腺病毒载体衣壳蛋白质的遗传修饰

腺病毒载体是最早用于基因治疗研究的病毒载体之一,也是目前肿瘤基因治疗中最为常见的病毒载体之一,其主要通过靶细胞表面的天然柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)感染宿主细胞。由于大多数肿瘤细胞表面该受体表达水平较低,降低了腺病毒载体对靶细胞的感染效率,从而制约了腺病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用。因此,如何提高腺病毒载体对靶细胞的感染效率是腺病毒载体应用于肿瘤基因治疗的关键。目前对腺病毒载体衣壳蛋白质(capsid protein)的遗传修饰是提高其对宿主细胞感染效率的主要途径。本文将对这一领域的主要研究进展作一综述,为该方面的研究提供有用的信息。     

人类腺病毒受体的研究进展

腺病毒受体的研究近十几年来得到迅速发展,人们对腺病毒受体的研究兴趣主要源于使用腺病毒载体所进行的基因治疗.随着多个腺病毒受体相继被发现和鉴定(表1),对腺病毒感染细胞的过程有了进一步的认识和理解.例如,腺病毒5型(Ad5)已被用作基因治疗的载体,但不能有效地感染受体低表达的细胞[1].人们通过修饰腺病毒载体中与受体结合的相应部位,提高基因传递的效率,使腺病毒载体在基因治疗中的作用不断完善.本文就已经鉴定的腺病毒受体和相应配体在腺病毒进入细胞时所发挥的作用加以综述.     

腺病毒载体及其在基因治疗研究中的应用

腺病毒载体在基因治疗研究中初露锋芒,引起关注,文章就腺病毒基因组的基本结构、腺病毒载体的类型及构建、重组腺病毒在基因治疗研究中的应用及其主要优、缺点等方面进行了较为全面的综述．     

关于腺病毒载体的免疫原性问题

关于腺病毒载体的免疫原性问题姜志龙陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心,上海２０００２５）关键词腺病毒载体免疫原性基因治疗近年来,以腺病毒为基因转移载体的基因治疗研究正广泛深入地开展,这是因为腺病毒具有逆转录病毒载体不具备的诸多优点。首先腺病...     

腺病毒的标记方法

腺病毒载体具有滴度高、容量大及可以同时感染分裂与未分裂细胞等一系列优点,因此在基因治疗领域得到广泛应用。腺病毒颗粒的标记对于腺病毒生物学功能的基础研究及评估腺病毒载体的基因治疗效果具有重要意义。本文通过综述腺病毒标记的方法,回顾腺病毒标记技术的发展过程,同时期望为找到更好的标记腺病毒的方法以及其在基因治疗研究领域的进一步应用提供一些思路。     

腺病毒载体介导的HPV16E7基因沉默及其对宫颈癌CaSki细胞的影响

目的:构建利用RNA干扰技术沉默HPV16E7基因的腺病毒载体,并探讨其对人宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响,以及腺病毒载体在宫颈癌基因治疗中的可行性。方法:利用腺病毒载体介导的RNA干扰对CaSki细胞中HPV16E7蛋白的表达进行抑制。显微镜观察细胞病变情况。MTT实验用来检测腺病毒载体感染的CaSki细胞的增殖情况。结果:成功构建了用以介导CaSki细胞中HPV16E7基因沉默的腺病毒载体。腺病毒感染后的CaSki细胞发生典型病理变化,HPV16E7基因表达受到明显抑制,细胞分裂明显减慢。结论:腺病毒载体介导的RNA干扰能够特异性的沉默HPV16E7基因,抑制CaSki细胞的增殖,为腺病毒载体用于宫颈癌基因治疗的可行性提供了依据。     

基因治疗中的动物病毒载体

动物病毒载体在基因转移和治疗中有着重要意义。逆转录病毒载体是目前用子基因治疗最为成功的,已用于多种病例的临床研究;腺病毒载体成功地对多种基因进行了转移,并用于囊性纤维病的基因治疗临床研究;腺病毒相关病毒载体和单纯疤疾病毒载体介导的基因转移在体外培养细胞和动物实验中都取得成功,在某些疾病的基因治疗中显示出特殊的应用价值。     

