PCR技术战略

ＰＣＲ技术战略朱新产张涌廖祥儒（西北农业大学分子生物学研究室陕西杨陵７１２１００）ＰＣＲ技术已成为分子生物学研究领域极为重要的工具,在几小时内沙克级的ＤＮＡ,甚至单拷贝基因能在体外扩增放大。其过程的广泛性预示着ＰＣＲ技术不仅能分离ＤＮＡ片段,也能修饰...     

长片段PCR技术

长片段ＰＣＲ技术刘建伟,徐湘民（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词长片段ＰＣＲＰＣＲ技术是１９８３年由Ｍｕｌｌｉｓ首创的一种通过体外酶促扩增反应快速获取特定ＤＮＡ序列的方法,已在分子生物学、分子遗传学、医学和法医学等领域得到广泛应...     

生殖支原体的分子生物学诊断方法研究进展

本文综述了生殖支原体的实验室诊断的分子生物学方法,特别是基因探针和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等新的分子生物学技术在诊断生殖支原体感染方面的研究进展,着重讨论了ＰＣＲ技术在诊断生殖支原体方面的应用。     

梅毒实验室诊断的分子生物学方法

本文综述了梅毒的实验室诊断的分子生物学方法,特别是多聚酶链反应（ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹等新的分子生物学检测技术在诊断早期梅毒、先天性梅毒和神经性毒素等方面的研究进展,着重讨论了ＰＣＲ诊断梅毒的多方面情况,并对ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术与经典兔感染试验进行了评价。     

PCR产物克隆方法的新进展

ＰＣＲ产物克隆方法的新进展陈尚武,马涧泉（中山医科大学生化教研室．广州）随着ＰＣＲ技术的发展和普及,克隆ＰＣＲ产物已广泛应用于分子生物学的各个领域。通常ＰＣＲ产物不具有粘端,只能进行平端连接的克隆,由于ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性...     

构建遗传图的新方法:单精子PCR分型技术

构建遗传图的新方法———单精子ＰＣＲ分型技术①赵书红李奎彭中镇（华中农业大学动物分子生物学与育种研究室,武汉４３００７０）盛志廉（东北农业大学动物科学研究所,哈尔滨１５００３０）ＲｅｖｉｅｗｏｆＳｉｎｇｌｅＳｐｅｒｍＴｙｐｉｎｇｂｙＰＣＲＭｅｔｈｏｄ...     

原位PCR技术及其应用

原位ＰＣＲ技术是通过在染色体上或组织细胞内对靶核酸序列进行原位扩增,用原位杂交技术检测,从而对靶核酸进行定性,定位和定量分析的研究方法,原位ＰＣＲ大大提高了原位杂交技术的灵敏度,在分子生物学基础理论和临床医学研究方面展示了美好的应用前景。     

原位聚合酶链式反应

原位聚合酶链式反应黄建生,王昌才（第一军医大学分子生物学研究所,广州５１０５１５）关键词原位ＰＣＲ原位聚合酶链式反应（ＩｎＳｉｔｕＰＣＲ,ＩＳＰＣＲ）是由Ｈａａｓｅ等于１９９０年首创,当时称为“细胞内ＰＣＲ”（ＩｎＣｅｌｌＰＣＲ）。顾名思义,该方法就...     

分子生物学技术在研究肠道病毒性心肌炎,赆肌病中…

肠道病毒性心肌炎、心肌炎研究是国家“九．五”攻关项目之一。本文作者结合自己在英国伦敦大学实验室的直接经验,综述了用分子生物学技术如膜相核酸杂交、原位杂交以及采用ＴａｑＤＮＡ多聚酶催化的循环ＤＮＡ序列法,免疫多聚酶链反应（ＰＣＲ）、原位ＰＣＲ等技术,进一步证明了肠道病毒是心肌炎的主要病原,并可用ＰＣＲ产物分析病毒型别。     

PCR－SSCP技术在基因点突变检测中的几种策略

ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术在基因点突变检测中的几种策略王吉伟,罗赛群（湖南医科大学分子生物学研究中心,长沙４１００７８）关键词ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,点突变检测基因点突变的检测对于分子种群生物学的研究、遗传性疾病预测及分子水平的临床诊断等颇具实用价值。在众多的测...     

