青藤碱对培养VSMC MAPK、PKC活性和细胞[Ca^2＋]i的影响

目的：观察青藤碱对血管平滑肌细胞（VSMC）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶C（PKC）活性和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋i]）的影响。方法：将VSMC正常培养液、ox-LDL诱导血管内皮细胞（VEC）损伤的条件培养基、青藤碱加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基等分别作用于VSMC,采用β-放射活性法等测定MAPK及PKC活性,荧光光度法检测VSMC[Ca^2＋]i。结果：VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与正常培养VSMC相比,细胞MAPK、PKC活性明显增加（P〈0．01）,细胞[Ca^2＋]i增加;青藤碱作用于VEC损伤条件培养基培养的VSMC后,与模型组相比,MAPK及PKC活性明显减少（P〈0．01）、细胞[Ca^2＋]i降低。结论：青藤碱抑制VSMC增殖的作用可能与拮抗MAPK、PKC活性和细胞[Ca^2＋]i的增加有关。     

模拟失重增强大鼠脑动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道功能

本工作旨在探讨短期模拟失重大鼠脑动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）大电导钙激活钾通道（large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa channels）功能的改变。以尾部悬吊大鼠模型模拟失重对脑血管的影响。应用激光扫描共聚焦显微镜测定VSMCs胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）;采用细胞贴附模式,记录BKCa通道的单通道活动。结果表明,模拟失重1周后,大鼠脑动脉VSMCs的[Ca^2＋]i比对照组显著升高（P〈0．05）：BKCa通道的开放概率（Po）与平均开放时间（To）显著增加（P〈0．05）,而单通道电导与平均关闭时间（Tc）则无显著变化。总之,1周模拟失重可引起脑动脉VSMCs的BKCa通道功能显著增强,且与细胞[Ca^2＋]i的升高同步出现。结果提示,脑动脉VSMCs的离子通道机制可能参与介导模拟失重引起的脑血管适应性变化。     

血管平滑肌收缩的Ca^2＋信号调节机制

血管平滑肌细胞内Ca^2＋的浓度（[Ca^2＋]i）的变化及胞内收缩蛋白对Ca^2＋的敏感性是影响血管紧张的主要因素。研究表明细胞内Ca^2＋浓度的变化在血管平滑肌细胞的激活中发挥重要作用。在静息状态,细胞内的Ca^2＋浓度主要受膜电位的调节,同时,[Ca^2＋]i也可反馈调节膜电位。在平滑肌细胞内存在多种[Ca^2＋]i调节机制。本文概述了这些机制在调节血管平滑肌紧张中的作用,主要包括：[Ca^2＋]i在血管平滑肌收缩中的作用;环二磷酸腺苷（cADPR）在调节Ca^2＋释放中的作用;cADPR介导的肉桂碱受体的激活在调节平滑肌紧张度中的作用;血管平滑肌细胞的Ca^2＋闪烁和细胞膜Ca^2＋敏感性钾通道的激活;[Ca^2＋]i与膜电位之间的相互作用等。     

腺苷减少豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度

目的：研究腺苷对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响并探讨其可能机制。方法：用激光共聚焦显微镜探测细胞内游离钙浓度,结果用相对荧光强度（（FI-FI0）／FI0,％;FI0：对照;FI：给药）表示。结果：①在正常台氏液和无钙台氏液中,腺苷（10,50,100μmol／L）浓度依赖性地降低[Ca^2＋];。②含30mmol／L KCl的台氏液（高钾台氏液）能够增加[Ca^2＋]i。腺苷（10,50,100μmol／L）能够显著抑制KCl引起的[Ca^2＋]i的增加。③预先应用选择性腺苷AI受体拮抗剂DPCPX（1μmol／L）,可大部分取消腺苷（100μmol／L）在高钾台氏液中的作用。腺苷（100μmol／L）在高钾台氏液的作用也可被预先应用一氧化氮（No）合酶抑制剂L-NAME（1mmol／L）所部分减弱。④腺苷（100μmol／L）能明显抑制无钙台氏液中由低浓度ryanodine引起的[Ca^2＋];增加。⑤当细胞外液钙浓度由1mmol／L增加到10mmol／L而诱发心室肌细胞钙超载时,部分心室肌细胞产生可传播的钙波,腺苷（100μmol／L）可降低钙波发生的频率和持续时间,最终阻断钙波并降低[Ca^2＋];。结论：腺苷可通过抑制外钙内流和减少肌浆网内钙释放从而降低[Ca^2＋],其减少外钙内流可能是由于腺苷A1受体介导的电压依赖性Ca^2＋通道的抑制,NO可能参与这一过程。     

钙激活氯离子通道对大鼠肺动脉张力的调节作用

目的：研究钙激活氯离子通道及其通道阻断剂尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）、indaryloxyacetic acid（IAA-94）在苯福林（phenylephrine,PE）引起的肺动脉收缩中的作用。方法：常规离体血管灌流法检测肺动脉环张力;采用钙荧光探针（Fura-2／AM）负载急性酶分离法（胶原酶Ⅰ型和木瓜蛋白酶）获得的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）,观察NFA和IAA-94对PE诱导的PASMCs胞浆游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响,用荧光分光光度计法检测[Ca^2＋]i。结果：钙激活氯离子通道阻断剂NFA和IAA-94可以舒张PE引起的肺动脉环收缩;NFA和IAA-94对KCl引起的血管收缩无影响;PE可以引起[Ca^2＋]i升高,NFA和IAA-94对PE诱导[Ca^2＋]i升高无影响。结论：钙激活氯离子通道在生理状态下与血管活性药（PE）引起的肺动脉张力变化有关,这为研究其在低氧肺血管收缩中的作用提供了新的线索。     

