泛肽、核糖体蛋白及泛肽-核糖体蛋白S27a与肿瘤的关系

泛肽-核糖体蛋白S27a(Ubiquitin-ribosomal protein S27a,UBRS27a)是泛肽和核糖体蛋白的融合蛋白,N端为泛肽,C端由含C2-C2型锌指结构域的高度保守核糖体蛋白S27a构成。在真核细胞中表达时,被酶解成泛肽和核糖体蛋白。该多功能核糖体蛋白在各种活性增殖细胞和瘤组织中高度表达,在多种类型的肿瘤细胞中,该基因的过量表达是一个典型特征。本实验室对该蛋白在家蚕中的作了初步研究,也发现RPS27a在活性增殖细胞中表达量很高。大多数核糖体蛋白的功能还没有完全探明,它们不仅仅在组装成核糖体时起作用,往往还有核糖体外的功能。回顾了最近几年有关该融合蛋白以及与它相关的泛肽途径、核糖体蛋白与肿瘤之间的关系。通过对它们的研究,有可能预示肿瘤的发生和发展,并为肿瘤临床诊断提供依据,为恶性肿瘤的治疗提供靶点。     

核糖体蛋白基因表达与肿瘤的关系

核糖体蛋白是组成核糖体的主要成分,在细胞内蛋白质生物合成中发挥重要作用。近来人们发现,核糖体具有参与DNA修复、细胞发育调控和细胞分化等核糖体外功能。并且在胃癌、结直肠癌、食管癌和肝癌等肿瘤组织中一些核糖体蛋白基因高表达,通过对肿瘤组织中核糖体蛋白基因高表达的深入研究,可以进一步阐明肿瘤发生、发展的机制,了解核糖体蛋白基因高表达在恶性肿瘤中的作用,为肿瘤的基因诊断和基因治疗开辟一个新的研究领域。     

泛肽与植物逆境响应

泛肽（ubiquitin）是存在于真核生物中的,含76个氨基酸残基的高度保守的小肽。泛肽途径是真核细胞选择性降解蛋白质的一种途径,它需要E1、E2、E3及26S的蛋白降解体来完成。植物在多种逆境下,都有泛肽途径中某些组分的上调或下调表达。     

黄鳝性腺高表达的核糖体蛋白基因

采用高密点阵技术从黄鳝雄性性腺cDNA文库中获得8个克隆,序列分析和BLAST结果显示它们编码的蛋白质分别与40S核糖体蛋白S4,S9,S16,S17,S20和60S核糖体蛋白L7, L18a,L29高度同源。 根据黄鳝RP蛋白序列和其他物种的相应同源序列构建ML系统发生树,显示核糖体蛋白基因在进化中高度保守。核糖体蛋白基因不仅可作为分子进化分析的有利工具,而且从它们的表达模式显示RP基因除具有看家基因的功能外,很有可能参与包括性腺分化等过程的发育调控。Abstract: 8 cDNA clones have been isolated from a cDNA library prepared from swamp eel testies by macroarray. DNA sequence analysis and database search showed that they encode 8 proteins which are highly homologous to 40S ribosomal proteins S4,S9,S16,S17,S20 and 60S riobosomal proteins L7, L18a,L29. Phylogenetic trees (ML) based on ribosomal protein genes from swamp eel and other organisms has been reconstructed, which showed that ribosomal protein genes were highly conserved during evolution. These results suggested that ribosomal protein genes as house keeping genes may play roles in developmental regulation such as sexual differentiation and can also be used as markers for the study of molecular evolution.     

克隆、表达及纯化核糖体蛋白S6用于体外激酶活性检测

目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定。方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果:酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论:S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。     

泛肽系统的组成和功能(一) 一 系统组成 底物识别与蛋白质泛肽化

泛肽(Ubiquitin 简称Ub)是一个由76个氨基酸残基组成的非常保守的小蛋白质。泛肽依赖性的蛋白质降解途径(Ubiquitin-dependebt proteiytic pathway)是目前已知的最重要的、有高度选择性的蛋白质降解途径。泛肽系统由Ub、Ub活比酶、Ub结合酶、Ub-蛋白质连接酶、Ub-C末端水解酶和26S蛋白酶体组成。本文详细地介绍了泛肽系统各个组成部分的种类、结构与功能,蛋白质泛肽化及其降解机制和底物识别模式。     

核糖体单链失活蛋白在无细胞体系中的活性

核糖体单链失活蛋白是一类广泛分布于植物中的蛋白质,它能使真核细胞核糖体60S亚基失活。本文报道了一些核糖体单链失活蛋白的制备、纯化以及在兔网织红细胞裂解液中对蛋白质生物合成的抑制活性及它们对完整细胞的毒性。其中多数的核糖体单链失活蛋白是首次被分离纯化并对其毒性进行研究的。     

重组靶向核糖体失活蛋白luffin-α-NGR的制备及抗肿瘤活性评价

将丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-α与肿瘤靶向肽NGR融合,制备luffin-α-NGR重组蛋白,并检测其对肿瘤细胞与血管生成的抑制活性.通过引物设计及PCR扩增获得luffin-α-NGR融合基因,与pGEX-6p-1载体连接后获得pGEX-6p-1/luffin-α-NGR重组质粒,质粒转入大肠杆菌(Escher...     

