特异性卵黄抗体(IgY)对小鼠大肠杆菌败血症的保护作用

目的:研究特异性IgY对小鼠大肠杆菌败血症的保护作用.方法:以灭活的E.coli O111免疫产蛋母鸡,抗体经水稀释及盐析分离纯化.ELISA法检测大肠杆菌特异性IgY对大肠杆菌及LPS的结合活性.腹腔注射E.coli O111(1011cfu/mL)建立小鼠败血症模型,攻毒剂量为0.1mL/10g体重.小鼠随机分为5组,分别给药保护:空白组(生理盐水)、阴性对照组(非特异性IgY,20mg/mL)、阳性对照组(头孢哌酮20mg/mL)、高剂量组(特异性IgY,40mg/mL),低剂量组(特异性IgY,20mg/mL).给药剂量为:攻毒前,0.15mL/10g体重,每天一次,共两天;攻毒后,0.25mL/10g体重,每天一次,共七天.观察小鼠临床表现、体重变化、白细胞(WBC)和血小板(PLT)数变化及各组小鼠的死亡率.结果:特异性IgY与E.coli O111和LPS均有体外结合活性.大肠杆菌攻毒后,小鼠体重下降,各组小鼠外周血中WBC和PLT数均有不同程度的下降.特异性IgY保护组各项指标较快恢复到正常水平,其他组恢复缓慢.各组小鼠七天内的死亡率分别为:空白组与阴性对照组都为100%;阳性对照组60%;低剂量IgY组30%;高剂量IgY组10%.结论:特异性IgY对小鼠大肠杆菌败血症有保护作用.     

艰难梭菌特异性鸡卵黄抗体的研制及初步应用

目的制备艰难梭菌菌体特异性鸡卵黄抗体,探讨其对艰难梭菌感染小鼠的治疗作用。方法建立艰难梭菌相关腹泻(CDAD)小鼠模型,将30只CDAD小鼠随机分为5组,每组6只,以11.86mg/mL、1.186mg/mL、0.1186mg/mL艰难梭菌菌体特异性IgY灌胃,设立空白对照组及阴性对照组,1d/次,0.5mL/只,连续3d。末次治疗24h后处死小鼠,取盲肠组织中段制作病理切片;其余盲肠组织进行DAO、D-乳酸和TNF-α含量测定;测定回肠组织含水率。结果阴性对照组和空白对照组小鼠盲肠黏膜脱落伴大量炎细胞浸润;高IgY组小鼠盲肠黏膜完整,未见炎性细胞浸润;中IgY组小鼠盲肠黏膜少量炎细胞浸润;低IgY组小鼠盲肠黏膜上皮细胞脱落,少量炎细胞浸润。高IgY组小鼠盲肠DAO含量均显著高于空白对照组和阴性对照组(P0.01);中IgY组小鼠DAO含量高于阴性对照组(P0.05);中、高IgY组小鼠TNF-α含量均低于低IgY组、空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论艰难梭菌菌体特异性IgY对艰难梭菌感染小鼠具有治疗作用。     

抗重组VacA IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的在构建H.pylori的基因工程菌pQE30-v-DH5a的基础上,诱导表达VacA重组蛋白,以此为抗原,制备抗VacA的蛋黄抗体（VacA IgY）。通过小鼠口服试验,证实VacA IgY治疗H.pylori感染的作用,为进一步制备抗H．pylori感染的IgY制剂提供实验依据。方法用重组H.pylori VacA蛋白免疫母鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY,ELISA法测定其针对VacA的效价。建立H.pylori感染的Balb／c小鼠动物模型,治疗组在小鼠灌喂菌液后灌喂不同剂量的VacA IgY。以H.pylori培养和病理切片观察胃黏膜H.pylori定植和炎症反应程度。结果制备了高效价的IgY（1：12800）。动物实验阳性对照组H.pylori的总感染率为70．4％,12周后的感染率为88．9％。治疗组的感染率与同期阳性对照组相似,胃黏膜的炎症反应程度比阳性对照组弱,随IgY剂量的增加,炎症减弱明显,IgY剂量为4mg／ml时,能达到较理想的治疗效果。结论成功制备了高效价的特异性VacA IgV,小鼠体内实验证实了口服VacA IgY具有治疗H.pylori感染的作用,可用于制备口服制剂。     

抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究

目的 探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础.方法 用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用.结果 初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5 h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P＜0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍.结论 抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠.     