腺病毒载体在肿瘤靶向性基因治疗中的应用

近年来,腺病毒载体广泛应用于恶性肿瘤的靶向性基因治疗。对传统腺病毒载体的改造主要有以下策略：(1)通过改变腺病毒的嗜性(tropism),使之具有感染宿主细胞的靶向性;(2)在转录水平控制外源性基因的表达;(3)可选择性裂解肿瘤细胞的有复制能力的腺病毒(replication-competent adenovirus,RCA)。更多安全、高效的靶向性腺病毒载体将应用于肿瘤基因治疗中。     

腺病毒载体研究新进展

近年来,病毒载体尤其是腺病毒载体的研究成为治疗研究中的一个热点。本综述了腺病毒载体的构建和应用方面的最新进展,表明腺病毒载体是基因转移的重要手段,具有众多的优点,在基因治疗领域具有广阔的应用前景。     

人腺病毒工程化应用研究进展

人腺病毒流行广泛,感染常诱发呼吸道疾病、流行性结膜炎等疾病。腺病毒是研究较为深入的一类病原体,并且作为病毒载体已广泛应用,也是基因治疗最常用的病毒载体,尤其在肿瘤基因治疗和病毒溶瘤方面具有较大的研究价值和临床应用潜力。文中对腺病毒的生物学特性以及应用范围等方面进行综述,以期为腺病毒的工程化与临床应用提供参考。     

腺病毒载体的免疫反应与免疫调节

重组腺病毒载体因在体内能高效感染广泛的细胞类型而成为目前ｉｎｖｉｖｏ基因治疗的一个颇具吸引力和极有前途的载体,但机体对腺病毒载体产生的抗原特异性细胞免疫和体液免疫反应使腺病毒介导的外源基因仅能短暂表达。     

腺病毒载体在基因治疗和疫苗研究中的应用

自从二十世纪五十年代开始认识腺病毒（Adenovirus）以来,对腺病毒的生物学和免疫学特征已经有比较多的认识。腺病毒科包括禽腺病毒属（Aviadenovius）和哺乳动物腺病毒（Mastadenov irus）两个属。除人腺病毒以外,一些哺乳动物的腺病毒和禽腺病毒也成为基因治疗和载体疫苗研究的热点,如猪腺病毒3型（PAV-3）、牛腺病毒3型（BAV-3）、绵羊腺病毒（Ovine adenovirus,OAV）、禽腺病毒（Aviadenovirus）、犬腺病毒（Canine adeno virus,CAV）和黑猩猩腺病毒（Chimpanzee adenovirus）。不同种属的腺病毒虽然基因组序列完全不同,但其结构和功能却非常相似,而且各型腺病毒之间很少有交叉免疫反应,这就为利用这些腺病毒研制基因治疗载体和活载体疫苗提供了丰富的材料。近年来的研究也发现,如果利用一种腺病毒载体来进行重复免疫,宿主针对腺病毒载体蛋白的免疫反应比较强大,造成转基因表达时间缩短,重复免疫的效果较差,换用不同的病毒载体,则可以回避这种免疫反应,提高转基因的表达时间和保护性免疫反应。腺病毒可以感染很多分裂期或静止期细胞,即使在一些高度分化的组织细胞中也可增殖,如可有效的感染肌肉组织、心、肺和脑组织,并能高效的复制、表达其基因产物,因此腺病毒成为基因治疗和活病毒载体疫苗研究的首选工具。     

腺病毒及腺病毒相关病毒载体与基因治疗

腺病毒及腺病毒相关病毒能感染增殖与静止的细胞,宿主范围广,其稳定,安全滴度高,转染效率高,腺病毒载体能承载较大的外源基因,腺病毒相关病毒载体能定向整合入靶细胞基因组内等特点,使腺病毒及腺病毒相关病毒载体成为体内用于基因治疗的理想运载系统。     

