对流免疫电泳快速测定白喉杆菌毒力

鉴定新分离的白喉杆菌,或检查由人群中白喉杆菌带菌者所分离的菌株时,毒力实验常作为致病能力的最后依据。测定白喉杆菌的毒     

细胞壁缺陷白喉棒状杆菌致病作用的观察及其毒力基因检测

目的比较白喉棒状杆菌亲代细菌型及其稳定L型动物致病性的差异,了解白喉棒状杆菌稳定L型变异的特点,探讨其变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。方法用氨苄青霉素在非高渗培养基内人工诱导产毒性白喉棒状杆菌为稳定L型。采用白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物皮内感染家兔,观察局部感染部位皮肤或全身的病理改变。采用微量法提取白喉棒状杆菌稳定L型的染色体DNA,用Tox基因特异性引物进行PCR扩增以检测毒素蛋白结构基因,并进行序列测定和分析。结果白喉棒状杆菌在氨苄青霉素作用下可发生细胞壁缺陷而成为L型,白喉棒状杆菌稳定L型不能引起动物局部或全身发生异常表现,该稳定L型的传代培养物可仍然保留同其亲代细菌型一致的Tox基因及其核苷酸序列。结论提示细胞壁缺失将导致白喉棒状杆菌与产生毒素蛋白有关结构基因在宿主菌细胞内的表达受到抑制,以致使白喉棒状杆菌稳定L型丧失了产生外毒素致病的作用。     

细胞壁缺陷对白喉棒状杆菌致病性影响的研究

检测白喉棒状杆菌稳定L型对动物的致病性,探讨细胞壁缺陷对白喉棒状杆菌致病性的影响及其可能的分子机制。采用氨苄青霉素在非高渗培养基内诱导并获得产毒性白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物。收集白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物,将收集的高于细菌型10 000倍浓度的白喉棒状杆菌稳定L型纯培养物及其代谢产物皮内注射家兔,观察局部注射部位皮肤或全身的病理改变。分别采用对流免疫电泳(CIEP)和SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测白喉棒状杆菌稳定L型可溶性代谢产物中的白喉毒素蛋白质。结果显示,白喉棒状杆菌稳定L型不能引起动物局部或全身发生异常表现,在其可溶性代谢产物中并未检测到白喉毒素蛋白质。提示细胞壁缺陷变异可影响白喉棒状杆菌产生白喉毒素蛋白质,从而使其丧失了产生外毒素致病的作用。     

关于鱼类对白喉杆菌免疫反应的看法

在我们进行白喉杆菌对斗鱼的毒力试验中,发现斗鱼(Macropodus spp.)对白喉杆菌毒素敏感。注射白喉杆菌生理盐水悬浮液后,有92%的斗鱼在72小时内死亡。但还有8%存活,说明它能获得人工自动免疫。如果在注     

蛋黄琼脂培养基用于白喉杆菌的培养

白喉,是一种严重影响人民健康的传染病。白喉杆菌的分离培养,是准确诊断以及进行流行病学调查的重要手段。自从吕氏血清斜面、白氏鸡蛋斜面及血碲盐平板等培养基应用以来,对白喉杆菌的检查和研究,起了重要的推动作用和良好效果。在上述培养基的基础上,我们加以简化,制成蛋黄琼脂培养基,现介绍如下:     

疫苗

一白喉杆菌菌株已被分离和定性,它包含拼接人其染色体内的二类棒状噬菌体基因。该菌株产生和分泌大量的白喉类毒素CRM45,这是白喉类毒素的一种无毒、的先成熟的末端片段,该片段可参与嵌合性毒素的构成。(邓永鸿;郭殿瑞)忿     

