昆虫器官横切标本的简易制作法——徒手石蜡切片法

<正> 为了研究昆虫的形态,掌握昆虫有关器官的详细构造、器官的位置及相互关系,我们常常将一些器官横切做成玻片标本后进行观察。用切片机来切制这类标本,一则工序复杂需要数天才能完成,二则切片机切制的标本太薄,立体感不强,不易形成整体的组合概念。目前有的农业中学、技校及基层农业科研单位没有切片机。为解决上述矛盾,我们采用徒手石蜡切片     

一种调节超薄切片机标本块与刀距的简易装置

在使用超薄切片机时,调节标本块与刀之间的距离时往往会遇到一些困难。开始切片时,如舉两者之间距离过大,会造成切片机之标本臂往返运动而切不到切片;反之,如果把标本块的顶端调节到超过刀口的位置,则又会因一刀切得太厚而损坏了刀口和标本。为了解决这个问题,我们参考了LKB修块机等有关资料,制作了一个简易的照明装置(图1a)。该     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作

目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法。方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌。所有组织均采取单一包埋制作蜡块。另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块。将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上。对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色。再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片。结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构。不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰。结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

植物石蜡切片包埋、修蜡过程的改进

传统的石蜡切片包埋、修蜡操作过程耗时费力。采用金属框替代纸质包埋盒进行组织包埋,将蜡块冷水冷却改为自然冷却,趁蜡块未完全变硬之前进行快速修整。该方法不仅提高了实验效率,而且修出的蜡块工整一致,同时对后面的切片过程无任何影响。     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

淋巴结组织术中快速冷冻切片的优化

目的优化淋巴结组织术中快速冷冻切片的条件,以期提高淋巴结组织冷冻切片的时效性,改善冷冻切片的质量。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2018年1月至2019年7月接收的120例术中淋巴结组织标本。根据组织取材大小不同分为3组,每组随机抽取一定数量的冷冻头,从组织冷冻前是否运用"吸水吸油法"、小淋巴结组织的摆放方式及冷冻切片机样本头的温度设置3个方面分别进行对比实验,比较不同条件对淋巴结组织的冷冻制片时间及切片质量(无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标)的影响。结果冷冻前先将淋巴结组织进行"吸水吸油"操作、将多枚小淋巴结组织并列排列、设置冷冻切片机样本头温度为-20℃的条件下淋巴结组织冷冻切片制片时间最短,无皱褶、无裂隙、无冰晶3个指标得分最高,切片质量最佳。结论优化淋巴结组织"吸水吸油"操作、小淋巴结组织的摆放方式、冷冻切片机样本头的温度设置等条件,可以显著缩短淋巴结组织冷冻制片时间,提高切片质量,值得推荐。     

切片机刀的代用品——单面刀片

国产单面刀片经显微镜检查,刀刃光滑平直无损伤,可以和完好的切片机刀相媲美.在使用寿命上,虽然比不上切片机刀,但是,单面刀片价廉,刀刃有损伤或者变钝,可不再研磨,换上一个新的就能继续工作.单面刀片如果装置得当,可以提高切片机的性能.比如,我们使用的切片机,是50年代我国的第一批产品——双线牌切片机.可是安上单面刀片以后,切5—6微米厚的组织连续切片,厚薄均匀,粘连成带,效果很好.切3微米的切片(睾丸组织),结果也不错.为什么会有这样的效果呢?据我们初步的分析来看,可能和单面刀片刃口的倾斜角度比较小有一定关系. 经过测量和计算,切片机刀刃的倾斜夹角是34°,单面刀片是9°.角度小的刀刃,若安装合理,切削的阻力减小,石蜡不易卷缩,组织蜡片粘连得也就比较整齐.但是,应该指出,单面刀片要以下述步骤进行装     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

动物病理组织制片过程的体会

组织切片技术是兽医科学研究和临床学观察组织病理形态变化，进行疾病诊断的一种重要方法，制作优质的组织切片，取材新鲜，固定完全，脱水彻底，透明适度，浸蜡充分，切片要薄，染色良好，如在某一步骤上不加注意，即将会造成事倍功半，但在实际工作中，常由于某些人为因素，使切片质量不佳，甚至影响研究和诊断的结果，本文介绍了我室制片过程中人为现象及其原因和纠正方法的体会，从而制出优质的组织切片标本。     

肾活检组织免疫荧光染色

免疫荧光技术由 Coons等于五十年代创立 ,目前已广泛应用于临床检验。在人类肾脏疾病中 ,不同类型的肾小球肾炎有不同的免疫反应特点。我科自一九八四年至今 ,对住院患者的肾活检组织进行免疫荧光染色 ,共检测 395 3例 ,在实际应用中收到了很好的效果。现介绍如下 :1.材料1.1　标本来源 :肾组织均系我院肾病科肾活检标本 ,经恒温冷冻切片机 3～ 5 μm切片 ,4℃备用。1.2　试剂配制 :抗人荧光抗体 Ig G、Ig A、Ig M、C3、C4、Cq、F为 DAKo公司产品 ,由北京医科大学病理学系提供。1.3　染色步骤 :1肾组织冷冻切片凉至室温编号入湿盒。2…     