Mipu1基因在内毒素血症小鼠组织中的表达研究

Mipu1是本研究室首次克隆的一个核转录因子,其在内毒素血症中的表达改变情况目前尚不清楚.本研究采用real-time PCR方法检测了Mipu1基因在内毒素血症(12 mg/kg,2 h)小鼠心、肝、肺、脾、脑、肠和骨骼肌7个器官组织中的表达改变.结果发现,LPS(12 mg/kg,2 h)处理可促进小鼠肺和脾组织中Mipu1基因表达增高;但可抑制小鼠心、肝、脑、肠和骨骼肌组织中Mipu1基因的表达.Mipu1基因在内毒素血症小鼠各器官中表达的改变可能与其在内毒素血症中的生物学功能密切相关.     

HSF1基因剔除对HSR抗内毒素血症的影响

利用内毒素(LPS)血症小鼠模型,观察HSF1基因剔除对热休克反应(HSR)保护作用的影响.采用腹腔注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,HSR采用肛温42℃维持15 min,室温恢复24 h,利用RT-PCR、苏木素-伊红(HE)染色、丙二醛测定以及死亡率,计算和分析重要脏器组织中炎症介质基因的表达、脏器损伤程度及小鼠存活率.注射LPS 15mg/kg 72 h后HSR LPS(HSF1 / )组存活率(7/15)显著高于LPS(HSF1 / )组(0/15)、LPS(HSF1-/-)组(0/14)和HSR LPS(HSF1-/-)组(0/14),而注射LPS 14 mg/kg 72 h后,LPS(HSF1 / )组存活率(5/15)显著高于LPS(HSF1-/-)组(0/13)和HSR LPS(HSF1-/-)组(0/13).在注射LPS 12 h后LPS(HSF1 / )组、LPS(HSF1-/-)组和HSR LPS(HSF1-/-)组的心、肺组织丙二醛含量显著升高,但HSR LPS(HSF1 / )组不升高.肺组织炎症介质基因IL-IB、IL-6、TNF-α、CCL-2、SOCS3、MCSF、GCSF、IL-15在LPS(HSF1-/-)组和LPS(HSF1 / )组表达上调,HSR LPS(HSF1-/-)组除IL-15较低外其他上调更甚,HSR LPS(HSF1 / )组除IL-1β和TNF-α较高外其他显著下调.注射LPS后LPS(HSF1 / )组和LPS(HSF1-/-)组的肺、肝、肾病理形态改变明显,HSR LPS(HSF1 / )组改变较轻,HSR LPS(HSF1-/-)组改变更加严重.HSF1基因剔除能显著消减HSR对内毒素血症小鼠的保护作用.     

心房钠尿肽对内毒素血症大鼠肺动脉和主动脉舒缩的影响

目的:探讨心房钠尿肽(ANP)对内毒素血症大鼠(ETR)肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞的调节作用.方法:24只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组(LPS组),治疗组(ANP组).各组分别静脉注射生理盐水、2 mg/kg的LPS和2 mg/kg LPS与2μg/kg的ANP,4 h后处死动物分离肺动脉、主动脉,进行离体血管务体外灌注实验.结果:LPS组、ANP治疗组主动脉环和LPS组肺动脉环对去甲肾上腺素(NE)引起的收缩作用在NE低浓度时较对照组减弱(P＜0.01),在较高浓度时较对照组均明显增强(P＜0.01);主动脉环ANP治疗组与LPS组无显著差异(P＞0.05);肺动脉环ANP治疗组与对照组相比无显著差异(P＞0.05).ANP可明显改善ETR离体主动脉和肺动脉对乙酰胆碱(ACh)的舒张反应(P＜0.01),ANP可提高ETR离体主动脉和主动脉环对硝普钠(SNP)引起的舒张反应的敏感性(P＜0.01).结论:ANP对ETR肺动脉和主动脉内皮和平滑肌细胞可能存在调节作用.     

