微量蛋白质的定性检测

微量蛋白质的检测,是医学及生物学实验室经常遇到又最棘手的问题之一。我们在应用铜试剂(二乙基二硫代氨基甲酸)间接测定微量蛋白质时,曾利用三氯甲烷来抽提有色的铜试剂-铜络合物,以加深色度。实验过程中,样品中蛋白浓度越高,三氯甲烷相颜色越深,同时还观察到三氯甲烷相被分     

桐柏野大豆种子粗蛋白质测定及方法探讨

野大豆因其高蛋白、低油脂含量等特点,越来越引起人们的关注。为了快速精确测定野大豆粗蛋白质含量,采用半微量凯氏法和消化—分光光度法对采自桐柏的8个野大豆样品进行蛋白质含量的测定,并分析比较两种测定方法。试验结果显示,采用消化—分光光度法测定的野大豆的蛋白质含量与经典的半微量凯氏法测定结果一致。半微量凯氏法适用范围广,测定结果精确,而消化—分光光度法相对于半微量凯氏法简化了试验操作,缩短了分析时间,又没有特殊的仪器设备和试剂要求,更便于普及应用。     

柠条种子营养成分测定与分析

报道了柠条种子内脂肪酸、蛋白质、氨基酸的组成成分及其含量,同时也测定了微量矿质元素Ｃｕ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｍｏ等、单宁、Ｖｃ。并对柠条种子的深加工利用做了初步探讨,证明柠条种子是具有开发潜力的生物资源。     

蛋白质溶液可逆热变性及其与肽链构象关系的研究

用微量扫描量热技术及远紫外圆二色谱研究了蛋白质水溶液的浓度和ｐＨ对蛋白质热变性可逆性的影响及其与在热变性时肽链构象的关系。结果表明,当蛋白质溶液的浓度为０．０４％、ｐＨ为３时可实现完全可逆的热变性,然而蛋白质溶液宏观上的热变性并不意味着微观上蛋白质分子肽链的完全伸展。     

测定酶活性的电化学方法及其影响因素

作者曾用固定化细胞技术分离了人红细胞膜表面蛋白质。为了能快速、准确、自动连续地测定固定化红细胞膜中乙酰胆碱酯酶(AchE)等各酶的活性,设计组装了一架酶活性电化学测定装置。本文报道试用该装置作测定胆碱酯酶(ChE)纯品的实验结果。早在1962年,Kramer等人就报道了一种半微量测定AchE,ChE,以及各种硫代胆碱酯的电化学方法。以后又将该仪器应用于测定高毒性有机磷化物,葡萄糖氧化酶、黄嘌呤氧化酶,以及过氧化物酶与过氧化氢酶类。并设计了能酶反应连续分析的装置。在此基     

NaCl溶液体系溶菌酶结晶相图的测定

溶液相图测定是研究蛋白质晶体生长的一重要方法。使用微量配液（Ｍｉｃｒｏｂａｔｃｈ）自动化结晶技术，对鸡蛋清溶菌酶－ＮａＣｌ溶液体系的相图进行了较精细的测定，获得该体系的精细相图。该结果反映了蛋白质结晶相图的一般分布规律，并揭示了一些细节特点。实验还表明，微量配液法自动化结晶技术便于这类相图测定，而后者又可提供优化蛋白质结晶条件的有用信息。     

2002年生物奥赛冬令营实验试题（续）

(二)生物化学部分一、蛋白质含量测定蛋白质含量测定有许多方法,考马斯亮蓝(G-250)比色测定是最灵敏的方法之一。考马斯亮蓝可与蛋白质通过氢键结合生成复合物,结合符合比尔定律。结合前颜料为红色,结合后为蓝色,最大光吸收由465nm转变成595nm。通过测定595nm处最大光吸收的增加,可知结合蛋白质的量。蛋白质和染料结合是一个快速的过程,两分钟内即可完成,并可稳定1小时,测定范围在10—100μg/ml蛋白质之间为线性范围,去污剂有颜色干扰,可影响比色结果。本实验是利用考马斯亮蓝与不同量蛋白质的标准曲线来目测未知蛋白质溶液的蛋白质含量,并…     

染料结合法测定荞麦种子蛋白质含量的研究

以考马斯亮蓝G250为染料,结合经典的凯氏定氮法测定结果,对影响染料结合法测定蛋白质含量的振荡时间、温度、考马斯亮蓝溶液浓度等因素进行了研究,并分析了由考马斯亮蓝染料和蛋白质结合后染料结合量(OD值差)与凯氏法测得的蛋白质百分含量之间的相关性。结果表明:测定的适宜条件是:温度15℃,处理时间50min,考马斯亮蓝溶液的浓度是0.06mg/mL。此条件形成的络合物较稳定,重复性较好,并且所测的染料结合量与凯氏定氮法测得的蛋白质含量间呈极显著的一元线性回归和相关关系。栽培甜荞和栽培苦荞的回归方程分别为:y=15.364x+3.865和y=10.769x+6.287,这两个回归方程差异显著,不能合并,分别适合于快速估计甜荞和苦荞种子的蛋白质含量。     