核糖体蛋白rpS6在核仁中的定位与其磷酸化无关

核糖体蛋白S6(rpS6)是核糖体小亚基40S的一个组成成分。在该研究中,利用免疫荧光和邻位连接技术证明rpS6不仅是核糖体小亚基的组成成分,而且还可与核仁中的U3核蛋白复合体的标志性蛋白Mpp10共定位并且存在相互作用。rpS6蛋白的C端有5个丝氨酸磷酸化位点,为了研究rpS6蛋白在核仁中的分布是否与其磷酸化有关,构建了rpS6蛋白的两个突变体rpS6A和rpS6D分别与EGFP和HA的融合蛋白。rpS6A是将C端的5个丝氨酸位点全部突变为丙氨酸;rpS6D是将C端的5个丝氨酸位点全部突变为天冬氨酸。研究表明:rpS6、rpS6A和rpS6D与EGFP和HA的融合蛋白均可分布在核仁中,与内源性rpS6蛋白的分布情况一致,说明rpS6蛋白在核仁中的定位与其磷酸化无关,为探索rpS6蛋白在核仁中的功能奠定了良好的基础。     

研究: 核糖体失活蛋白及其在黄瓜中的表达分析

核糖体失活蛋白是一类具有高度特异性rRNA N-糖苷酶活性的蛋白,它们能够使原核或真核细胞的核糖体失活因而具有细胞毒性．由于其独特的生物学性质,核糖体失活蛋白被认为在农业和医学中都有着巨大的应用潜力．我们之前的研究表明,黄瓜的基因组中共包含2个2类核糖体失活蛋白基因,分别命名为CumsaAB1和CumsaAB2．以蓖麻毒蛋白Ricin为代表,2类核糖体失活蛋白通常由2条二硫键连接的肽链组成：具有N-糖苷酶活性的A链与具有凝集素活性的B链．本文研究了黄瓜中核糖体失活蛋白的表达情况．亚细胞定位研究表明CumsaAB1经过蛋白分泌通路表达于细胞外,这与蛋白质序列分析显示的CumsaAB1包含一个信号肽而不含转膜区域相一致．对黄瓜的不同生长阶段的不同组织中的转录水平分析表明,CumsaAB1在大部分组织中以极低的水平表达,而CumsaAB2表达水平则明显更高,尤其在第一片真叶阶段和刚开花的植物中．最后,我们使用分子模拟对黄瓜中核糖体失活蛋白的结构及糖结合位点进行了分析．本研究对黄瓜中核糖体失活蛋白的亚细胞定位、表达水平和可能的蛋白质结构进行了研究,为其进一步的生物学功能研究提供了重要信息．     

细胞周期决定核糖体蛋白S6在真核细胞核仁中的聚积

核糖体蛋白S6（rpS6）是核糖体40S小亚基的核心组成蛋白之一。研究表明,rpS6可以通过核定位信号进入细胞核中,在核仁中参与核糖体的组装。在该研究中发现,rpS6在高等真核细胞核仁中的聚积与细胞周期有关,rpS6在S期中晚期开始在核仁中聚积,G2期含量达到最高,M期核仁分解时消失。推测,rpS6在核仁中的这种分布特性可能与核糖体的合成随细胞周期变化有关。     

非核糖体肽合成酶工程改造研究进展

非核糖体肽合成酶合成的非核糖体肽类天然产物具有丰富的结构和多样的功能,在医药、农业、工业等领域具有广泛的应用潜力。利用合成生物技术工程改造非核糖体肽合成酶,在微生物细胞工厂中组合生物合成新型非核糖体肽分子顺应绿色化学的发展理念,是国内外学者关注的热点。文中归纳了3种不同的非核糖体肽合成酶工程改造策略,并对近年来相关领域的研究进展进行综述。     

核糖体蛋白的核糖体外功能

核糖体蛋白的核糖体外功能关键词核糖体蛋白功能近年来发现,在核糖体蛋白中存在着可与ＤＮＡ结合的特征结构。人们由此推测,由核糖核酸（ＲＮＡ）转变为核蛋白体的核糖体可能是在ＲＮＡ上添加一些本来就存在的蛋白后形成的。人们还观察到,多种核糖体蛋白除组成核糖体外...     

