免疫—PCR技术进展

免疫－ＰＣＲ结合了抗原抗体反应的特异性和ＰＣＲ的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。免疫－ＰＣＲ的关键在于形成抗体－标记ＤＮＡ偶联物,作为桥梁连接免疫反应的特异和ＰＣＲ的高扩增能力。本文简述了－ＰＣＲ的基流程以及与标ＤＮＡ相偶联,ＰＣＲ产物检测方法的进展。     

免疫——PCR：继续还是放弃？

从刚刚建立的一种新的检测方法出发，对免疫－ＰＣＲ的原理及其应用前景作了一番探讨，并与其它类似的检测方法进行了比较，指出了它的特点、优越性和不足之处。针对免疫－ＰＣＲ的缺点提出了一些改进的方案，以使其朝着实际应用方面迈进一步。     

免疫—PCR：一种新的抗原检测系统

免疫－ＰＣＲ是１９９２年建立的抗原检测系统，其基本过程和ＥＬＩＳＡ相似，免疫－ＰＣＲ用一段可扩增的ＤＮＡ分子代替ＥＬＩＳＡ中的酶来放大检出信号，因而大大提高了灵敏度，尽管此法尚处于探索阶段，但应用前景是诱人的。     

HCV RNA的检测方法简介

本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶Ｋ消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取ＨＣＶ　ＲＮＡ的５种方法,以及一步ＰＣＲ法,常规ＲＴ－巢式ＰＣＲ,直接ＲＴ－巢式ＰＣＲ,化学修饰的ＲＴ－巢式ＰＣＲ,联合ＰＣＲ,双温ＰＣＲ和定量竞争性ＰＣＲ等７种ＰＣＲ方法检测ＨＣＶ　ＲＮＡ,用ＰＣＲ检测ＨＣＶ　ＲＮＡ方法的标准化以及检测ＨＣＶＲＮＡ具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法－ｂＤＮＡ信号放大技术检测ＨｃＶＲＮＡ。     

一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究

把ＰＣＲ技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫－ＰＣＲ技术。在本研究中,以ＰＥＩ作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与ＤＮＡ交联,构建了三种Ａｂ－ＤＮＡ基因探针,组成新的免疫－ＰＣＲ检测系统。此三种特异性Ａｂ－ＮＤＡ探针可用于检测三种相应抗原。检测ＨＳＡ抗原的最低含量可达１０＾－１８ｍｇ／ｍｌ,灵敏度比ＥＬＩＳＡ高１０＾６倍。     

利用MPCR方法快速检测植物转基因背景

利用复合ＰＣＲ（Ｍｕｌｙｉｐｌｅｘ ＰＣＲ－ＭＰＣＲ）技术对植物的转基因背景进行检测。经过对ＤＮＡ方法的选择,对各种ＰＣＲ程序的比较以及对引物的修饰,建立了一种快速检测植物转基因情况的技术;利用该技术对５个大豆样品,６个豆粕样品进实验检测,同时利用普通ＰＣＲ方法对上述样品进行检测,两者的结果完全符合。     

糖单孢菌16S rDNA的PCR-RFLP分析

ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析适用于种和种间水平的多相分类研究。文章对ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用于糖单孢菌属分类有具体方法进行了探讨;报道了一组适于糖单孢菌属ＰＣＲ－ＰＦＬＰ分析的限制性内切酶,并用这组酶对６株糖单孢菌属分离株进行了研究,进一步探讨了实验菌株在该属的分类地位。同时指出了ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法应用中应注意的问题。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

PCR和Southern Blot检测土拉弗氏菌气溶胶

为提高检测土拉弗氏菌的特异性和敏感性,建立了土拉菌ＰＣＲ及核酸杂交检测方法。运用平板计数、多聚酶链反应对土拉菌气溶胶稳定性进行了比较,结果表明ＰＣＲ具有较高灵敏度,并且在采样后３小时ＰＣＲ就可以得出定性结果,而平板计数则需要３～７天。采用ＰＣＲ法合成了土拉菌３７６－ｂｐ探针,分别对细菌菌液、５６８－ｂｐＰＣＲ产物和气溶胶样品进行杂交,结果表明菌悬液直接杂交可检出１０５ＣＦＵ左右的细菌,检测ＰＣＲ产物可达４０ｐｇ。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹相结合有利于细菌的分离鉴定     

LSSP－PCR—筛选基因突变的简易方法

ＬＳＳＰ－ＰＣＲ—筛选基因突变的简易方法张军，宋亮年（第二军医大学基础医学部病理生理学教研室，上海２００４３３）关键词ＬＳＳＰ－ＰＣＲ，基因突变最近，Ｐｅｎａ等报告了一种简便易行、检出率又很高的新型基因突变检测技术，称为低严格特异性单链引物ＰＣＲ（ｌ...     