杀伤血管内皮生长因子受体 1 阳性细胞的靶向毒素

白喉毒素 (diphtheria toxin DT) 是棒状白喉杆菌被β噬菌体感染后分泌的一种外毒素. 它可以阻断真核细胞的蛋白质合成,杀死细胞. 血管内皮生长因子 (VEGF) 的 R82A, K84A, H86A 突变体可以和肿瘤血管上高表达的 VEGF 受体 1 (VEGFR-1) 特异性结合. 首先从白喉杆菌中提取基因组 DNA,扩增出白喉毒素 C 区、 T 区基因. 并运用点突变技术,制成 VEGF 的 R82A, K84A, H86A 突变体. 利用这个可以和肿瘤血管上特异性受体相结合的 VEGF 的突变体,代替白喉毒素上的受体结合区,制成了针对 VEGFR-1 的靶向融合毒素——— DT391-mVEGF. 以去除了受体结合区的 DT391 为阴性对照,细胞实验表明,融合毒素对 VEGFR-1 阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用.     

网纹甜瓜发育果实糖分积累与蔗糖代谢参与酶的关系

随着网纹甜瓜果实的发育,果实中葡萄糖和果糖的含量增加,蔗糖的快速积累发生在果实发育的中后期,高蔗糖积累型果实中蔗糖积累速率明显快于低蔗糖积累型.蔗糖磷酸合成酶活性在果实发育的前期短暂下降, 而后稳步上升,在果实发育的中后期高蔗糖积累型果实中该酶的活性显著高于低蔗糖积累型果实;随着果实发育,蔗糖合成酶的分解活性降低而合成活性升高.酸性和中性转化酶在未成熟果实中活性较高,而在成熟果实中很低; 高蔗糖积累型果实中酸性转化酶活性显著低于同期低蔗糖积累型果实.合成蔗糖的酶活性小于分解蔗糖的酶活性时蔗糖几乎没有积累.根据这些结果推测,转化酶活性的下降、蔗糖磷酸合成酶活性的增加以及蔗糖合成酶分解活性的下降和合成活性的增加,是引起果实蔗糖积累的主要内在因子.     

细菌L型对化学因素敏感性研究

本文研究了伤寒沙门氏菌、葡萄球菌及白喉棒状杆菌L型对化学消毒剂、细菌生长抑制剂、酸和碱的敏感性,并与其亲代细菌型作了比较。结果表明:细菌L型对表面活性剂、酚剂、重金属盐、脱水剂、卤素及氧化剂的敏感性明显(P<0.05)或不明显(P>0.05)增加,伤寒沙门氏菌L型对龙胆紫、玫瑰色酸、胆盐及酸的敏感性增高,葡萄球菌及白喉棒状杆菌L型对龙胆紫、玫瑰色酸、胆盐及酸的敏感性降低,伤寒沙门氏菌及白喉棒状杆菌L型对碱敏感性降低。     

白喉杆菌高产毒株的筛选

白喉杆菌PW8株是各国通用的制造白喉毒素的菌株,具有较高的自然变异性,一些作者曾从该株分离培养出产毒能力较高的次代菌株。为了获得产毒能力更高的菌株,我们用逐步单颗集落筛选法,从白喉杆菌PW8-     

现代细菌感染的变迁

18 77年德国学者 Robert Koch发现了人类历史上的第一个病原菌——炭疽芽胞杆菌 (B.anthracis)。此后 ,许多可引起人类传染病的细菌陆续被发现 ,这些能引起临床感染的细菌被称为病原菌 (致病菌 )。在 2 0世纪中叶以前 ,引起临床感染的细菌主要是一些对人类生命威胁极大的病原菌 ,例如鼠疫杆菌 (Y.pestis)、霍乱弧菌 (V.chotera)、结核杆菌 (M.tuberculosis)、白喉杆菌 (C.diphtheriae)、化脓性球菌 (Pyog-enic coccus)等。近 5 0年来 ,随着时间的推移 ,社会文明的进步、医疗条件的改善 ,过去那种由典型的病原菌所引起的外源性感染已明显…     