基于专利分析的肿瘤基因PCR诊断技术研究

肿瘤目前成为人类健康和生命的重要危胁,肿瘤基因诊断是对肿瘤的各种原癌基因、抑癌基因进行检测,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术是目前临床基因诊断应用最广泛的诊断技术,具有普及率高、特异性好、简便快捷等特点。肿瘤基因PCR诊断技术可以用于已知基因突变的检测,快速了解突变状态,有效制定治疗方案,为肿瘤患者带来福音。本研究主要基于专利数据,对肿瘤基因PCR诊断技术进行分析,探讨了全球与中国在肿瘤基因PCR诊断技术领域的发展现状与趋势。在Innography数据库共检索到PCR技术相关专利16,939件,专利家族6,285件。在肿瘤基因PCR诊断技术领域中,荧光定量PCR技术占比较大,约占肿瘤基因PCR诊断技术总量的三分之一。从技术技术生命周期来看,肿瘤基因PCR诊断技术目前仍处在高速发展阶段。美国是肿瘤基因PCR诊断技术的发展领先国家。该技术的主要来源国为美国,全球42.09%的专利来自美国,同时美国也是同族专利的主要分布地区。在肿瘤基因PCR诊断技术领域,排名前15位的顶尖机构中,来自美国的机构有7所。中国在肿瘤基因PCR诊断技术领域起步较晚,但发展迅速,在该技术领域申请的专利数量仅次于美国。中国申请的肿瘤基因PCR诊断技术的专利绝大多数都只在中国进行专利保护,并没有布局全球市场的意愿。     

实时荧光定量PCR及其在传染性疾病检测中的应用

实时荧光定量PCR技术被广泛应用于实验研究、临床检测中。与普通的PCR相比,实时荧光定量PCR技术具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。我们综述了实时荧光定量PCR技术的原理、定量方法,及其在传染性疾病检测研究中的应用。     

数字聚合酶链反应及其在感染性疾病中的应用

数字聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)采用与定量PCR相同的荧光化学原理和不同的数学原理来实现对靶标核酸序列的绝对定量,其摒弃了对外部参照的依赖,同时具有更高的数据精密度,提高了重复性和再现性。数字PCR的应用涵盖生命科学众多领域,特别是在医学检验领域,其对疾病相关核酸分子标记的准确分析,为疾病的早期诊断、进展监测、疗效评估提供了动态量化指标。数字PCR的出现将推动基于核酸扩增技术的分子生物学检测迈入精准定量阶段。本文就数字PCR尤其是微滴式数字PCR在感染性疾病中的应用进展及前沿进行综述。     

基于计量学方法分析数字PCR技术的临床应用现状与技术热点

近年来数字PCR技术作为第三代PCR技术迅猛发展,已被应用于无创产前筛查、病毒核酸检测及肿瘤液体活检等领域。以中国生物医学文献数据库、PubMed医学文献检索服务系统及Incopat专利数据库收录的与“数字PCR技术临床应用”相关的中英文论文和专利文献为数据源,利用计量学方法分析了数字PCR临床应用现状与技术热点趋势,明确该技术的主要研究机构包括美国弗雷德-哈钦森肿瘤研究中心、哈佛医学院丹娜法伯癌症研究所和Bio-Rad公司等。中文文献发表机构中检验检疫部门和疾控中心占比较高。国内外数字PCR技术研究主要聚焦于肿瘤伴随诊断、病毒检测和基因表达分析等方面。中国数字PCR技术研究热情较高,专利申请已展现出国际领先趋势。     

PCR相关技术在植物病毒检疫检测中的应用

PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点广泛应用于植物病毒的检测。阐述反转录聚合酶链式反应、免疫捕捉反转录PCR、PCR-单链构型多态性、实时荧光定量PCR、差异显示PCR和巢式PCR等相关技术的原理及其在植物病毒检测中的应用现状,以期为我国植物病毒的检疫检测提供有益参考。     