基因治疗新进展：腺病毒载体介导的人类基因治疗

腺病毒（Ａｄ）用作基因治疗载体近年来受到高度重视，成为高科技前沿领域的一大研究热点和重点，是基因治疗的新进展。本文重点介绍了Ａｄ载体介导的基因治疗原理、操作步骤及研究现状，并指出了Ａｄ用作基因治疗载体的优势、存在的问题及解决措施。     

基因治疗怎样避免免疫反应

基因治疗怎样避免免疫反应基因治疗是常用没有复制能力的残损病毒如工程腺病毒作载体把治疗用的基因导入患者细胞的,但免疫系统不能区别残损病毒与完整病毒,会杀灭所有已受工程腺病毒感染的细胞,而且,免疫反应还产生中和腺病毒的抗体,所以,免疫反应是基因治疗的最大...     

肿瘤基因治疗中腺病毒载体改造热点

在病毒介导的肿瘤基因治疗的研究中,腺病毒具有多种优点使其成为基因治疗中使用最多的载体之一.但腺病毒也存在许多问题迫使科学家们去不断的优化它,以达到更好的治疗效果.其中对腺病毒外壳蛋白的改造、对腺病毒基因组的改造以及使用化学修饰剂对腺病毒进行修饰改造一直是研究的热点,本文就对腺病毒改造的热点研究及取得的新成果作一评述.     

腺病毒载体的高分子修饰

腺病毒载体是基因治疗的常用载体之一,已经广泛应用于肿瘤和遗传疾病等的基因治疗研究中.但是临床发现腺病毒载体有较高的免疫原性,同时缺乏组织或细胞特异性,制约了其在临床上的应用.通过共价键结合或者静电力作用,将高分子修饰到病毒衣壳上,利用高分子的特殊性质可以降低载体的免疫原性和提高载体的靶向性,同时载体保持了较高的转染能力...     

E1/E3缺失型腺病毒载体引起细胞周期G_2/M阻滞

腺病毒载体广泛应用于基因治疗和转基因研究 ,目前常用的E1 E3缺失型复制缺陷腺病毒载体虽然失去了病毒复制必需的E1基因 ,但载体上的其它病毒基因仍能在宿主细胞内表达 .为研究这些基因对细胞的毒性作用 ,选择了 3种携带没有明显细胞毒性外源基因的腺病毒载体 ,观察感染 2种肿瘤细胞后细胞核形态改变 ,并用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况 .发现大剂量重组缺陷型腺病毒感染细胞后引起细胞变圆 ,核增大 ,细胞周期阻滞于G2 M期 ,继而染色质凝聚 ,细胞发生坏死或凋亡 ;各种腺病毒载体造成G2 M阻滞所需感染量不同 ,但都随时间延长和感染量增加而加重 .这些结果提示腺病毒基因对细胞的影响是多方面的 ,在以此类病毒载体进行基因转移和基因治疗的研究中 ,精确滴定病毒滴度和转导效率非常重要 ,腺病毒基因表达造成的毒副作用给此类研究增加了变数     

腺病毒载体的细胞导向性基因转移

腺病毒（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ,Ａｄ）载体广泛应用于基因治疗,其主要特征之一是能高效地进行各种组织如肺上皮、肝、肌肉、胰岛、胆囊等的体内（ｉｎｖｉｖｏ）基因转移。然而,因其混杂的向性而引起的全身体内基因转导后治疗基因不受组织限制的表达,限制了它在基因治疗中的应用,因此希望改变腺病毒的天然向性,而使治疗基因导向转移到选择的细胞类型中。目前腺病毒载体细胞导向性的基因转移可通过（１）修饰腺病毒载体的细胞表面识别成分,限制腺病毒导向性感染选择的细胞类型;（２）腺病毒载体中导入组织特异性启动子,控制治疗基因…     

腺病毒载体有效性和安全性的改进

论述了如何改进腺病毒载体以提高其有效性和安全性.腺病毒载体是将基因转移到体内多种不同细胞的有效运载工具.第一代腺病毒载体已证明在基因治疗中有很好的前途, 虽然它在有效性和安全性方面还存在不足之处,但这些局限正在被逐步克服.