白喉杆菌67-72P血凝素有助于侵染和诱导Hep-2细胞凋亡

<正>尽管白喉杆菌已作为一种专门的细胞外病原体而被经典地描述过,越来越多的证据表明它能够被上皮细胞内在化,此文作者的目的是研究表面暴露的非菌毛性67-72 kD蛋白的特性和其所涉及到的问题。以往是将其作为黏附素/血凝素而进行鉴定的(在白喉杆菌被HEp-2细胞内存化过程中)。透     

白喉菌株主要抗原基因遗传稳定性及相应抗原蛋白结构确证的研究

对白喉棒状杆菌（Corynebacterium diphtheria）主要保护性抗原基因序列的遗传稳定性进行研究,对相应的抗原蛋白结构进行确证,并进一步验证此前一代测序的结果,为疫苗的安全性和有效性提供依据。采用二代测序技术（next generation sequencing, NGS）对白喉棒状杆菌主代代次（P3）、工作代次（P7）、疫苗代次（P12）及疫苗代次后连续传3代的第3代样品V3代次（P15）的主要抗原基因序列进行测序并分析,并用Phyre 2 软件预测出白喉毒素结构与文献发表的白喉毒素结构模型进行比对分析,采用蛋白免疫印迹（Westen blot,WB）试验对蛋白结构进行确证。结果显示,白喉棒状杆菌主要抗原基因序列最高突变率位点,主代代次为A₅₈₀C 0.46%、A₈₆₈C 0.46%,工作代次为A₅₈₀T 0.47%,疫苗代次为T₅₀₇G 0.64%,V3代次为位点T₅₀₇G 0.49%,其中主代代次、工作代次最高突变位点在B肽链的T区（α-螺旋区）内,不是主要抗原表位区;疫苗代次和V3代次最高突变位点在A肽链的C区（催化区）内,是主要抗原表位区域,但突变率较低,小于1%。36个能影响白喉毒素进入细胞和催化活性的碱基位点中,442碱基位点的各代次均比其他位点偏高（0.41%）,其他位点均小于0.45%;蛋白结构模型预测与文献一致,均包含3个结构功能区;WB试验中,在58 kDa处均出现条带,大小与预期一致,说明此蛋白结构正确。传代过程中白喉主要碱基位点突变率较低,结构正确,说明白喉棒状杆菌菌种基因遗传稳定性好。     

硫酸铜亚碲酸钾鸡蛋琼脂培养基培养白喉杆菌的实验观察

在白喉流行季节,及早发现带菌者并查明传染源,在流行病学上具有重要意义。近年来我们用硫酸铜亚碲酸钾鸡蛋琼脂培养基(简称铜—碲培养基),进行抑制杂菌、分离白喉杆菌的试验,得到了较满意的结果,现报告如下。     

华北落叶松与阔叶树种混合凋落叶分解过程中养分释放和酶活性变化

森林凋落物是森林土壤的重要组成部分,凋落物分解在调控森林生态系统养分循环中发挥了关键作用。采用凋落物分解袋法,研究河北塞罕坝地区华北落叶松与白桦,华北落叶松与蒙古栎,华北落叶松、白桦和蒙古栎混合凋落叶及纯华北落叶松凋落叶分解过程中分解速率、养分释放和酶活性的变化。结果表明: 经过近2年的分解,混合凋落叶分解速率均显著高于纯华北落叶松凋落物叶;在所有处理中,华北落叶松与白桦混合凋落叶分解速率最高。在凋落叶分解过程中,不同处理养分含量变化一致,凋落叶N、P含量呈上升趋势,C、K含量和C/N呈下降趋势;相对纯华北落叶松凋落叶,各混合凋落叶分解可以促进凋落叶C、K的释放,但对N、P的释放有一定的抑制作用。在凋落叶分解过程中,不同处理凋落叶过氧化氢酶、脲酶、酸性磷酸酶活性呈上升趋势,蔗糖酶活性呈下降趋势;凋落叶分解速率与凋落叶过氧化氢酶、脲酶、酸性磷酸酶活性呈正相关,与蔗糖酶活性呈负相关。总体来看,华北落叶松和白桦、蒙古栎凋落叶混合可以促进华北落叶松凋落叶的分解,且凋落叶中酶活性动态变化与凋落叶的分解密切相关。     

