顺式CA1P对肿瘤细胞增殖和血管生成的影响

目的:研究顺式考布他汀二磷酸四钠(cis-CA1P)对体外培养肿瘤细胞增殖的作用,以及对鸡胚尿囊膜血管和离体培养的大鼠主动脉环血管生成的影响。方法:通过测定MTT评价药物对体外培养肿瘤细胞的作用;建立培养鸡胚尿囊膜模型、离体培养大鼠动脉环,研究顺式CA1P对血管生成的影响。结果:顺式CA1P对MGC-803人胃癌细胞、U937人急性髓系白血病细胞、A375人黑色素瘤细胞、HCT116人结肠癌细胞、MDA-MB-231人乳腺癌细胞、K562人白血病细胞具有显著的生长抑制作用,且呈明显的浓度依赖性;顺式CA1P呈剂量依赖性抑制鸡胚尿囊膜血管及离体培养的大鼠主动脉环血管生成,并可以抑制血管内皮细胞的运动及血管网络状结构形成。结论:顺式CA1P具有抑制肿瘤细胞增殖和抗血管生成的作用。     

鸡胚内抗氧化物质的分布与变化

生物体内存在多种内源性抗氧化物质,在生命过程中发挥着基本的防御功能,是人们十分关注的研究领域。本文综述了近年来鸡胚内抗氧化物质的形成与来源等研究成果,分析了鸡胚孵育过程中维生素(A、C、E)、类胡萝卜素、硒、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶等主要抗氧化物质的分布与变化,及内源性抗氧化系统的形成,旨在为今后的研究提供有益的科学依据。     

“观察鸡卵的结构和鸡胚的发育”的实验教学

对"观察鸡卵的结构和鸡胚的发育"实验在实验材料的选择、实验装置的改进等方面进行优化。通过实验观察鸡胚的完整发育过程,有助于理解鸡卵的结构和鸡胚的发育,帮助学生构建动物个体发育的概念。     

探索不同发育时期鸡胚营养状况的变化

鸡胚是营养价值很高的食品,受精鸡卵在胚胎发育过程中能产生多种氨基酸、激素、酶免疫球蛋白、及多种RNA等生物活性物质.以鸡胚为营养添加剂,能促进生物体的生长,增强机体抗病能力.本实验探索不同发育时期的鸡胚营养成份对尼罗罗非鱼的发育生长的影响,并研究鸡胚在各时期发育过程中的营养物质变化状况.这能使我们找出鸡胚营养物质的最盛时期,便于开发利用,从而获得较好的经济效益和社会效益.     

Cdk2ap1在不同性别鸡胚中的表达

为研究通过抑制消减杂交筛选出的cdk2ap1基因在鸡胚胎发育过程中的表达, 设计cdk2ap1引物并通过 RT-PCR扩增cdk2ap1基因片段, 构建cdk2ap1/pGEM-T重组质粒。以构建的重组质粒为模板, 使用Sp6和T7 RNA聚合酶合成地高辛(dig )标记的正、反义RNA探针, 借助胚胎整体原位杂交技术研究了cdk2ap1在雌雄鸡胚中的表达。结果表明cdk2ap1基因在4.0 d两性胚胎的脑间质、菱脑、听囊、脊神经管、前肢等部位均有表达, 且在雄性鸡胚中的表达量高于雌性; 在雄性鸡胚的生殖脊、后肢部位中该基因有表达但在雌性胚胎对应部位却基本没有表达。鉴于该基因在雌雄鸡胚中的差异表达, 推测cdk2ap1基因在鸡胚性别分化及性腺发育过程中起一定调节作用。     

化学合成siRNA抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖

为研究RNA干涉对H5N1亚型禽流感病毒的增殖抑制作用,针对H5N1亚型禽流感病毒的NP和PA基因,设计4对siRNA干涉序列,并将其转染到鸡胚成纤维细胞,6h后接种H5N1亚型禽流感病毒液,在病毒感染后的16～56h内测定细胞上清中的病毒血凝价及观察细胞病变,并在病毒感染36h后检测NP、PA、HA和β-actin基因的mRNA水平。结果显示4对siRNA均能不同程度地抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖,但以PA为靶基因设计的一对干涉序列效果最优;实验还证实随着时间的延长,干涉效应逐渐减弱。本实验为研究RNA干涉技术防控禽流感提供了依据。     

鸡卵与鸡胚生物电位的观察

本实验记录到鸡卵和鸡胚四种直流电值,包括:正快,正慢,负快,负慢电位。电位出现存在活动期和静息期。降温可使电位数量减少或消失,随复温逐渐出现并增大。据微电报测定结果提示:直流生物电位的产生可能是酶促反应所导致的电位变化。     

