫系统的能力来清除肿瘤细胞。传统的单抗药物虽在肿瘤靶向治疗和免疫治疗中取得了一定的疗效,但肿瘤具有高度的异质性和可塑性,常常引发肿瘤耐药性的出现。双特异性抗体能够同时靶向多个靶点,目前已用于肿瘤的临床治疗,并取得了一定的治疗效果。文中就双特异性抗体在肿瘤临床治疗中的研究进展和应用作一综述。     

一种检测HIV携带者血液中抗原的改良方法

<正> 序言 AIDS系人免疫缺陷性病毒(HIV)所致。其诊断常采用HIV分离、逆转录酶活性测定和抗HIV抗体测定等三种方法。虽然抗体测定法是有用的,但在血清阳转之前,病毒或者抗原也许存在于抗体缺乏者体内,所以,抗体应答并非直接反映抗原物质。近来,HIV抗原试剂盒已有改进,使其能测定感染者在血清阳转之前血清中的抗原及HIV携带者的抗原物质。要了解HIV携带者的临床症状及预后,监测病毒及其抗原物质是有利的。然而,重     

关于艾滋病疫苗的新问题

最新研究指出:用于抗艾滋病病毒的抗体能增强该病毒的传染;艾滋疫苗的主成份经培养可以杀伤神经元;乙型肝炎的传染能加强艾滋病毒的复制。马萨诸塞医科大学的研究表明,在抗体被动性增强(antibody-dependent enhancement,ADE)中,抗体的 Fc 部分与巨噬细胞和单核细胞上的 Fc 受体相结合。如果抗体也结合了一种病毒,这种病毒就能被带入细胞。马萨诸塞医科大学的科学家把一个单核细胞放入 HIV 和人体血清中培养,证实了上述现     

治疗艾滋病的构想——多重复合型抗体

由于HIV的高度变异性．人们现在仍未成功研制出有效的疫苗或抗体。通过在体内已经存在的聚合型抗体(如IgM、IgA)的启示,可以联想合成一种含有不同亚单位的复合型抗体——多重复合型抗体,通过这个复合型抗体的多效特异性去消灭各种HIV,从而达到通过被动体液免疫来消除细胞外的HIV的目的。再通过同抑制病毒在细胞内反转录及疫苗免疫疗法,从根本上消灭HIV,最后治愈艾滋病。     

人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中ll株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Western blot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。     

ZAP融合蛋白抑制HIV病毒模型的构建及功能分析

ZAP是一种抗病毒因子,能够特异性结合病毒RNA并招募细胞中的RNA酶降解所结合的靶RNA,从而抑制某些病毒的复制,如鼠白血病病毒(MLV)、辛德比斯病毒(SIN).ZAP对HIV病毒抑制作用并不明显.Tat和Rev是HIV编码的两种可以特异性结合HIVRNA的蛋白质,将它们与ZAP构建成融合蛋白,使得融合蛋白通过Tat或Rev结合HIVRNA并通过ZAP降解HIVRNA,从而抑制HIV假病毒载体携带基因的表达.这一结果为抑制HIV病毒提供了一个新思路,也支持了ZAP招募mRNA降解机器降解靶RNA的模型.     

综述:Ⅰ型干扰素在HIV-1感染中的作用具有两面性

Ⅰ型干扰素(以下简称为干扰素)是重要的抗病毒因子,也是临床上治疗病毒感染性疾病的药物．然而,干扰素在HIV感染中的作用一直存在争议．最近在HIV感染的人源化小鼠模型中发现,干扰素具有抑制HIV复制和破坏抗病毒免疫的双重作用．在抗病毒药物治疗的同时,注射干扰素受体的阻断抗体显著提高抗HIV特异性免疫反应,延缓停药后病毒反弹．这些研究结果提示,干扰素有望成为研发治疗艾滋病新型药物的靶点．     

Ⅰ型干扰素在HIV-1感染中的作用具有两面性

Ⅰ型干扰素(以下简称为干扰素)是重要的抗病毒因子,也是临床上治疗病毒感染性疾病的药物.然而,干扰素在HIV感染中的作用一直存在争议.最近在HIV感染的人源化小鼠模型中发现,干扰素具有抑制HIV复制和破坏抗病毒免疫的双重作用.在抗病毒药物治疗的同时,注射干扰素受体的阻断抗体显著提高抗HIV特异性免疫反应,延缓停药后病毒反弹.这些研究结果提示,干扰素有望成为研发治疗艾滋病新型药物的靶点.     

