蕨菜多酚氧化酶的酶学性质

研究了蕨菜[Pteridium aquilinum (L．) Kuhn var．latiusculum (Desv．) Underw．]多酚氧化酶的动力学性质,结果表明：以邻苯二酚为底物,该酶最适pH为7．4,最适温度为25℃,60℃以上使酶迅速失活,动力学方程v=619．08[S]/(0．031 [S]),Vc、异Vc钠、NaHSO3、L-Cys可完全抑制酶活性,饱和NaCl能显著抑制酶活性,蔗糖、SDS对酶有激活作用。该酶能催化邻苯二酚、焦性没食子酸氧化,但对焦性没食子酸亲和力更强。     

氧化铁鞘细菌铁氧化酶最适产酶条件及其酶学特性的研究

对氧化铁鞘细菌FC990 1菌株的铁氧化酶最适产酶条件及酶学特性进行了研究。菌株最适产酶培养基为 (g/L) :柠檬酸铁胺 10g ,NaNO3 1.2g,MgSO4·7H2 O 0 .5g ,K2 HPO4·7H2 O 0 .5g ,CaCl2 0 .0 15g ,ZnSO4·7H2 O 0 .0 0 0 5g。最适产酶条件为 :温度 30℃ ,起始pH7.0 ,接种量 2 % ,15 0mL三角瓶装 5 0mL ,15 0r/min振荡培养 72h。铁氧化酶最适pH为7.5 ,最适温度为 30℃。金属离子Ca2 、Mg2 、Zn2 对酶有激活和稳定作用 ;Cu2 、Hg2 、Al3 则抑制酶的活性 ;Fe2 、K 、Na 对酶活性影响不明显。     

抑制剂和安全剂对高羊茅根中酶活性和菲代谢的影响

以高羊茅(Festuca arundinacea)为供试植物,利用水培体系研究了抑制剂和安全剂对植物根中过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性以及菲代谢的影响。供试安全剂为浓度0.3%的NaCl,抑制剂为浓度2.00 mg/L的Vc。结果表明,2.00 mg/L的Vc作用下,1—16d,高羊茅根的菲含量显著高于对照处理,而供试安全剂对植物根中菲含量的影响不显著。抑制剂作用下植物根部的PPO和POD活性显著降低;16d,抑制剂作用下的植物根部PPO和POD活性为对照组的1/6和1/9,表现出强抑制效应。而安全剂作用下植物根部PPO和POD活性则略高于对照组,但差异不显著（P＜0.05）。植物体内酶的初始活性是影响植物代谢PAHs菲的关键因素。抑制剂主要通过调节酶活性来影响根系代谢菲,其对植物根中PPO和POD活性的抑制效率与根部菲代谢抑制效率显著正相关。     

多酚氧化酶抑制剂对蝴蝶兰叶外植体褐变的影响

将多酚氧化酶(PPO)抑制剂添加到酶反应液中,抗坏血酸和半胱氨酸在0.5mmol/L就完全抑制蝴蝶兰PPO活性。300mg/L柠檬酸和100~200mg/L亚硫酸氢钠分别添加到培养基中,可使蝴蝶兰外植体褐变程度降低;采用抑制剂浸泡处理外植体,对外植体褐变抑制效果最好的为50mg/L抗坏血酸,外植体在褐变发生前PPO活性低于对照。     

链霉菌Str s-2产木聚糖酶的条件及部分性质研究

通过碳氮源对链霉菌Str s-2产胞外木聚糖酶活性的影响,得出其适宜培养基为(g/L)：含半纤维素20,(NH4)2SO4 4．0,KH2PO4 1．0,MgSO4-7H2O 0．5,NaCl 0．3,CaCO3 1．0。用DNS法研究了该酶的性质结果表明其最适pH值为6．5,最适反应温度为55℃;Na^ 、K^ 、Ca^2 、Mg^2 等离子对酶有激活作用,而Zn^2 、Ag^ 、Fe^3 和Cu^2 离子则抑制酶的活性。     