硫糖铝对幽门螺杆菌VacA IgY的保护作用的动物实验评价

目的评价硫糖铝在胃内对H.pyloriVacA IgY型抗体的保护作用,为制备H.pyloriVacA IgY型抗体口服剂提供实验依据。方法大量诱导工程菌DH5α-vacA-pQE30,表达并纯化重组蛋白VacA。以VacA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。建立H.pylori感染的小鼠模型,在不同浓度的IgY液中分别加入30%硫糖铝,灌胃后观察胃黏膜慢性炎症反应以评价硫糖铝在胃内对VacA IgY的保护作用。结果在小鼠胃内,0.5mg IgY+30%硫糖铝/天灌胃小鼠即可有效防治H.pylori感染引起的胃黏膜损害,与不加硫糖铝比较,其效果提高了8倍。结论 30%以上的硫糖铝在小鼠胃内可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的抗H.pyloriVacA IgY型抗体保护剂。     

抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定

目的:制备高效价、高特异性的抗人胱抑素 C 鸡卵黄 IgY 抗体,并对其基本特性进行分析和鉴定.方法:以人胱抑素 C 为抗免疫产蛋的罗曼鸡,采用水稀释-盐析法提取及纯化 IgY 抗体,采用蛋白质定量、SDS-PAGE、West?ern 印迹和 ELISA 法对 IgY 抗体进行分析和鉴定.结果:免疫后14 d 即可从鸡冠血中检测出抗胱抑素 C 的特异性抗体,抗体效价在28 d 达最高峰(1∶32000),并可维持2个月以上;收集高效价时的免疫鸡蛋,制备鸡卵黄抗体 IgY;还性 SDS-PAGE 显示抗体 IgY 为相对分子质量分别为65×103和21×103的2条带,抗体纯度可达92%,得率为每个鸡蛋36.5 mg,抗体检出敏感度为15.63 ng/mL;Western 印迹证明该抗体具有高度特异性.结论:制备了抗胱抑素 C 的高效价、高特异性 IgY 抗体.     

急性肝功能衰竭大鼠胃肠道细菌培养结果分析

目的用硫代乙酰胺诱导急性肝功能衰竭大鼠模型,作胃肠道细菌培养,同时测定门静脉内毒素水平,以探讨肠道菌群与内毒素血症的关系 .方法 SD大鼠40只,随机分成2组,正常对照组15只,肝衰竭组25只.肝衰竭硫代乙酰胺按300 mg/kg皮下注射(30 mg/ml配制),每天1次,连续2 d.对照组用生理盐水作对照 .两组同时实验,第3天剖腹作胃肠冲洗液细菌培养及门静脉内毒素测定.结果[ HT SS 两组大鼠门静脉内毒素水平分别为 正常对照组(29.33±18.50)ng/L;肝功能衰竭组(105.81±18.82)ng/L (较正常对照组明显升高P＜0.01).两组大鼠胃小肠细菌培养结果细菌总数正常对照组胃(1.69±0.85)(lg n/ml),空肠(2.12±0.54)(l g n/ml),回肠(3.04±0.58)(lg n/ml);肝功能衰竭组胃(2.94±0.98)(lg n/ml), 空肠(3.60±1.12)(lg n/ ml),回肠(4.88±1.56)(lg n/ml)(较正常对照组明显增多 P＜0.05).肠杆菌数正常对照组胃(0.83±0.59)(lg n/ml),空肠(1.13±0.9 8)(lg n /ml),回肠(2.13±1.44)(lg n/ml);肝功能衰竭组胃(2.48±1.06)(lg n/ml),空肠 (2. 79±0.35)(lg n/ml),回肠(4.4±0.61)(lg n/ml)(较正常对照组明显增多,其中胃、空肠P＜0.05,回肠P＜0.001).结论由硫代乙酰胺诱导的大鼠急性肝功能衰竭模型肠道细菌上移过度生长,细菌菌落总数及肠杆菌数明显增多, 门静脉内毒素水平明显增高,且肠道菌群紊乱与内毒素血症有密切关系.