酶标SPA免疫酶法检测宫颈癌患者血清中单纯疱疹病毒抗体

免疫酶法用于检测病人体液中病毒特异性抗体与其它方法相比。是一种简便易行、敏感性、特异性较好的方法,应用日广。用它检测病毒IgG抗体,通常以酶标抗人IgG(简称酶标抗体)作为第二抗体。本文将辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(简称酶标SPA)用于免疫酶法中检测宫颈癌患者血清中单纯疱疹病毒     

双特异性抗体及其在肿瘤治疗中的应用

双特异性抗体（BsAb）是改造抗体治疗效果的发展方向之一,现已成为抗体工程研究领域的热点。在过去20年的研究中．研究人员看到了常规BsAb的潜能以及它的不足。随着分子生物学技术的迅速发展,出现了利用基因工程手段构建的BsAb的多种模式,并且有多种BsAb制剂已经用于肿瘤的初期临床诊断和治疗。该文对BsAb最新的研究进展和肿瘤治疗中的应用进行了阐述。     

抗人类免疫缺陷病毒1型广谱中和抗体的研究进展

现行抗反转录病毒治疗药物的联合应用可有效抑制艾滋病进程并显著延长患者寿命,但由于人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)潜伏库的存在,艾滋病迄今尚无法治愈。近年发现抗HIV广谱中和抗体能有效降低患者体内病毒载量并延缓疾病进程,为研发艾滋病疫苗和治愈策略带来了曙光,尤其是序贯免疫策略的使用极大推进了广谱中和抗体的开发和应用进程。2018年,美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)批准了第1个临床应用的广谱中性单克隆和抗体,无疑为抗HIV单克隆抗体药物的研发注入了一支强心剂。本文围绕近年来抗HIV广谱中和抗体的研究进展进行综述,探讨未来广谱中和抗体研发面临的挑战。     

人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重组痘苗中的表达

Gag和Env蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV1)的结构蛋白,是HIV1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多次亚克隆,将env基因以正确的三联密码读框插入gag基因的下游,制备了HIV1gagenv嵌合基因,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒p75启动子和牛痘病毒A型包涵体(ATI)启动子的下游,经过同源重组和红细胞吸附试验筛选,获得了2株重组痘苗病毒。免疫荧光试验和酶免疫试验证明,两株重组痘苗病毒均能正确地表达HIV1gagenv嵌合基因。动物实验表明,gagenv嵌合基因重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗HIV特异性抗体。这些结果为艾滋病颗粒化疫苗的研制提供了借鉴。     

科研快讯

《PLoS综合》:母乳中抗体能中和艾滋病病毒据物理学家组织网5月23日(北京时间)报道,最近,美国杜克大学医疗中心从人类乳汁B细胞的免疫细胞中分离出两种抗体,这两种抗体有助于阻止HIV(艾滋病病毒)通过粘膜传播。乳汁样本来自非洲马拉维感染HIV的哺乳期妇女。研究人员说,这表明母乳中B细胞能产生中和性抗体抑制HIV病毒。相关论文发表在近日的《公共科学图书馆-综合》上。     

双单克隆抗体共同作用抵销HIV

研究人员偶然发现了抵销人免疫缺失病毒(HIV)的方法,其效率比用单一抗体高100倍。他们发现,两种作用于病毒表面不同表位的单克隆抗体(MAb)协同作用抑制HIV。目前,从事该研究的科学家正在寻找商业伙伴,以便扩大生产这两种MAb,并进行临床前和后继临床研究。该项目的离体研究在Public Health Research Institute(PHRI) (New York,NY)和Memorial Sloan-Kettering Cancer Center(SKCC)(New York,NY)进行。研究者在设计实验时发现,有两种抗体结合病毒的糖蛋白120(gp120)分子,但结合部位不同,一种是4117C,结合gp120