Mg2+和Na+对多核酶系统体外切割反应的影响

为了进一步了解2价Mg2+和1价Na+存在与否的情况下,多核酶系统对底物RNA的切割效率,构建了pGEM-Coat'A,pGEM-Coat'A196Rz质粒和pGEM-MDR1靶质粒,通过用SP6/T7转录试剂盒在体外转录RNA,在无细胞系统进行切割反应,反应产物通过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,干胶、x光片曝光自显影,利用Image J生物图像分析软件分析,结果表明,多核酶系统的切割效率依赖于二价Mg2+的浓度,切割产物随Mg2+浓度的增加而增加,而且具有反应时间的依赖性,在Na+浓度低于200 mmol/L且单独存在时,没有切割产物生成,相反,在Na+和Mg2+共存时,表现出Na+抑制Mg2+诱导的切割活性,切割效率明显低于Mg2+单独存在时的结果.这些结果提示,在生理环境下,Mg2+对于多核酶系统对底物的切割反应是必需的,而Na+则不是.     

植物单链核糖体失活蛋白的研究概况

本文扼要地介绍了单链核糖体失活蛋白的植物学分布和一般性质,特别是对无细胞系核糖体蛋白合成的抑制作用,并对其应用和研究前景提出初步看法。     

Mg2+和Na+对多核酶系统体外切割反应的影响

为了进一步了解2价Mg^2＋和1价Na+存在与否的情况下,多核酶系统对底物RNA的切割效率，构建了pGEM Coat′A，pGEM Coat′A196Rz 质粒和pGEM MDR1靶质粒．通过用SP6/T7转录试剂盒在体外转录RNA， 在无细胞系统进行切割反应，反应产物通过6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，干胶、X光片曝光自显影，利用Image J 生物图像分析软件分析. 结果表明，多核酶系统的切割效率依赖于二价Mg^2＋的浓度，切割产物随Mg^2＋浓度的增加而增加，而且具有反应时间的依赖性. 在Na+浓度低于200 mmol/L且单独存在时，没有切割产物生成．相反,在Na⁺和Mg^2+共存时，表现出Na⁺抑制Mg2+诱导的切割活性，切割效率明显低于Mg²⁺单独存在时的结果.这些结果提示,在生理环境下,Mg²⁺对于多核酶系统对底物的切割反应是必需的，而Na⁺则不是．     

我国产肥皂草种子活性成分的研究

<正> 肥皂草(Sapdnaria officinalis)石竹科的一种观赏植物,原产欧洲,我国北方庭园有栽培。全草有毒,根和种子毒性较大。家畜大量采食茎叶后出现呕吐、疝痛、下痢等肠胃道症状。根含肥皂草甙(saporubin),有强烈的粘膜刺激和溶血作用。 1983年Stirpe从欧洲产肥皂草的种子分得Saporin,它抑制兔网织细胞裂解液的蛋白     

括楼素的纯化及其免疫毒素的制备

利用凝胶过滤及离子交换层析从Trichosanthes kirilowii Maximowicz种子中分离出一种核糖体失活蛋白,称之为括楼素(Trichokirin)。这种毒素在无细胞体系中对蛋白质生物合成具有明显的抑制活性而对完整细胞的毒性很低。与单克隆抗体偶联后,括楼素对靶细胞显示了明显的特异性细胞毒作用。     

siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP1)的表达沉默

利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白（MRP1）基因表达质粒pSI REN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断MRP和全长MRP1 cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒．质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因，pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明，与pSIREN-siRNA1相比，pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达．为了沉默全长MRP1基因的表达，pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞．Western印迹和MTT分析表明，pSIREN-siRNA2和pSIREN- siRNA3能有效抑制190 kD MRP1在HEK293细胞中的表达，而pSIREN-siRNA1则不能．pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性．RNA二级结构预测结果分析表明，siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数，siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3．这些数据提示，siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用．     

核糖体单链失活蛋白在无细胞体系中的活性

核糖体单链失活蛋白是一类广泛分布于植物中的蛋白质,它能使真核细胞核糖体60S亚基失活。本文报道了一些核糖体单链失活蛋白的制备、纯化以及在兔网织红细胞裂解液中对蛋白质生物合成的抑制活性及它们对完整细胞的毒性。其中多数的核糖体单链失活蛋白是首次被分离纯化并对其毒性进行研究的。     

重组蓖麻毒素A链与几种天然单链核糖体失活蛋白的活性研究

采用ｐＥｘＳｅｃⅠ载体系统进行了蓖麻毒素Ａ链的原核表达,经ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ一步纯化后,获得了纯度约８０％的重组蓖麻毒素Ａ链．将其与几种天然单链核糖体失活蛋白进行了超螺旋ＤＮＡ裂解研究和无细胞体系中蛋白合成抑制试验,结果表明,重组蓖麻毒素Ａ链具有类似于天然单链核糖体失活蛋白的活性,但两种测活方法之间没有明显的相关性