精浆酸性磷酸酶微量检测法的研究

世界卫生组织（ＷＨＯ）１９９２推荐的精浆酸性磷酸酶（ＡＣＰ）测定的方法国内尚未见报道。本文在ＷＨＯ方法基础上结合微量测定,即用９６孔板替代比色杯,试液总量减少至３００－５５０ｕｌ;用酶联免疫检测仪替代分光光度计,可连续比色,直接打印结果,９６人份样品比色仅需５分钟。该法操作简便、快速、样品量、试剂量少、重复性、直线线性好,适合实验室的精液分析。     

用碱水解的方法测定蛋白质的消光系数

在蛋白质结构与功能的研究中,有时蛋白质溶液的浓度是一个重要的参数.紫外吸收法是测定蛋白质溶液浓度最为常用的方法,而已知蛋白质的消光系数是用紫外吸收法准确测定蛋白质溶液浓度的前提条件.在0.1 mol/L NaOH溶液中,蛋白质发生碱性水解,因而蛋白质溶液可以看作是色氨酸和酪氨酸的二元体系.以此为依据,给出了用碱水解的方法测定蛋白质消光系数的方法.这一方法操作步骤简便易行,蛋白质消光系数的计算公式简单明了.用这一碱水解的方法分别测定了几种氨基酸组成不同的蛋白质的消光系数,与文献数据对照,得到了令人满意的结果,测定误差均小于±5％.     

用考玛斯亮兰G—250迅速,灵敏地测定蛋白质浓度

蛋白质浓度测定法是生物化学实验室最常用的方法,目前用得比较多的有双缩脲法、Folin酚法。对混有核酸的蛋白质则用260nm和280nm的紫外光吸收测定法。如果利用肽键在远紫外区(205 nm附近)的光吸收,受氨基酸组成分的影响较小,则可更精确地测定蛋白质浓度。比较这些方法的优劣时我们发现:双缩脲法灵敏度低;Folin酚法需要较多的试剂,过程比较复杂,不准确;280nm和260nm的光吸收测定法精度不高,对不含核酸的蛋白质的测定有局限性;远紫外光吸收测定精度高,但芳香族和蛋白质二级结构如α-螺旋、β     

人血清中游离色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的微量测定——附我国健康成人测定值报告

测定人血清中游离氨基酸、特别是某些特殊氨基酸含量的变化,作为研究蛋白质代谢的指标,在临床医学研究方面已有很多报道。目前从测定生物体液和组织中,个别或某些氨基酸浓度的变化,已能诊断六十余种先天性氨基酸代谢缺陷的疾病,从而指导治疗。如患苯酮尿症的婴儿,血清中游离苯丙氨酸浓度可高出常人数倍,游离酪氨酸浓度则减低,如能在出生后短期内作出诊断并限制食物中苯丙氨酸含量,     

体积排阻液相色谱法质粒的含量测定

首次以体积排阻液相色谱法进行质粒提取液浓度的测定研究,通过纯质粒溶液在260 nm处的紫外吸峰面积与质粒浓度之间数据的线性最小二乘拟合,得到了反映质粒浓度和紫外吸收峰峰面积之间关系的标准曲线:Y=2×10~(-5) X,通过验证实验,确定了质粒提取液中不同组分,如核糖核酸,蛋白质等在色谱图中的出峰位置.结合标准曲线测定了自制的质粒提取液的质粒浓度为0.32 mg/mL.该方法方便,快捷,准确.     

瓦松总黄酮的提取及其抑菌效果

目的：提取瓦松总黄酮并对其总黄酮含量进行测定,进一步观察总黄酮的抑菌效果。方法：采用超声法提取瓦松总黄酮,以芦丁为标准品,用紫外分光光度法测总黄酮的含量;并参照NCCLS规范,用微量稀释法来测定总黄酮最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果：测定标准曲线线性相关性良好,R2=0.999 2,线性范围在0.02~0.6 mg/mL。瓦松总黄酮对福氏志贺菌标准株抑菌效果最好,对部分临床分离金黄色葡萄球菌耐甲氧西林株（MRSA）、表皮葡萄球菌标准株、大肠埃希菌及其临床分离株、肺炎克雷伯菌标准株及其临床分离株抑菌效果较好,对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最弱。瓦松水提物抑菌趋势与总黄酮一致性较差,总黄酮及水提物均无明显的MBC。结论：瓦松总黄酮及其水提物对本试验选取的菌株均有一定的抑制作用,且抑制作用较好。黄酮好于水提物,作用机制以抑制为主,而非直接杀菌。瓦松总黄酮具有较好的抑菌效果,在食品开发上有较高研究价值。     