蛋白酶抑制剂对梨小食心虫幼虫中肠蛋白酶活性的影响

【目的】梨小食心虫Grapholitha molesta(Busck)是一种危害极其严重的果树害虫。中肠蛋白酶在昆虫生长发育过程中起着重要作用。本研究测定梨小食心虫幼虫中肠内蛋白酶活性的最适p H、蛋白酶抑制剂和激活剂对蛋白酶活性的作用,为利用蛋白酶抑制剂防治该害虫提供新思路。【方法】提取梨小食心虫3龄幼虫中肠液,利用酶专性底物测定各蛋白酶在3种不同缓冲溶液中的最适p H(dd H2O为对照)、蛋白酶抑制剂和激活剂对中肠蛋白酶活性的影响,同时测定饲喂蛋白酶抑制剂(PMSF,TLCK,TPCL和STI)后梨小食心虫中肠蛋白酶活性的变化。【结果】梨小食心虫幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl,KH2PO4/Na OH和Glycine/Na OH 3种缓冲液中最适p H分别为10.5,11.0和11.0,强碱性胰蛋白酶的最适p H分别为10.5,11.0和11.0,弱碱性胰蛋白酶的最适p H分别为8.5,9.0和9.0,胰凝乳蛋白酶的最适p H分别为8.5,9.0和9.5。5种蛋白酶抑制剂(DTT,PMSF,TLCK,TPCL和STI)中,除TLCK对凝乳蛋白酶激活外,其他蛋白酶抑制剂对4种蛋白酶均表现为抑制,且浓度越大抑制效应越明显。抑制剂DTT对总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶的抑制效果高于其他抑制剂。4种蛋白酶激活剂(Mg Cl2,Ca Cl2,EDTA和EGTA)中,Mg Cl2抑制总蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性,而激活胰蛋白酶活性;Ca Cl2激活总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶活性,而抑制强碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,EDTA对4种蛋白酶均表现为抑制,EGTA除对强碱性胰蛋白酶表现为激活外,对另外3种蛋白酶表现抑制。用蛋白酶抑制剂PMSF,TLCK,TPCL和STI饲喂梨小食心虫幼虫,各抑制剂均可抑制4种蛋白酶活性,且在不同取样时间抑制水平不同。其中STI(50μg/m L)对4种蛋白酶的抑制效果高于其他抑制剂,且浓度越大抑制效应越明显。10,20和50μg/m L STI 3种浓度处理组,在取食后4 h时,4种蛋白酶活性升高,且上升程度与STI浓度有关;酶活性在20μg/m L STI处理后48 h,50μg/m L STI处理后60 h时最低,抑制剂STI表现出持效性。【结论】蛋白酶抑制剂对梨小食心虫幼虫中肠蛋白消化酶的活性具有一定的抑制作用,其中大豆胰蛋白酶抑制剂STI在害虫防治中具有极其重要的应用价值。     

质膜NADPH氧化酶的活化与H2O2的产生介导内源激发子诱导人参悬浮细胞中PAL活性的提高与人参皂甙的积累

利用纤维素酶降解人参(Panax ginseng C.A.Meyer)悬浮细胞的细胞壁制备了内源激发子(CDW).CDW体外诱导了游离人参细胞质膜NADPH氧化酶的活性,激发了活体人参悬浮细胞产生H2O2.CDW还可以诱导提高苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,促进人参鲨烯环氧酶基因(sqe)的转录与人参皂甙的积累.NADPH氧化酶的抑制剂不仅可以抑制CDW体外诱导的质膜NADPH活性而且还可以抑制CDW诱导人参细胞产生H2O2.进而,这些抑制剂还可以抑制CDW诱导PAL活性的提高,以及sqe的转录与人参皂甙的合成.过氧化氢酶与H2O2的粹灭剂也可以抑制CDW激发产生的这些诱导效应.上述结果表明CDW激发质膜NADPH氧化酶的活化与H2O2的产生在介导CDW诱导人参细胞抗性反应中,包括PAL活性的提高与人参皂甙的积累,起了重要的信号转导作用.     

质膜NADPH氧化酶的活化与H2O2的产生介导内源激发子诱导人参悬浮细胞中PAL活性的提高与人参皂甙的积累

利用纤维素酶降解人参(Panax ginseng C．A．Meyer)悬浮细胞的细胞壁制备了内源激发子(CDW)。CDW体外诱导了游离人参细胞质膜NADPH氧化酶的活性,激发了活体人参悬浮细胞产生H2O2。CDW还可以诱导提高苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,促进人参鲨烯环氧酶基因(sqe)的转录与人参皂甙的积累。NADPH氧化酶的抑制剂不仅可以抑制CDW体外诱导的质膜NADPH活性而且还可以抑制CDW诱导人参细胞产生H2O2。进而,这些抑制剂还可以抑制CDW诱导PAL活性的提高,以及sqe的转录与人参皂甙的合成。过氧化氢酶与H2O2的粹灭剂也可以抑制CDW激发产生的这些诱导效应。上述结果表明CDW激发质膜NADPH氧化酶的活化与H2O2的产生在介导CDW诱导人参细胞抗性反应中,包括PAL活性的提高与人参皂甙的积累,起了重要的信号转导作用。     

