新建疫苗车间洁净度确认及环境监测微生物数据库的建立

目的对新建疫苗生产车间环境微生物检测方法及车间洁净度进行确认,建立环境监测微生物数据库。方法使用连续3批次的胰酪大豆胨琼脂(Tryptose soya agar,TSA)培养皿和TSA(L-80)接触碟对环境微生物检测方法进行确认;对新建车间连续进行3次静态和3次动态检测,包括悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物检测;对微生物检测所获得的菌株进行鉴定。结果确认了环境微生物检测方法的有效性,新建车间洁净度达到了设计要求,建立了环境监测微生物数据库,主要菌型为里拉/藤黄微球菌、沃氏葡萄球菌、人葡萄球菌、科氏葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、表皮葡萄球菌。结论新建车间洁净度符合标准,环境监测微生物数据库的建立有助于污染源的调查分析,对无菌药品生产过程污染的有效控制提供了必要的技术保障和检测手段。     

实验动物运输盒微生物指标检测分析

目的检测SPF金黄地鼠在从204车间转运到隔离器车间时微生物污染情况,同时对不同运输盒进行比较,筛选合格的实验动物运输盒。方法用TSA培养皿模拟实验动物运输过程,比较沉降菌检测结果。结果大小IVC笼盒内环境微生物能控制在14 cfu/4 h以下,而且菌落形态与SPF饲养间环境内的沉降菌基本一致,符合标准要求;甲乙普通运输盒内环境微生物却在70 cfu/4 h以上,不符合标准要求。结论 SPF金黄地鼠在从204车间转运到隔离器车间时未受到污染;实验动物转移运输应选择大小IVC笼盒。     

VITEK 2 Compact微生物检测系统在生物制剂无菌环境监测中的应用

目的通过收集生物制剂生产中洁净间环境微生物、微生物限度检测样品,应用全自动微生物检测系统(VITEK 2 Compact)进行监测分析,评价其适用性。方法利用革兰染色法和VITEK 2 Compact系统对4种标准菌株和291个纯菌鉴定样本进行方法学验证;对人员及设备表面微生物、沉降菌及微生物限度样本共313个进行菌型鉴定,确认此系统在生物制剂生产中的应用价值。结果共在收集的313个样本中,共检出微生物268株,其中人员及设备表面微生物18株、沉降菌188株、微生物限度62株。可信度均在93%以上。其中革兰阳性菌:藤黄/里拉微球菌46次,库克菌属35次,葡萄球菌属70次;阴性菌:少动鞘氨醇单胞菌38次,鲁氏不动杆菌7次。结论 VITEK 2 Compact微生物检测系统具有高度特异性、敏感性和重复性,并具有操作简便、检测速度快等优点,可广泛应用于医院及疾控中心,尤其对无菌生产环境中微生物的质控和微生物数据库的建立具有重要意义。     

布鲁菌抗体检测试剂盒稳定性的研究

目的评估布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)的质量稳定性,在产品注册时提交模拟运输条件相关研究资料,即由2～8℃冷链运输条件变更为常温2～30℃(不超过6 d)运输。方法用连续3批次布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)试剂,对其进行模拟运输条件试验,同时进行热加速稳定性、开瓶稳定性以及实时稳定性试验,通过观察外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出量和均一性,考察其试剂盒的稳定性。结果模拟运输试验结果显示,布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)在模拟运输2～30℃不超过8 d时,其外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出量及均一性均符合《中华人民共和国药典》2015年版(三部)的检定标准,试剂盒质量稳定。热加速稳定性结果显示,在36～38℃放置不超过6 d时质量稳定;开瓶稳定性结果显示,开瓶后12周内质量稳定。连续3批次试剂实时稳定性在试剂盒效期后一个月检测结果仍合格。结论布鲁菌抗体检测试剂盒(试管凝集法)具有良好的稳定性,运输条件由2～8℃冷链运输可变为2～30℃不超过6 d的常温运输;在2～8℃试剂盒可保存12个月,开瓶后在12周内质量稳定,产品于2018年1月份在国家药品监督管理局完成注册,运输条件的变更获得批准。     