破伤风类毒素的有害反应

<正>破伤风和白喉引起严重影响健康的问题遍及全世界。自从在人群及其周围环境中,发现白喉棒状杆菌和破伤风梭状杆菌广泛地存在以来,未免疫人群面临着感染这两种疾病的危险。世界卫生组织估计每年由于破伤风可其并发症引起50多万人的死亡。美国1966～1976年十年间,疾病控制中心的发病     

非高渗透压培养基培养细菌L型的研究

本文用青霉素在高渗透压的L型培养基上,诱导金黄色葡萄球菌和白喉杆菌形成L型后,直接种入无血清亦无渗透压保护剂的非高渗透压培养基中,传代培养和观察其形态、培养及代谢特性。结果表明,金黄色葡萄球菌L型和白喉杆菌L型在非高渗透压培养基中,传代培养后,不能在高渗透压的L型培养基上生长形成菌落。和丧失了对多种糖发酵的能力。     

白喉毒素突变体CRM197在白喉杆菌中的表达纯化

CRM197是一种白喉毒素突变体,第52位的甘氨酸突变为谷氨酸,作为载体蛋白广泛用于疫苗开发。将阐述一种新的生产CRM197方法。将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pCKM4.1中,表达质粒pCKM5.1电转化至大肠杆菌E.coli S17-1中,通过结合转移转化至白喉杆菌(ATCC?27010TM的白喉杆菌)中,载体上的导肽序列可以使得CRM197作为可溶性蛋白分泌到胞外表达,CRM197蛋白可占到菌体总蛋白的70%。增强对铁的调控,进一步优化培养基及发酵条件以提高产量。经过Q膜、硫酸铵沉淀、阴离子交换纯化步骤获得纯度达到95%的CRM197样品,提高了蛋白得率,节约了纯化时间和成本。     

一道试题分析

题目:活细胞不选择食醋中的醋酸,而可以选择蔗糖。用食醋和蔗糖可以将鲜蒜腌制成糖醋蒜,其原因是( )。 A.醋酸与蔗糖分解后被细胞吸收 B.醋酸与蔗糖分子存在于细胞间隙中     

河套蜜瓜果实发育过程中糖积累与蔗糖代谢相关酶的关系

以河套蜜瓜为试材,采用外部形态观测与内部生理指标测定相结合的方法,对其果实发育过程中果实生长模式以及果实中蔗糖、果糖、葡萄糖和淀粉含量以及蔗糖代谢相关酶活性进行测定,以揭示河套蜜瓜果实生长发育过程中糖的代谢积累与相关酶的关系.结果显示:(1)河套蜜瓜果实生长速率呈单"S"曲线,果实发育早期以积累葡萄糖为主,进入成熟期后蔗糖积累量迅速增加,最终由蔗糖和己糖共同构成果实品质.(2)在河套蜜瓜果实成熟期前,蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性维持较低水平,进入成熟期后,SPS活性迅速升高;蔗糖合成酶(SS)活性在成熟期前为分解活性大于合成活性,成熟期后表现为合成活性大于分解活性;在整个果实发育期,酸性转化酶(AI)活性较低,中性转化酶(NI)活性始终高于AI.(3)在果实整个发育期,蔗糖含量与蔗糖代谢酶的净活力呈极显著正相关,蔗糖代谢相关酶共同作用决定果实中蔗糖含量.研究表明,在河套蜜瓜果实发育前期,以蔗糖分解代谢为主,且蔗糖合成酶和中性转化酶是催化蔗糖分解的关键酶;果实成熟期间,蔗糖代谢转为合成方向为主,蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶在蔗糖积累中起主导作用.