应用PCR-SSCP快速鉴定结核分枝杆菌复合群

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术分析结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床株的１６ＳｒＤＮＡ基因。６０例临床标本中,２０例为阳性,与传统方法比较无差异。其中分型：１８例为结核分枝杆菌,２例为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌双重感染。２０例阴性标本中,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ又检查出５例阳性。２０例对照标本中,３种传统方法与ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法均检测为阴性。全部试验３ｄ报告结果。结核分枝杆菌复合群和卡介苗的图形相同以外,其它分枝杆菌的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳图谱均有差异。所以,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术快速     

HLA—DRB1基因位点多态性的PCR—RFLP分析

设计并建立了一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法,分５组特异性扩增ＤＮＡ样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码ＤＲ抗原特异性ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品。     

随机引物PCR技术在个体认定及亲权鉴定中的应用

随机引物ＰＣＲ技术（ＡＰ－ＰＣＲ）检测人ＤＮＡ指纹图用于法医学个体认定及亲权鉴定是一个非常有效和经济的方法。应用该技术对１００例无关个体ＡＰ－ＰＣＲ的ＤＮＡ指纹进行分析和１０个肯定亲生关系的家庭进行亲权鉴定,结果该技术的个体识别力非常高,亲权鉴定时的非父排除率也很高,且操作简便、快速,是一个值得推广的方法。     

水稻草矮病毒血清学和分子检测方法的比较

将间接ＥＬＩＳＡ、非放射性分子杂交和ＲＴ－ＰＣＲ三种方法应用于水稻草矮病毒（ＲＧＳＶ）的检测。结果表明,利用自制的融合蛋白ＧＳＴ－ＮＣ的抗血清检测ＲＧＳＶ的灵敏度为１ｍｇ鲜重的病株叶片或８４ｎｇ提纯病毒,利用地高辛（ＤＩＧ）标记的ＤＮＡ探针ＮＣ的点杂交方法检测ＲＧＳＶ的灵敏度为５０μｇ病叶或６ｎｇ病毒,而ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度则为１０μｇ病叶或２ｎｇ的病毒,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

甲状腺良、恶性病变中增殖细胞核抗原、P_(53)蛋白与AgNOR的检测及相关性研究

本文应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法及ＡｇＮＯＲ技术对７３例甲状腺良、恶性病变ＰＣ－ＮＡ、Ｐ５３蛋白及ＡｇＮＯＲ进行了检测并对其相关性进行了研究。结果显示①ＰＣＮＡ表达在良、恶性病变中有显著差异（Ｐ＜０．０１）;②ＡｇＮＯＲ颗粒均数及其形态在良、恶性病变中有较显著差异;③ＰＣＮＡ表达与ＡｇＮＯＲ计数呈显著正相关性（Ｐ＜０．０１）;④Ｐ５３蛋白在良、恶性病变中的表达均呈阴性,只是在淋巴结转移灶内呈阳性表达。根据研究我们认为检测甲状腺良、恶性病变中ＰＣＮＡ及ＡｇＮＯＲ颗粒对甲状腺良、恶性病变的鉴别、预后及对临床治疗均有意义     

幽门螺杆菌的基因分型方法及其应用

近几年,有关幽门螺杆菌（ＨＰ）基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括：质粒分型、限制性内切酶分型（ＲＥＡ）、核糖分型、染色体ＤＮＡ脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型、任意引物ＰＣＲ（ＡＰ－ＰＣＲ）分型、ＰＣＲ单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于ＨＰ的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机     

PCR法检测外环境水中脊髓灰质炎病毒I型基因的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测外环境水中分离的脊髓灰质炎病毒Ｉ型（ＰＶＩ）毒株基因型,发现所分离的２２株病毒,均为疫苗ＳａｂｉｎＩ相关株,脊髓灰质炎病毒的温度敏感（Ｔ特征）试验亦提示为弱毒标,与ＰＣＲ试验相吻合,表明实施强化免疫和常规免疫后,外环境中的脊髓灰质炎病毒已被疫苗相关株循环所取代,同时证实用了ＰＣＲ作为相环境中ＰＶＩ病毒株的基因型分析的检测方法是特异和敏感的。     

梅毒实验室诊断的分子生物学方法

本文综述了梅毒的实验室诊断的分子生物学方法,特别是多聚酶链反应（ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹等新的分子生物学检测技术在诊断早期梅毒、先天性梅毒和神经性毒素等方面的研究进展,着重讨论了ＰＣＲ诊断梅毒的多方面情况,并对ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术与经典兔感染试验进行了评价。