长江三峡大坝两侧水体中氨氧化微生物种群结构分析

【目的】研究自然界中的氨氧化微生物对于理解全球氮元素循环至关重要,而人们对于人工坝体对氨氧化微生物种群生态的影响还知之甚少。本工作旨在分析三峡大坝两侧水体中浮游和附着在颗粒表面的氨氧化微生物种群构成的多样性,并试图分析其潜在的控制因素。【方法】在靠近三峡坝体的上游水体及下游水体中各选取1个取样点,在取样点现场测量水体理化参数并收集生物量,采用氨氧化功能基因的mRNA逆转录产物构建克隆文库等技术分析样品中氨氧化微生物种群的多样性。【结果】坝下水体中浊度、溶氧量和氧化还原电位略高于坝上水体。坝体两侧的氨氧化菌以氨氧化古菌(AOA)为主,没有检测到氨氧化细菌(AOB)。坝体两侧水体不同存在方式的AOA组群存在差异:坝上水体中附着在颗粒表面的AOA多样性较高,而坝下水体中浮游的AOA多样性更高;坝上水体中附着在颗粒表面与浮游的AOA种群间的差异明显大于坝下水体。【结论】三峡大坝对坝体两侧水体中AOA种群主体构成的影响不是很明显,但三峡大坝产生的水动力条件改变影响了坝体两侧水体中浮游和附着在颗粒表面的AOA组群分布。     

罗氏沼虾育苗期浮游细菌群落演替模式、驱动因素及其生物标志物

为了探究罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)育苗期浮游细菌群落的时间动态和组装机制,对3个苗种厂的全育苗周期进行持续追踪,利用16S rRNA扩增子测序评估了罗氏沼虾幼苗发育过程中浮游细菌群落的动态演替、环境驱动因素、微生物标志物和共现网络。细菌群落的α-多样性在育苗期呈U型分布规律,群落相似性遵循时间衰减模式,群落周转率为0.011。随着虾苗的发育,微杆菌科(Microbacteriaceae)(放线菌门:Actinobacteria)和冷形菌科(Cryomorphaceae)(拟杆菌门:Bacteroidetes)的相对丰度显著增加(P<0.05),而拟杆菌门中的黄杆菌科(Flavobacteriaceae)和藏红花黄色线菌科(Crocinitomicaceae)的比重下降。pH是影响浮游细菌群落多样性和组成的最主要的环境驱动因素。利用随机森林分析,鉴定了12个幼苗发育相关的微生物标志物,其中伯克氏菌科(Burkholderiaceae)和圆杆菌科(Cyclobacteriaceae)分别是育苗早期(1—2d)和中期(8—10d)的指示性类群,而腐螺...     

真空干燥球孢白僵菌纯孢粉的活孢率、毒力与贮存期

采用真空冷冻干燥法 (冻干 )和真空室温干燥法 (抽干 )对球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)原菌粉进行了干燥工艺的比较。在固体产孢基质上生产的新鲜纯孢粉 (原菌粉 )含水量达 5 8 65 % ,经 36h冻干或抽干 ,孢子粉的含水量分别降至 3 97%和 4 2 6% ,含孢量分别为 1 2 9× 1 0 1 1 孢子 /g和 1 2 5× 1 0 1 1 孢子 /g ,活孢率分别为 99 0 %和 97 9%。冻干粉和抽干粉之间的活孢率无显著差异 ,但萌发速度不同。原菌粉、抽干粉及冻干粉对桃蚜(Myzuspersicae)在接种后第 7d的LC50 分别为 1 1 5 ,5 89和 2 95× 1 0 4 个孢子 /mL ;在 1 0 6 个孢子 /mL的剂量下对桃蚜的LT50 分别为 3 6d、 4 4d和 3 9d。从生产成本低得多 ,抽干法比冻干法在白僵菌纯孢粉的生产中更有应用前景 ,尽管冻干粉的质量略优于抽干粉。在4℃和 2 0℃下贮存冻干粉并进行为期一年的孢子萌发率和毒力检测。结果显示 ,冻干粉在2 0℃下贮存至 2 5 5d时完全失活而丧失染虫能力 ,而在 4℃下贮存一年后的活孢率仍达90 2 % ,LT50 仅从初始的 3 9d延长至 4 7d。这说明仅通过降低含水量以延长白僵菌孢子粉在常温下的贮存期仍是不可能的。     