小鼠淋巴细胞转化微量试验方法的研究

本文报导了小鼠淋巴细胞转化的微量试验方法及其最适转化条件。本实验采用微量培养技术及~3H-TdR掺入法,测定了小鼠脾细胞对 PHA、ConA 的转化水平,并探讨了培养液成分,有丝分裂素浓度、~3H-TdR 掺入时间等因素对小鼠脾细胞转化的影响,获得了比较稳定可靠的实验结果。     

低氧对曲霉和假丝酵母体外两性霉素B、伊曲康唑和棘白素药敏试验的影响[英]／Warn PA…／／J Antimicrobial Chemother．

抗真菌药在体外和体内的效果有很大差异,可靠的体外药敏试验在对真菌病的用药是有帮助的。已知许多因素可影响真菌的最低抑菌浓度(MIC)测定,如培养基、菌悬液的浓度、试验方法的选择(多量稀释法或微量稀释法)和培养温度。作者研究了不同氧浓度对真菌体外药敏试验的影响。     

基于IgG检测为模型的玻璃介质定量蛋白质芯片的研制及评价

为研制高通量定量检测的蛋白质芯片,以人血清IgG为研究模型,选择戊二醛基修饰的玻片为载体,蛋白质样品溶解于20%甘油的PBS,由机械手将浓度为0.5g/L人IgG单克隆抗体点样在玻片上,人血清白蛋白为阴性对照,以1%的BSA为封闭液对蛋白质芯片进行封闭,并经相应处理,构建用于定量检测人血清IgG蛋白质芯片.先以不同浓度IgG标准品为待测样品,建立蛋白质芯片方法和ELISA方法的标准曲线,两条标准曲线的R2值分别为0.996和0.994(P<0.01).两种方法的检测人IgG结果有很好的相关性(R2=0.9937,P<0.01),其敏感性均在15.625μg/L.用两种方法分别检测10例人血清IgG,结果显示两种方法的检测的IgG浓度有很好的一致性,以玻片为载体的蛋白质芯片可用于微量生物样品的定量检测.     

快原子轰击质谱技术在异常血红蛋白一级结构分析中的应用

本文报道用快原子轰击(FAB)质谱技术测定血红蛋白(Hb)肽链经胰蛋白酶水解后的几个片段的氨基酸顺序结果。通过解释正离子谱上的碎片峰,确证用FAB质谱测得的氨基酸顺序与已知的完全一致。在此基础上,我们对二例未知结构的异常Hb进行测定,确证一例是Hb G Taipei(α_2β_2~(22Glu→Gly)),另一例是HbG Honolulu(α_2~(30Glu→Gln)β_2)。实验表明,用FAB质谱技术测定蛋白质一级结构具有微量、快速、可靠和操作简便等优点。     

苦荞麦种质资源总黄酮和蛋白质含量的测定与评价

对近几年收集的苦荞麦种质资源进行了总黄酮和蛋白质含量的测定及评价。总黄酮和蛋白质含量测定分别采用三氯化铝比色法和微量凯氏定氮法。结果表明:①总黄酮含量平均2.46%,变异范围1.97%~3.03%;蛋白质含量平均14.3%,变异范围10.9%~20.3%。②不同原产地的材料总黄酮和蛋白质含量存在显著差异,总黄酮含量以来自山西的材料最高,其次依次是湖南、宁夏、贵州、云南材料,最低是四川材料;蛋白质含量的排列次序依次为宁夏、湖南、山西、贵州、云南和四川材料。③相关分析表明总黄酮和蛋白质含量呈极显著正相关,相关系数为0.588。研究认为苦荞麦种质资源的总黄酮和蛋白质含量存在较为丰富的遗传变异并在鉴定评价基础上筛选出一批品质优异的苦荞麦资源。     

鳙鱼ARISTICHTHYS NOBILIS早期发育的一些生物化学上的变化

本实验第一部分对鳙鱼卵及胚胎在不同的发育时期蛋白质合成的速度进行了研究,实验采用微量克氏定氮法,对鳙卵从未受精卵到受精卵、尾芽期和出膜期,共测定了十三个不同的发育时期。实验结果表明了在鱼的不同胚胎发育时期蛋白质合成速度有着明显的差异。 实验的第二部分对鳙鱼胚胎发育过程氨基酸组成和氨基酸含量进行了测定,其结果显示出鳙鱼卵和胚胎的各发育时期氨基酸的组分十分相似,但氨基酸的含量在各个时期是有差异的。