竹荪提取物对食源性细菌的抑菌特性研究

利用4种方法获得棘托竹荪和长裙竹荪的提取物,以5种食源性致病细菌单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门菌、大肠埃希菌O157H7、副溶血性弧菌为供试菌,比较其MIC(最低抑菌浓度)和MBC(最低杀菌浓度)。超声波辅助破碎竹荪干粉,制取水、乙醇和石油醚为提取介质的浸提物以及竹荪挥发油,利用液体培养基连续稀释法对5种供试菌进行抑菌实验。所有提取物对供试菌都具有抑菌活性;长裙竹荪提取物的综合抑菌能力高于棘托竹荪提取物;水提物和挥发油的抑菌效果最好;2种竹荪提取物对革兰阴性菌和革兰阳性菌的抑菌作用存在互补效应。竹荪提取物对5种食源性细菌的生长有较好的抑制作用,可应用2种竹荪的提取物复配,开发天然食品防腐剂。     

NaCl胁迫下大麦根液泡膜H^＋—ATPase活性、离子吸收与钙的关系

NaCl胁迫 2d ,耐盐大麦 (HordeumvulgareL .cv) (“滩引 2号”)根系液泡膜H _ATPase活性增强 ,H _PPase活性下降。以质膜Ca2 通道抑制剂La3 (1mmol/L)或Ca2 螯合剂EGTA (5mmol/L)处理大麦幼苗 ,抑制了NaCl诱导的液泡膜H _ATPase活性的增强 ,但提高了H _PPase活性 ;用CaM拮抗剂三氟拉嗪 (TFP ,2 0 μmol/L)处理 ,也抑制了液泡膜H _ATPase活性的增强。NaCl胁迫下 ,外加La3 ,TFP或La3 TFP处理 ,使Na 吸收增加 ,K 和Ca2 吸收降低。结果表明 ,NaCl胁迫下 ,液泡膜H _ATPase活性提高和离子吸收的变化可能与Ca_CaM系统有关。     

橄榄果实中PPO和POD活性抑制研究

本文研究温度和几种抑制剂对橄榄果实多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)活性的影响。结果表明,橄榄果实PPO活性最强的温度为27℃,POD活性最强的温度为45℃;低温对PPO活性的抑制较POD显著;抗坏血酸和亚硫酸钠可有效地抑制PPO活性,而抗坏血酸和氯化镁则对POD活性有明显的抑制作用。     

柠檬酸和抗坏血酸对蝴蝶兰叶外植体褐变发生的影响

目的:探究柠檬酸和抗坏血酸对蝴蝶兰叶片外植体褐变发生的影响以及对PPO活性变化影响的作用机理.方法:以褐变率和褐变指数为参考数据,分析柠檬酸和抗坏血酸对外植体PPO活性和PPO反应产物积累的影响以及与外植体褐变发生的关系.结果:分别用100mg/L柠檬酸共培养和50mg/L抗坏血酸浸泡处理叶片外植体,经离体培养3d,褐变率分别比对照降低94.9%和54.9%,离体培养6d,褐变指数低于对照的0.53,分别为0.46和0.36,同时PPO活性降低.结论:推测柠檬酸抑制褐变的原因是直接与酶蛋白作用,抗坏血酸则与新生醌类物质结合.     

Characterization of proteolytic bacteria from the Aleutian deep-sea and their proteases

Six deep-sea proteolytic bacteria taken from Aleutian margin sediments were screened; one of them produced a cold-adapted neutral halophilic protease. These bacteria belong to Pseudoalteromonas spp., which were identified by the 16S rDNA sequence. Of the six proteases produced, two were neutral cold-adapted proteases that showed their optimal activity at pH 7–8 and at temperature close to 35°C, and the other four were alkaline proteases that showed their optimal activity at pH 9 and at temperature of 40–45°C. The neutral cold-adapted protease E1 showed its optimal activity at a sodium chloride concentration of 2 M, whereas the activity of the other five proteases decreased at elevated sodium chloride concentrations. Protease E1 was purified to electrophoretic homogeneity and its molecular mass was 34 kDa, as estimated by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The molecular weight of protease E1 was determined to be 32,411 Da by mass spectrometric analysis. Phenylmethyl sulfonylfluoride (PMSF) did not inhibit the activity of this protease, whereas it was partially inhibited by ethylenediaminetetra-acetic acid sodium salt (EDTA-Na). De novo amino acid sequencing proved protease E1 to be a novel protein.     