通过加速贮存试验估算u-PA产品在不同温度时的贮存寿命

通过在 6 0℃、70℃、80℃的加速贮存试验 (MIS)观察了 u- PA冻干产品的热稳定性 ,并对其活性的热降解速度和不同温度时贮存寿命进行了估算。在 3 7℃ ,2 5℃ ,4℃ ,0℃贮存时 ,活性单位损失 5 0 %所需的时间为 1 73 d、2 .78a,70 .8a,1 1 8a:活性单位损失 1 0 %需的时间分别为 2 0 d、1 0 0 d、7.6 4 a、1 1 a。     

菜用大豆种子活力与激素关系的初步研究

菜用大豆(Glycine max)品种“六月拔”种子在不同条件下贮藏6个月后分别成为高活力种子(4℃,硅胶干燥贮藏)、中活力种子(自然干燥种子,聚乙烯袋密封贮藏)、低活力种子(自然条件下布袋贮藏)及无活力种子(30℃,90％RH),发芽率分别为90％、50％、30％以上及0。发芽试验方法:取30粒种子置于铺有2层滤纸的15cm培养皿中,在25℃暗中进行发芽,重复3次,2 d计算发芽势,3 d计算发芽率。外     

三峡库区支流蓝藻水华对浮游细菌群落组成的影响

为探究蓝藻水华生消过程对浮游细菌群落组成的影响, 对三峡库区小江支流进行了采样检测, 结果表明小江采样点的水华优势蓝藻主要为水华鱼腥藻和铜绿微囊藻, 水华中期藻细胞密度分别达6.22109和8.77108个/L, 占总生物量的67%和26%。水华中、末期, 浮游细菌群落变化显著。其中, 水华中期主要以玫瑰单胞菌(Roseomona)等属细菌为主, 水华末期则以芽孢杆菌(Bacillus)等属细菌为优势, 且变形菌门(Proteobacteria)及放线菌门(Actinobacteria)细菌相对丰度明显增加, 暗示了细菌群落组成与库区支流蓝藻水华生消变化可能具有相关性。     

基于高通量测序的传统甜面酱自然发酵过程中的微生物群落结构及其动态演替

【背景】传统自然发酵的甜面酱滋味鲜美、风味独特,但目前尚没有采用高通量测序技术研究其发酵过程中微生物多样性的报道。【目的】解析传统甜面酱自然发酵过程中微生物的群落结构及其动态演替规律。【方法】采用高通量测序技术对传统甜面酱自然发酵过程中的微生物多样性进行研究。【结果】共检出100个真菌菌属和432个细菌菌属,前发酵阶段和后发酵0-90 d的优势真菌为曲霉属(Aspergillus,≥76.96%);后发酵120–180 d的优势真菌为接合酵母属(Zygosaccharomyces,≥85.42%)。芽胞杆菌属(Bacillus)在整个发酵阶段一直是最主要的优势细菌(其中前发酵43 h时占98.07%)。曲样和酱醪中的优势细菌菌属还有葡萄球菌属(Staphylococcus)、雷尔氏菌属(Ralstonia)、泛菌属(Pantoea)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia)、片球菌属(Pediococcus)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、霍氏真杆菌属(Faecalibacterium)、考克式菌属(Kocuria)和乳酸菌属(Lactobacillus)等。【结论】确定了传统甜面酱自然发酵过程中不同时期的优势菌群,为研究微生物对传统甜面酱风味形成的影响提供了理论依据。     

一株高效表面活性剂产生菌的筛选及其活性产物的结构与性质

采用血平板法结合表面张力法从大庆油田高台子低渗透油藏采出水中筛选出一株高效表面活性剂产生菌,编号为DY-9.16S rDNA序列同源性比对结果显示,DY-9与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的序列相似性达99％.在45℃、180 r·min-1振荡培养条件下,DY-9在20 g·L-1糖蜜为碳源的培养基中生长良好,24h内将发酵液的表面张力从初始的69.3 mN·m-1降低至26.5 mN·m-1.48 h发酵液中表面活性剂粗品的产量达0.48 g·L-1,其临界胶束浓度为28 mg·L-1.菌株产生的表面活性剂在高温(120℃,1h)、高盐(12％ NaCl)及较宽的pH(2～12)条件下保持稳定,溶液的表面张力低于30 mN·m-1.经傅里叶变换红外光谱(IF-TR)和高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)分析,菌株DY-9的表面活性产物为环状脂肽类表面活性剂.     