PCR 芯片及其应用研究进展

PCR芯片实质上就是固定有与研究对象有关的许多已知基因的引物阵列并可用于PCR检测的固相载体,其制作时最关键的是目的基因的引物设计。与基于杂交的芯片技术不同,PCR芯片技术是一种高通量的,准确、灵敏的定量检测基因表达的技术,它将待测基因的引物固定于固相载体上,通过简单的、经过优化的定量PCR体系和荧光定量PCR仪,实现待检样品中已知基因的扩增,用于定量检测待检样品中已知基因的表达情况。PCR芯片由于其操作简单、结果准确、数据产出快而多等特点,已应用于疾病发病机制、药物作用机理和细菌分型等研究领域,并将在生命科学研究领域得到更为广泛的应用。     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

PCR技术以其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点,广泛地应用在食品微生物检测的各个领域,尤其对培养困难的细菌检测和抗原结构复杂的细菌鉴定方面。介绍了几种PCR方法的原理,以及其在食品微生物检测中的应用情况。     

Rapid Diagnosis of Bloodstream Infections with PCR Followed by Mass Spectrometry

Achieving a rapid microbiological diagnosis is crucial for decreasing morbidity and mortality of patients with a bloodstream infection, as it leads to the administration of an appropriate empiric antimicrobial therapy. Molecular methods may offer a rapid alternative to conventional microbiological diagnosis involving blood culture. In this study, the performance of a new technology that uses broad-spectrum PCR coupled with mass spectrometry (PCR/ESI-MS) was evaluated for the detection of microorganisms directly from whole blood. A total of 247 whole blood samples and paired blood cultures were prospectively obtained from 175 patients with a suspicion of sepsis. Both sample types were analyzed using the PCR/ESI-MS technology, and the results were compared with those obtained by conventional identification methods. The overall agreement between conventional methods and PCR/ESI-MS performed in blood culture aliquots was 94.2% with 96.8% sensitivity and 98.5% specificity for the molecular method. When comparing conventional methods with PCR/ESI-MS performed in whole blood specimens, the overall agreement was 77.1% with 50% sensitivity and 93.8% specificity for the molecular method. Interestingly, the PCR/ESI-MS technology led to the additional identification of 13 pathogens that were not found by conventional methods. Using the PCR/ESI-MS technology the microbiological diagnosis of bloodstream infections could be anticipated in about half of the patients in our setting, including a small but significant proportion of patients newly diagnosed. Thus, this promising technology could be very useful for the rapid diagnosis of sepsis in combination with traditional methods.     

应用xMAP液态芯片多重快速检测四种病原微生物的研究

目的：建立一种多重、快速、特异性好、灵敏度高的病原微生物检测方法。方法：根据GenBank数据库中的小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生性李斯特菌、产气荚膜梭菌、鼠疫耶尔森氏菌基因序列,分别针对ail、hly、cpe、3a基因设计4对引物和4条探针。通过重叠PCR扩增各目的基因并构建重组质粒,以该重组质粒DNA为模板,通过多重PCR同时扩增上述4个基因,建立xMAP液态芯片检测技术,在此基础上对标准菌株基因组DNA进行检测并验证该方法的特异性和敏感性。结果：xMAP液态芯片对质粒DNA和标准菌株基因组DNA的检测结果与多重PCR结果一致。该方法能在3.5 h内同时完成对4种病原菌的检测,特异性好,且敏感性要高于PCR方法,灵敏度最高可达200CFU/ml。结论：xMAP液态芯片技术是病原微生物的多重快速检测的新方法,具有很好的应用价值和前景。     

数字PCR技术及其在检测领域的应用

随着分子生物学技术的不断发展和需求的多样化,用于核酸检测的各种PCR衍生技术应运而生。数字PCR是一种单分子水平的大规模分区扩增定量核酸检测技术。该技术以微腔室/微孔或微滴作为PCR反应器,无需校准物和绘制标准曲线即可实现对样品初始浓度的绝对定量,具有高灵敏度、高特异性和高精确度的特点。本文详细介绍了数字PCR的技术发展史、作用原理以及仪器平台类型,系统阐述了数字PCR在转基因检测、疾病诊断、环境及食品监管等方面的应用概况,并对该技术的应用前景进行了展望,以期对未来数字PCR的开发利用提供参考。