品制备对超薄切片的影响

电镜超薄切片的质量与组织块的硬度,组织的固定,清洗、脱水、浸透、包埋、包埋块的修整形状,切片机、玻璃刀、架刀角度和收集槽液面等因素都有密切的关系,标准的超薄切片应是厚度适中、均匀、平整、无刀痕、无颤纹和皱折。要想获得理想的超薄切片,作者认为     

一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的 新器具和新方法

发明一种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作的新器具和新方法 . 利用这种新器具和新方法成功地制作了分别含 448 和 390 个供体组织点阵的组织微阵列受体蜡块和切片 . 这种新方法制作的组织微阵列切片经 H&E 染色,显微镜下观察证实,所有切片均无供体点阵组织脱落,切片厚度适中,组织结构无挤压变形,细胞形态均匀一致 . 免疫组化检测 P53 和 P16 蛋白在组织微阵列切片与其相应的常规组织切片中的表达结果完全一致 . 这种组织微阵列供体取样与受体蜡块制作新器具和新方法成本低廉,操作简便,具有在实验室推广应用的价值 .     

关于改革石蜡切片工艺的试验

众所周知,在石蜡切片的制作过程中,历来是用苯类(尤其是二甲苯)作为透明剂和石蜡的有机溶剂。组织块经酒精脱水后,必须再用二甲苯作为中间媒剂将酒精取代出来,然后才能进行透蜡。否则,虽然水分除尽,但组织内部积蓄酒精,石蜡仍难透入。同样,切片染色前和染色后,也需用二甲苯脱蜡和透明。因此,在整个制片过程中,不但要多次用到二甲苯,手续繁琐,而且组织块在二甲苯中浸渍时间较难掌握,久浸会使材料松脆,影响切片质量;时间不足又会影响透蜡效果。另外,苯类是有毒药品,且有致癌作用,对人体极为有害,国外组织学实验室     

组织块速冻装置

冰冻切片法是生物医学研究中常用的方法之一,其中较为常用的是恒冷箱切片机,此机冷冻组织块要求要速冻以防形成冰晶,影响组织结构.通常采用CO_2、干冰,仪器本身所具有的低温装置等使组织块冷冻,以上方法虽然可以使组织块冷冻,但存在一些缺点,如CO_2下易领取,干冰冷冻也容易受周围空气的影响,尤其是一些较大的组织块,冷冻速度太慢容易形成冰晶,针对这些原因,我们科室设计了一个快速冷冻组织块的装置。(如图所示)     

半月板切片制作方法的改进

半月板主要由纤维软骨构成 ,具有一定的硬度 ,经二甲苯透明和高温石蜡浸蜡后更坚硬易碎 ,不易切出完整的组织切片。国内外虽有此项方法学研究的报导 ,但较复杂 ,我们就此在常规切片制作方法的基础上进行了改进研究。我们经过 4 0例试验 ,摸索出一种简易有效的半月板切片制作方法。1　材料及固定1.1　材料　选用成年大白兔的半月板。1.2　固定　组织块用 10 %中性甲醛或波氏液固定 3天以上。2　组织蜡块的制作2 .1　脱水　 70 %乙醇 6～ 2 4 h　 80 %乙醇 6～ 2 4 h　95%乙醇 1.5h　 10 0 %乙醇 1h。2 .2　氯仿透明 12～ 2 4 h。2 .3　浸蜡　…     

全自动密闭式脱水机试剂更换量化处理的探讨

在蜡块制作过程中 ,为了节约试剂 ,尽量用一批制剂多做蜡块与保证切片质量是一对矛盾 ,对此本文以如何能够既保证蜡块质量 ,又能节约试剂 ,通过 15 0次实验观察 ,总结出全自动脱水机试剂更换的量化处理方案。1 材料和方法材料 :组织来源为本院外科手术标本 ,组织块的取材厚度为 2～ 3mm。脱水机型号 :英国产SHANDON牌全自动密闭式脱水机 ,浸蜡用的石蜡其溶点为 5 6～ 5 8℃[1] 。试剂菜单 :AF液 1缸 (75 %乙醇 +10 %福尔马林 ) ,80 %乙醇 1缸 ,90 %乙醇 1缸 ,95 %乙醇3缸 ,无水乙醇 2缸 ,二甲苯 2缸 ,石蜡 4缸。程序 :组织块置脱水篮 ,…     

形态学实验教学中正常与病理混合标本对照法的应用

石蜡切片是形态学实验教学微观部分的主要手段,传统的石蜡切片是在每块载玻片上仅有一个组织切片。为了更好地实现形态学实验课程的融合,不断更新实验内容,我们创新实验课内容,采用混合切片对照法,即在同一载玻片上放置同种组织器官的正常和异常组织混合切片标本块,其中一张为正常组织切片作为对照,其它一张或若干张标本则为同一器官相对应的异常组织切片。混合切片标本在实验教学的优势是,同一张载玻片上观察多个标本,既可节省实验操作时间和操作环节,还可以锻炼学生动手操作和熟练使用显微镜的技能。