三种源地益智种子贮藏与萌发特性

利用0.4% 2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定种子活力,研究广东、广西、海南三地栽培益智(Alpinia oxyphylla)种子的贮藏特性与萌发特性。结果表明,低温保湿条件有利于益智种子贮存,短期贮存可达150 d。益智种子发芽时间较短,发芽相对集中的最适条件是温度30 ℃、500 mg·L-1 GA3浸泡24 h;三个种源地的种子发芽率为88%～90%,不同种源地之间的种子萌发率没有显著差异。     

低温下贮藏的芍药切花瓶插寿命和几种生理生化特性变化

芍药(Paeonia lactiflora Pall)品种白色"雪峰"和紫红色"桃花飞雪"采自山东菏泽牡丹研究所生产基地.早晨7:00采切花蕾发育基本一致的芍药花枝200支,花枝长45 cm,1 h内运回实验室,迅速放入流动水中清洗花蕾,洗去花蕾表面的蜜液及污物,然后在杀菌液(1 000 mg·L-1甲基托布津)中速沾后,散开平放于报纸上避光晾干.切花晾干后,整理分级,在水中斜切基部,保留2片复叶,再插入4 mmol·L-1硫代硫酸银溶液中10 min,然后用吸水纸包裹花头,10支为1束,封于聚乙烯塑料袋中,于2℃下贮藏30、60、90、120 d后进行水插试验.     

油田含聚合物污水微生物处理初步研究

对油田日益增多的并且对环境造成潜在危害的而现有污水处理工艺难于处理的含聚合物污水进行微生物处理初步研究。结果表明,从油田污水污泥中分离得到的七株聚丙烯酰胺(PAM)降解菌在合适的营养条件下协同作用,对大港油田的含PAM的污水具有较好的处理效果。经过3d的处理,微生物菌群将补充了磷和氮的污水的COD降低了87.7%;经过18d的处理,微生物菌群将补充了磷的污水的COD由13499mg.L-1降低为283 mg.L-1,降低幅度达到了97.9%。因而这7株PAM降解菌对含PAM污水处理具有很好的应用前景。     

打孔法测定抗生素的效价

经典的抗生素效价测定常用管碟法,即将已知浓度标准抗生素溶液与未知浓度的样品溶液分别加到一标准的不锈钢小管(即牛津杯1中．在含有敏感试验菌的琼脂表面进行扩散渗透．比较两者对被试菌的抑制作用．测量出抑菌圈的大小．以计算抗生素的浓度：但该法在操作过程中有以下缺点：11试验中需要较多的无菌牛津杯和特制的培养皿陶瓦盖(1组实验需要80～100个牛津杯)：2)整个的实验操作均要非常小心,在手拿,挪动,放置培养皿时均要拿平．不能有半点倾斜．否则易造成牛津杯在琼脂平板表面滑动,使抑菌圈不圆,导致测定结果不准确。     

60Co-γ射线辐照人体胎盘羊膜保鲜研究及应用

新鲜人体胎盘羊膜是一种新型的生物敷料.具有来源广泛、成本低,贮存使用方便,对烧伤创面有良好的保护作用,促进创面及早封闭、愈合等优点.本文对离体8小时之内的鲜人体胎盘羊膜辐照灭菌、保鲜方法及临床应用进行了研究.供试样品经清洗、灭菌、脱脂、脱水等预处理后,制备成15×10cm2的羊膜,分装于尼龙-聚乙烯复合袋中,抽真空封闭包装待辐照.辐照处理由黑龙江省农科院原子能利用研究所具有微机自动控制及旋转辐照台的60Co-γ射线辐照10-14kGy后,微生物检测仍为阳性,达到16kGy吸收剂量以上时,微生物检测为阴性.常温(平均15℃)条件下贮存180天,0-14kGy处理组微生物检测阳性,并发生不同程度的胀袋、变色.16-24kGy处理组虽然微生物检测为阴性,但颜色发生褐变并出现异味而失去应用价值.低温(平均5℃)避光条件下贮存180天,16-24kGy处理组微生物检测为阴性,颜色、气味与新鲜对照样品无显著性差异.经哈尔滨医科大学临床应用16例病人,26个烧伤创面的覆盖试验,保鲜的人体胎盘羊膜止痛率100%,创面渗出明显减少,防止了创面的枯干及病原微生物的二次污染,使"间生态组织"迅速恢复生机而避免发生坏死,创面愈合后表面光滑,无明显瘢痕增生.     