利用鸡胚浸出液制作细菌培养基的研究

利用鸡胚浸出液制作的肉汤和琼脂平板培养基均能适合副鸡嗜血杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌的生长,用平板计数法、麦氏比浊法和离心称重法分别对副鸡嗜血杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌的培养产物进行含菌量、菌泥湿重测定,结果表明,鸡胚浸出济培养基培养的沙门氏菌产量是普通培养基培养的沙门氏菌产量的20倍以上,培养的副鸡嗜血杆菌产量是普通培养的3倍以上,而鸡胚浸出液培养基与普通培养基对大肠杆菌的培养数量则无明显差异。     

Sonic hedgehog在鸡胚法氏囊发育过程中的表达研究

Sonic hedgehog(Shh)是Hedgehog(Hh)家族中的一员,在胚胎发育和器官形成过程中发挥重要作用.法氏囊是鸟类所特有的中枢免疫器官,在机体的免疫防御方面发挥重要作用.利用切片原位杂交的方法探究Shh基因在鸡胚法氏囊发育过程中的表达模式,检测发现Shh基因主要在鸡胚法氏囊的囊下上皮细胞、血管周围上皮细胞以及网状细胞中表达.     

不同饲养层对鸡胚胎干细胞培养效果的影响

目的:为探索鸡胚胎干细胞培养的优化条件,比较不同饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养的效果。方法:用传至第2代的鸡胚成纤维细胞与鸭胚成纤维细胞,经丝裂霉素处理后制作饲养层,比较这2种饲养层以及不用饲养层对鸡胚胎干细胞离体培养效果的影响。结果:在以鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞作为饲养层的培养体系中,鸡胚胎干细胞均可保持良好的生长状态,而且2种饲养层对鸡胚胎干细胞克隆形成的影响差异不显著(P0.05)。结论:鸡胚成纤维细胞和鸭胚成纤维细胞均可作为较好的饲养层细胞用于鸡胚胎干细胞的离体培养。     

鸡胚发育后期心电图的无损测定及心率变化

目的：测量鸣胚发育后期心电图,测定鸡胚发育后期心率及其变化.方法：利用壳膜外电极测量鸡胚心电图,根据RR间期计算鸡胚心率。结果：引出了具有较为清晰Q波、R波（振幅在8—20μV波动）、S波的鸡胚心电图。鸡胚的QRs间期在发育后期无明显变化,心率在D14～D20早期的心率变化较小,在D20后期和D21显著增加（P〈0．01）。结论：建立了壳膜外记录鸡胚心电图的方法,鸡胚在啄壳期心率显著增加.     

重组人纤溶酶原Kringle1-3的生物学活性鉴定

目的：检测重组人纤溶酶原Kringle1-3（K1-3）的生物学活性。方法：用含重组人纤溶酶原K1-3基因的表达载体pET21a-Angio（K1-3）转化表达宿主菌大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达,表达产物经溶解、复性和纯化后,进行SDS-PAGE,计算其相对分子质量;用BCA法测蛋白浓度,用细胞抑制实验（MTT法）和鸡胚绒毛膜尿囊膜（CAM）实验鉴定纯化产物对血管内皮细胞增殖和血管生成的抑制效果。结果：表达产物的相对分子质量为38000,与预期值一致;细胞抑制实验和CAM实验结果表明表达产物具有特异抑制血管内皮细胞增殖、血管生成的功能。结论：所纯化的重组人纤溶酶原K1-3具有抑制血管内皮细胞的生物学活性,为该蛋白在病理性血管疾病等方面的应用研究提供了材料。     

用器官培养法研究抗连接蛋白单克隆抗体对鸡胚水晶体发育的影响

用器官培养技术研究了抗连接蛋白单克隆抗体NC6对鸡胚水晶体发育的影响,同时进行了原位眼内注射NC6的实验。水晶体大小的统计分析结果指出,离体器官培养结果与原位眼内注射结果完全一致:实验组水晶体均明显地大于对照组;这种差异显著性又与培养时间正相关。但正常水晶体左右侧之间无显著的大小差异。这些结果表明,NC6确有促使水晶体增大的作用。以前的工作已经证明,NC6能阻断间隙连接的形成。因此,作者推测,可能是NC6阻断了水晶体纤维细胞中的间隙连接形成,造成了细胞分裂的失控,从而导致水晶体的增大。本文结果进一步证实了间隙连接在生长控制中起重要作用。     

H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究

目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理。方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRI酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA。质粒转染293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测。将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变。结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体。荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达。HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平。结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关。     

脉冲电场对鸡胚脑细胞cAMP含量的影响

脉冲电场对鸡胚脑细胞ｃＡＭＰ含量的影响沈海红,孙彤,张锦珠（中国科学院生物物理研究所北京１００１０１）脉冲电场（ＰｕｌｓｅｄＥｌｅｄｒｉｃｆｉｅｌｄ）引起细胞膜电位的改变。引起细胞膜通透性的变化,生物工程中外源基因的导人和细胞融合皆用脉冲电场。脉冲电...     