激光扫描共聚焦显微镜观察胰蛋白酶对肺上皮细胞游离钙离子的影响

目的：研究PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO、胰蛋白酶及其抑制剂对H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i的影响.方法：应用Fluo-3/AM 荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜（LSCM） 检测不同因素处理的H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i.结果：胰蛋白酶、SLIGKV、tc-LIGRLO均能引发H292细胞[Ca^2＋]i的增加,平均荧光强度分别比加入药物前增加267%,60%和37%.胰蛋白酶抑制剂大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）和α1-抗胰蛋白酶（α1-AT）可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2＋]i的增加.结论：PAR-2可以介导H292肺上皮细胞[Ca^2＋]i的释放增加,胰蛋白酶抑制剂可以抑制胰蛋白酶诱导的细胞[Ca^2＋]i的增加.     

pH改变对心肌细胞内Ca2+浓度和细胞长度的影响

目的：探讨细胞内pH(pHi)改变对心肌细胞内Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)和细胞长度的影响。方法：心肌细胞内分别灌注20mmol/L丙酸钠和15mmol/L NH4Cl ,建立细胞内酸碱中毒模型。荧光指示剂indo-1和SNARF－1载入大鼠心肌细胞内,用荧光显微镜同时测定心肌[Ca^2 ]i、pHi和细胞长度。结果：细胞内酸中毒早期,收缩期和舒张期[Ca^2 ]i轻度增加,细胞缩短（CS）降低,细胞长度增加,心肌纤维对Ca^2 的敏感性和CS／[Ca^2 ]i降低（P＜0．01）;碱中毒时,收缩期和舒张期[Ca^2 ]i均较对照组降低,CS增加,细胞长度变短,心肌纤维对Ca^2 的敏感性和CS／[Ca^2 ]i增加（P＜0．01）。结论：酸中毒早期[Ca^2 ]i和细胞长度增加,碱中毒时[Ca^2 ]i和细胞长度降低。酸、碱中毒对Ca^2＋敏感性的影响并非线性关系,即单位pHi变化时酸中毒对敏感性的影响较碱中毒小。     

基于TAXIScan细胞动态可视化系统分析中性粒细胞迁移以及瞬时钙离子流的变化

采用新型TAXIScan细胞动态可视化系统观察和分析中性粒细胞在趋化因子甲酰甲硫氨酰–亮氨酰–苯丙氨酰(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,f MLP)诱导下的迁移以及在此过程中胞质内游离钙离子浓度的变化规律。该文将小鼠骨髓中性粒细胞经Fluo-3/AM标记后用流式细胞术检测不同浓度f MLP刺激下瞬时钙离子流的变化。采用TAXIScan系统观测f MLP趋化下细胞的运动及运动过程中胞质内钙离子浓度的变化。流式细胞术结果显示,细胞在0.5、1、5μmol/L f MLP诱导下形成的瞬时钙离子流峰值最高;TAXIScan结果显示,f MLP作用下细胞瞬时钙离子流要早于极性化出现,且在细胞迁移过程中伴随着钙离子浓度的振荡波动,其中1μmol/L f MLP作用下细胞运动速度最快、路程最远。TAXIScan系统可准确、定量地分析中性粒细胞定向迁移过程及单细胞钙离子荧光的变化,为探究中性粒细胞极性与钙离子间的关系提供新方法及参考依据。     

持续癫痫样放电导致海马神经元钙离子动力学变化的研究

目的：研究低镁介质致痫的培养海马神经元癫痫模型中神经元内游离钙离子（[Ca^2＋]i）的时空分布及其动力学改变,以探讨钙离子在癫痫发病过程中的作用。方法：联合应用共聚焦激光扫描显微镜和膜片钳,运用较高时间分辨率动态观察培养海马神经元癫痫模型[Ca^2＋]i和电生理变化,以及化学门控钙离子通道阻滞剂的影响。结果：致痫后海马神经元胞浆和核内游离钙离子迅速上升到（612±65）nmol／L和（620±69）nmol／L水平,NMDA受体阻断剂MK-801（10μmol／L）和非NMDA受体阻断剂NBQX（10μmol／L）可使[Ca^2＋]i的升高明显减少;升高的[Ca^2＋]i恢复有明显的延迟现象,90min和150min癫痫样放电后[Ca^2＋]i恢复的时间分别为（114．8±5．2）和（135．0±22．7）（P〈0．05）。结论：持续的癫痫样放电可导致海马神经元细胞内钙超载,这个效应可被MK-801阻断,化学门控钙离子通道也参与了细胞外Ca^2＋内流的过程。     

hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖与免疫应答及胞内Ca2+水平的影响

目的：探讨大肠杆菌表达的人源可溶性B淋巴细胞激活因子hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞免疫反应及其对胞内游离Ca^2＋信号变化的影响。方法：选择20只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成两组（n=10）：①对照组;②hsBAFF实验组。实验组小鼠腹腔注射含hsBAFF（0．1mg／kgbw）的PBS溶液,对照组注射同等剂量的PBS溶液．连续8d。用MTT法检测小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖及其对LPS刺激的免疫反应,并用激光共聚焦显微镜分析脾脏B淋巴细胞胞内钙离子水平（[Ca^2＋]i）变化。结果：hsBAFF注射小鼠的脾脏B淋巴细胞增殖和对LPS刺激的免疫反应均明显高于对照组（P〈0．05）;hsBAFF注射组[Ca^2＋]i荧光强度维持在相对稳定的高水平上波动,平均荧光强度显著高于对照组（P〈0．01）,且荧光强度变化率小于对照组。结论：大肠杆菌表达的hsBAFF能促进B淋巴细胞的增殖和免疫应答,从而增强机体免疫功能。hsBAFF激活小鼠脾脏B淋巴细胞可能与[Ca^2＋]i升高有关。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.