枇杷果实多酚氧化酶活性影响因素的研究

研究了温度、pH、几种还原剂对枇杷果实多酚氧化酶活性的影响。结果表明:以邻苯二酚为作用底物,该酶的最适温度为25℃、最适pH为6.3,抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠等还原剂对该酶活性有明显的抑制作用。     

Purification and characterization of polyphenol oxidase from nettle (Urtica dioica L.) and inhibitory effects of some chemicals on enzyme activity

Polyphenol oxidase (PPO) of nettle (Urtica dioica L.) was extracted and purified through (NH4)2SO4 precipitation, dialysis, and CM-Sephadex ion-exchange chromatography and was used for its characterization. The PPO showed activity to catechol, 4-methylcatechol, L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), L-tyrosine, p-cresol, pyrogallol, catechin and trans-cinnamic acid. For each of these eight substrates, optimum conditions such as pH and temperature were determined and L-tyrosine was found to be one of the most suitable substrates. Optimum pH and temperature were found at pH 4.5 and 30 degrees C respectively and Km and Vmax values were 7.90 x 10(-4) M, and 11290 EU/mL for with L-tyrosine as substrate. The inhibitory effect of several inhibitors, L-cysteine chloride, sodium azide, sodium cyanide, benzoic acid, salicylic acid, L-ascorbic acid, glutathione, thiourea, sodium diethyl dithiocarbamate, beta-mercaptoethanol and sodium metabisulfite were tested. The most effective was found to be sodium diethyl dithiocarbamate which acted as a competitive inhibitor with a Ki value of 1.79 x 10(-9)M. In addition one isoenzyme of PPO was detected by native polacrylamide slab gel electrophoresis.     

Enhanced uridine diphosphate <Emphasis Type="Italic">N</Emphasis>-acetylglucosamine production using whole-cell catalysis

Uridine diphosphate N-acetylglucosamine (UDPAG) can be produced by chemical, enzymatic, chemoenzymatic, and fermentative methods. In this study, we used whole-cell catalysis method to produce UDPAG for the first time by Saccharomyces cerevisiae. In order to increase the ATP utilization efficiency and UDPAG conversion yield, the response surface methodology was applied to optimize the whole-cell catalytic conditions for UDPAG production. Firstly, effects of uridine 5′-monophosphate (5′-UMP), glucosamine, vitamin B1, glycerol, magnesium chloride, potassium chloride, temperature, sodium dihydrogen phosphate, sodium acetate, fructose, and pH on UDPAG production were evaluated by a fractional factorial design. Results showed that UDPAG production was mainly affected by sodium dihydrogen phosphate, temperature, and vitamin B1. Then, the concentrations of sodium dihydrogen phosphate and vitamin B1 and temperature were further investigated with a central composite design and response surface analysis. The cultivation conditions to obtain the optimal UDPAG production were determined: sodium dihydrogen phosphate, 31.2 g/L; temperature, 29°C, and vitamin B1, 0.026 g/L. This optimization strategy led to an enhancement of UDPAG production from 2.51 to 4.25 g/L, yield from 44.6% to 75.6% based on the initial 5′-UMP concentration, and ATP utilization efficiency from 7.43% to 12.6%.     

添加保护剂促进碱性果胶酶的工业保藏稳定性

保藏稳定性对于商品酶具有重要的实际意义。通过对碱性果胶酶的保护剂进行研究,最终筛选得到最优复合保护剂配方为：Tween201mL／L,六偏磷酸钠1．5g／L,明胶5g／L,甘油5％（口～）,CaCl22g／L;热稳定性提高18倍。此外在常温保藏时,在酶液中添加0．3‰山梨酸钾和0．3‰苯甲酸钠,能有效提高保藏效果,减少酶液染茵、混浊和发臭,最终常温保藏90d后酶活保留率为84．5％,达到工业化保藏的要求。     

无机盐、维生素与植物生长调节剂对绣球菌菌丝生长的影响

研究了无机盐、维生素、植物生长调节剂对绣球菌菌丝生长的影响。结果表明：硫酸镁、磷酸二氢钾和氯化钠质量浓度为1.0 g/L时,菌丝生长速率达到最大,随着添加量增加,菌丝生长速率呈下降趋势;维生素B1、B4、B6在供试范围内对菌丝生长的促进作用较强,维生素B2、B12对菌丝生长影响不显著,在含有8 mg/L维生素B4的培养...     

静息细胞转化生产3-羟基丙酸的条件优化

本文研究了静息细胞生物转化生产3-羟基丙酸的反应体系。考察了以甘油为底物,利用静息细胞转化生产3一羟基丙酸的相关因素,确定了最佳的转化条件：细胞浓度20g／L,甘油浓度20g／L,辅酶VB12浓度10mg／L,NAD＋浓度0．15mmol／L,温度35℃,反应体系为0．05mol／LpH7．0Tris—HCl缓冲液。在上述条件下反应6h后,3-羟基丙酸的产量达到为3．17g／L,底物转化率为28．33％。由上述结果可知,采用静息细胞转化法为3-HP的生物合成提供了一种可能的方法。