UCA1及其剪接变异体与膀胱癌

尿路上皮癌胚抗原1 (urothelial carcinoma antigen 1,UCA1) 在人膀胱移行细胞癌细胞系 BLZ-211 中包含3个剪接变异体：UCA1、UCA1a 和 UCA1b. 我们以往的研究表明, UCA1、UCA1a 均属于长非编码 RNA (long non-coding RNA,lncRNA),它们之间具有一段长 1 265 bp 的共同序列. 组织表达谱分析表明,它们具有相似的组织表达模式,提示它们可能与胚胎发育和膀胱癌发生发展密切相关. 异位表达UCA1基因、UCA1a 基因均可以促进人膀胱癌细胞生长,增强细胞的恶性表型,使其体外增殖、迁移、侵袭、抗凋亡能力明显增加,裸鼠致瘤能力明显增强,表明它们在膀胱癌的发生发展中均起到了重要的促进作用. 本文将从基因结构、组织表达谱及机制功能等不同角度系统地阐述UCA1基因及其剪接变异体在膀胱癌中的研究现状与进展.     

鸡传染性支气管炎中国地方分离毒株LX4mRNA1ORF1的遗传变异特征

应用RT-PCR方法扩增了冠状病毒鸡传染性支气管炎中国分离毒株LX4的mRNA1 ORF1,并将其进行了克隆、序列测定和分析.表明LX4mRNA1基因包含2个ORF,其中ORF1a由11 916个核苷酸组成,编码一条3 971个氨基酸残基组成的多肽.ORF1b由7 950个核苷酸组成,编码2 649个氨基酸残基组成的多肽.与美国Beaudette株对应的ORF1a核苷酸及推导的氨基酸序列同源性均为85%,与对应的ORF1b的同源性分别为89%和95%.二者ORF1a和ORF1b重叠区推测的"滑脱序列"(slippery sequence)核苷酸序列一致,"假结"(pseudoknot)基本结构相似.不同之处在于"假结"第2环中LX4的第7位为A,而Beaudette株在该位置为G.与Beaudette株比较,LX4 ORF1a核苷酸变异最频繁的区域集中在第2 656～3 098位碱基处,且在该区域有60个碱基的插入,导致推导的氨基酸序列插入了20个氨基酸残基.LX4 ORF1b序列缺失9个核苷酸,主要集中在第5 168～5 181位之间,导致对应的氨基酸缺失3个.但这些差异是否与病毒的生物学特性有关不明.     

短发夹结构RNA干扰新城疫病毒的增殖

 以新城疫病毒（NDV）NP基因为标靶,构建3个细胞内表达发夹样结构小干扰RNA（shRNA）的质粒载体,在鸡胚成纤维细胞（CEF）和鸡胚上进行了RNAi试验,筛选出一个有效抑制病毒复制的小分子ndv1.用阳离子脂质体转染试剂Silent-fect 将ndv1转染CEF,以不相关shRNA质粒载体HK为阴性对照,4 h后接种NDV,与对照相比,干涉组在病毒感染后3 h NP基因的表达量降低2.3倍,6 h 降低21.1倍,9 h降低9.8倍;ndv1能在48 h内完全阻断NDV在CEF中的增殖,延缓病变出现时间,减轻病变程度.将Silent-fect-ndv1混合物与NDV同时注入10日龄SPF鸡胚绒毛尿囊腔,能使10⁵ ELD₅₀NDV感染后17 h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少94.4%,使10⁶ ELD₅₀NDV感染后17　h鸡胚尿囊液中病毒增殖量减少62.5%.实验结果证实,在CEF中存在RNAi机制,抑制NDV NP基因的表达能有效阻断该病毒增殖,说明NP基因在NDV复制过程中起重要作用.实验结果为进一步利用RNAi技术在CEF和鸡胚中研究病毒基因组功能及筛选抗病毒小分子奠定了基础.     

昆明白小鼠1细胞胚胎体外培养系统的研究

研究发现在有或者没有磷酸盐的条件下,葡萄糖均抑制昆明白小鼠ｌ－４细胞期胚胎的体外发 育。在不含葡萄糖和磷酸盐的ＨＥＣＭ－ｌ中,桑椹率为４０．０５％（７４／１６８）,而对照Ｇ－ＨＥＣＭ－１仅为 ８．１４％（７／８６）;不含葡萄糖含有磷酸盐的ＣＺＢ中,桑椹率为６７．１１％（９３／１５２）,而对照ＴＡＬＰ仅 ６· ６７％（６／９０）。用不含葡萄糖而含有１． ０ｍｍｏ１／Ｌ谷氨酸肢和０． １１ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ的ＣＺＢ液,与兔输 卵管上皮单层培养细胞（ＲＯＥＣ）协同培养小鼠１细胞胚,７３．３３％（１１０／１５０）胚胎发育至桑椹胚, 但没有观察到囊胚形成、用上述ＣＺＨＲＯＥＣ系统培养小鼠１细胞胚４８小时（３－４细胞）,再移入 ＴＣＭ１９９＋１０％ＦＣＳ＋ＲＯＥＣ系统,有７６．７４％（６７／８６）胚胎发育至桑椹胚,９６／小时后,４０．７０％ （３５／８６）发育至囊胚。