核糖体蛋白S6激酶β1的分子结构和理化性质分析

核糖体蛋白S6激酶β1(Ribosomal protein S6 kinaseβ1,RPS6KB1)是一个有价值的肝癌诊断和预后标志物,也是一个潜在的基因治疗分子靶点,但其致癌机制和预后价值仍未完全阐明。为了全面认识RPS6KB1,本文使用生物信息学手段,对RPS6KB1蛋白的序列同源性、组织表达、亚细胞定位、理化性质、空间结构及蛋白质相互作用网络进行分析。结果表明人RPS6KB1基因编码525个氨基酸组成的多肽,在进化过程中高度保守,属于PKc_like超家族,是酸性不稳定的亲水蛋白,无信号肽和跨膜区域。该蛋白定位于细胞核的可能性最大,主要二级结构为随机卷曲,存在磷酸化、乙酰化和泛素化位点。与RPS6KB1相互作用的蛋白主要是m TOR信号途径相关蛋白、PI3K信号途径相关蛋白、蛋白质合成相关蛋白以及调控胰岛素水平相关蛋白。本文结果为进一步研究RPS6KB1的功能及致癌机制提供一定的参考。     

核糖体失活蛋白的结构功能与分布

核糖体失活蛋白是一类在植物中较广泛存在的毒蛋白。植物核糖体失活蛋白具有RNAN-糖苷酶活力,可作用于核糖体RNA,使核糖体失去蛋白质合成的功能。根据一级结构,核糖体失活蛋白可分为两种类型。Ⅰ型核糖体失活蛋白由一条链组成,分子量在25—30 kDa之间。Ⅱ型核糖体失活蛋白由两条以二硫键相连的链(A、B链)组成,分子量在60 kDa左右。B链可以与细胞表面含半乳糖的受体结合,有助于A链进入细胞,作用于核糖体。目前至少已从9个科31种植物中分离纯化了Ⅰ型RIP。Ⅱ型RIP较少,仅在6科8种植物中发现。除了具有RNA N-糖苷酶活性,还发现一些核糖体失活蛋白可以切割超螺旋双链DNA,产生缺口环状和线状DNA。此外,一种Ⅰ型RIP,克木毒蛋白还具有超氧化物歧化酶活性。     

非核糖体肽的生物合成研究进展

非核糖体肽(nonribosomal peptide, NRP)是由多种微生物通过非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetase, NRPS)等催化合成的一类小分子多肽类次级代谢产物,具有抗菌、抗肿瘤、免疫抑制等多种生物活性,是一类重要的微生物药物,具有很高的临床应用价值。从目前已发现的小分子多肽类天然药物出发,综述了该类物质的生物功能、合成组装机制以及近年来在工程改造方面的进展,并提出了未来研究发展方向,对进一步通过组合生物合成等方式高效合成更多种类的小分子多肽类活性物质具有借鉴意义。     

泛肽系统的组成和功能(一)—系统组成、底物识别与蛋白质泛肽化

泛肽（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ,简称Ｕｂ）是一个由７６个氨基酸残基组成的非常保守的小蛋白质。泛肽依赖性的蛋白质降解途径（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ＿ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｐａｔｈｗａｙ）是目前已知的最重要的、有高度选择性的蛋白质降解途径。泛肽系统由Ｕｂ、Ｕｂ活化酶、Ｕｂ结合酶、Ｕｂ＿蛋白质连接酶、Ｕｂ＿Ｃ末端水解酶和２６Ｓ蛋白酶体组成。本文详细地介绍了泛肽系统各个组成部分的种类、结构与功能,蛋白质泛肽化及其降解机制和底物识别模式。     

核糖体蛋白参与调控p53诱导活化的分子机制

核转录因子p53是重要的肿瘤抑制因子,具有DNA损伤修复、促细胞凋亡、促细胞分化及增殖抑制等功能,并通过调控细胞周期行进和促进细胞凋亡发挥肿瘤抑制功能。原癌蛋白MDM2为p53的E3泛素化连接酶,MDM2－p53信号轴的功能异常与多种恶性肿瘤的发生发展相关。核糖体蛋白（RP）是蛋白质合成反应的关键调节蛋白,其功能失常与多种疾病相关。近年来的研究发现,RP能通过调节MDM2－p53信号轴在p53相关性肿瘤调控中发挥重要作用。我们根据目前的研究进展,对RP－MDM2－D53信号轴进行简要综述。     

游仆虫重组核糖体蛋白L11与肽链释放因子的体外相互作用分析

核糖体蛋白L11(ribosome protein L11)是一种高度保守的蛋白质．为研究真核生物的核糖体蛋白L11的功能,从八肋游仆虫（Euplotes octocarinatus）大核基因组中克隆到核糖体蛋白L11基因,构建了重组表达质粒pGEX-6p1-L11,通过谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,纯化了重组融合蛋白GST-L11．Pull down 分析显示,八肋游仆虫的核糖体蛋白L11与第一类肽链释放因子eRF1a可以在体外相互作用．这一结果提示,与原核生物一样,低等真核生物的核糖体蛋白L11在肽链终止过程中可能起一定的作用．     

基于非核糖体肽的文献计量分析

许多临床上的重要抗生素来源于微生物生产的非核糖体肽类天然产物或者聚酮-非核糖体肽杂合体类天然产物,本文选取了近5年Web of Science上关于非核糖体肽的国际期刊文献,采用文献计量、统计分析等方法展示非核糖体肽研究领域的热点方向,探究了该领域的发展趋势,以期为进一步研究提供参考。