亚热带米槠天然林土壤氨氧化微生物对模拟氮沉降的响应

我国亚热带地区是全球氮沉降的热点区域。氮沉降会影响氨氧化微生物的丰度和群落结构,进而改变土壤微生物驱动的养分循环。目前对新近发现的完全氨氧化菌认识不足,极大地制约了对森林土壤氨氧化微生物响应氮沉降的整体认识。本研究以福建省三明市辛口镇格氏栲自然保护区长期模拟氮沉降处理土壤为研究对象,利用实时定量PCR方法,研究氨氧化微生物(包括氨氧化细菌AOB、氨氧化古菌AOA和完全氨氧化菌comammox Nitrospira),尤其是完全氨氧化菌的amoA基因丰度。模拟氮沉降处理包括:不添加N(CK)、低氮(添加40 kg N·hm^-2·a^-1,LN)和高氮(添加80 kg N·hm^-2·a^-1,HN)。结果表明: 8年的氮添加降低了土壤pH值和有机碳含量,提高了土壤硝态氮含量。供试土壤的AOB丰度低于检测限,无法获得目的片段。高氮处理显著提高了AOA丰度,但对完全氨氧化菌clade A和clade B丰度无显著影响。两种氮添加处理均降低了完全氨氧化菌/AOA值,表明氮添加降低了完全氨氧化菌在亚热带森林土壤氨氧化微生物类群中的相对竞争力。针对完全氨氧化菌clade A和clade B的扩增都存在非特异性产物,表明针对森林土壤的高特异性和覆盖度设计引物的必要性。Clade A和clade B丰度与总氮和铵态氮含量呈显著正相关,clade B丰度还与有机碳含量呈显著正相关。总之,模拟氮沉降提高了AOA在亚热带米槠天然林土壤硝化过程中的相对重要性,这些发现可为该地区应对全球变化和氮沉降的风险评估提供理论依据。     

阪崎肠杆菌能力验证样品均匀性和稳定性的研究

目的制备出以脱脂奶粉为基质的均匀性好、稳定性强的阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)能力验证样品。方法研究奶粉基质的粒度、奶粉和菌粉的混合比例,得到阪崎肠杆菌能力验证样品的最佳均匀性条件;研究包装形式及贮存温度对样品稳定性的影响,得到阪崎肠杆菌能力验证样品的最佳稳定性条件。结果要保证样品足够均匀,奶粉最佳粒径范围为120μmD180μm,1 g菌粉最多与300 g奶粉进行混合;贮存温度对样品稳定性有较大影响,高温明显降低样品稳定性;真空包装可以显著提高样品稳定性。结论以奶粉为基质的阪崎肠杆菌能力验证样品的制备能够更准确地考查乳品微生物检验人员的检测水平,为国内微生物能力验证水平的提高奠定了基础。     

微生物铁呼吸机制研究进展

铁呼吸是厌氧环境中普遍存在的一种微生物代谢形式,多种古生菌和细菌都能进行铁呼吸.Fe(Ⅲ)的地球化学丰度比较高,为Fe(Ⅲ)还原菌提供了充足的电子受体,但自然中Fe(Ⅲ)多以不溶形式存在,使电子传递受阻.本文介绍了Fe(Ⅲ)还原菌的多样性,总结了4种铁呼吸机制:直接接触机制、螯合促溶机制、电子穿梭机制、纳米导线辅助机制,并对铁呼吸机制未来的研究方向进行了展望.