健康人群肿瘤坏死因子-α基因多态性的分析

了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF—A-308,TNF—A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308G／G、G／A、4朋基因型的频率分别为89％、11％、1％,其等位基因的发生频率以G等位基因最常见（93％）,其次为A等位基因（7％）。TNF—A-857C／C、C／T、形,基因型的频率分别为68％、36％、8％,其等位基因发生频率以C等位基因最常见（81％）,其次为T等位基因（19％）。由结果可以得出重庆地区汉族健康人群TNF—A-308位点存在G／A多态性,TNF-A-857位点存在C／T多态性。     

幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析

目的 探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性.方法 克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白.SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件.Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性.将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性.结果 4 mol/L醋酸钠溶液、pH 13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件.经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,Western blot显示该蛋白具有良好的抗原性.小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶ 16,具有良好的免疫原性.结论 切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究.     

申克孢子丝菌酵母相和菌丝相cDNA消减文库的构建

目的 筛选与申克孢子丝菌酵母相与菌丝相双相转换相关的差异表达基因,为探讨其双相转换的分子的机制奠定基础.方法 应用抑制性消减杂交技术,构建高特异性的申克孢子丝菌菌丝相（mycelium,M）和酵母相（yeast,Y）的正反cDNA消减文库,并对其差异表达的基因进行生物信息学分析.结果 M＋Y文库获得751条表达序列标签,平均长度为690.98 bp,经拼接后获得101条非冗余序列.Y＋M文库获得875条表达序列标签,平均长度为575.9 bp,拼接获得249条非冗余序列.经BLASTN比对,这些差异表达基因中,某些结构基因和功能不明的细胞分子类基因可能与双相转换有关.结论 成功构建了高特异性的申克孢子丝菌菌丝相和酵母相的正反cDNA 消减文库,为进一步筛选申克孢子丝菌的双相转换基因奠定了基础.     

硫糖铝对幽门螺杆菌VacA IgY的保护作用的动物实验评价

目的评价硫糖铝在胃内对H.pyloriVacA IgY型抗体的保护作用,为制备H.pyloriVacA IgY型抗体口服剂提供实验依据。方法大量诱导工程菌DH5α-vacA-pQE30,表达并纯化重组蛋白VacA。以VacA为抗原接种洛曼母鸡,制备纯化的IgY。建立H.pylori感染的小鼠模型,在不同浓度的IgY液中分别加入30%硫糖铝,灌胃后观察胃黏膜慢性炎症反应以评价硫糖铝在胃内对VacA IgY的保护作用。结果在小鼠胃内,0.5mg IgY+30%硫糖铝/天灌胃小鼠即可有效防治H.pylori感染引起的胃黏膜损害,与不加硫糖铝比较,其效果提高了8倍。结论 30%以上的硫糖铝在小鼠胃内可增强VacA IgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的抗H.pyloriVacA IgY型抗体保护剂。     

男性精浆中IL-6 和sICAM-1 与免疫性不育的关系研究

目的:探究男性精浆中白细胞介素-6(IL-6)和可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)与免疫性不育的关系。方法:选择2014年6月至2015年12月我院收治不育症患者189例及100例健康体检者为研究对象,根据患者精子混合抗球蛋白反应实验(MAR)结果将不育症患者分为免疫性不育组(88例)和非免疫性不育组(101例);免疫不育组患者按照精液白细胞过氧化物酶染色情况分为免疫性阳性白细胞组(WBC≥1×10~6/mL)36例和免疫性阴性白细胞阴性组(1×10~6/m L)52例,分析并比较各组间精子质量、IL-6和sICAM-1水平。结果:免疫性不育组与非免疫性不育组患者精液精子向前运动比率、存活率均低于对照组(P0.05);免疫性不育组与非免疫性不育组精液各项参数均不存在差异(P0.05);免疫性不育组患者IL-6、sICAM-1水平均高于非免疫性不育组及对照组,差异有统计学意义(P0.05);非免疫性不育组IL-6、sICAM-1水平均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示,精子被Ig G黏附数比例与研究对象精液IL-6、sICAM-1水平呈正相关关系(r=0.438,0.561;P0.05);免疫性阳性白细胞组患者精液IL-6与sICAM-1水平均高于免疫性阴性白细胞组(P0.05)。结论:免疫性不育症患者精子质量下降,男性精液中IL-6和sICAM-1水平表达越高,MAR阳性率越高,男性免疫性不育发生的可能性越大。