大学新生戊型肝炎病毒现/近期隐性感染的筛查

为了解大学新生戊型肝炎病毒(HEV)现/近期隐性感染的状况,探讨引起隐性感染与急性戊型肝炎(HE)的HEV毒株间有无差异,本实验利用ELISA一步法检测了正常大学新生血清标本中抗-HEV IgM,对抗-HEV IgM阳性者检测抗-HEV IgG,并进行HEV逆转录-巢式PCR(RT-nPCR). 结果2223份血清中抗-HEV IgM阳性18份,阳性率0.8%,P/N值在2.0~3.0之间.17份标本抗-HEV IgM、IgG同时阳性,1份抗-HEV IgM单独阳性,但用RT-nPCR检测抗-HEV IgM阳性标本, HEV RNA均阴性.提示正常大学新生中存在HEV现/近期隐性感染,应注意感染者作为传染源的可能性;HEV隐性感染时,产生的抗体滴度或亲和力较低,病毒血症时间短,病毒滴度低,或毒株的基因序列与引起急性HE的毒株的序列有一定差异.     

戊型肝炎病毒抗体检测的现状、问题与展望

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染是包括我国在内发展中国家成人急性肝炎的主要原因,在发达国家戊型肝炎的发病率也在不断升高,且在免疫抑制患者中可引起慢性感染,因此对HEV感染的诊断受到广泛重视。血清学检测,包括抗-HEV IgM和IgG,仍是诊断HEV感染的主要手段,但目前存在的最大问题是检测抗-HEV抗体的试剂之间的敏感性和特异性差异很大,检测结果的符合率差。本文着重综述了国内外常用抗-HEV抗体检测试剂的组成以及检测结果,提出了今后可能有利于提高检测敏感性和特异性的研究构思。     

大学新生戊型肝炎病毒现／近期隐性感染的筛查

为了解大学新生戊型肝炎病毒(HEV)现／近期隐性感染的状况,探讨引起隐性感染与急性戊型肝炎(HE)的HEV毒株间有无差异,本实验利用ELISA一步法检测了正常大学新生血清标本中抗—HEV IgM,对抗—HEV IgM阳性者检测抗—HEV IgG,并进行HEV逆转录一巢式PCR（RT-nPCR)。结果 2223份血清中抗—HEV IgM阳性18份,阳性率0．8％,P/N值在2．0—3．0之间。17份标本抗—HEV IgM、IgG同时阳性,1份抗—HEV IgM单独阳性,但用RT-nPCR检测抗—HEV IgM阳性标本,HEV RNA均阴性。提示正常大学新生中存在HEV现/近期隐性感染,应注意感染者作为传染源的可能性;HEV隐性感染时,产生的抗体滴度或亲和力较低,病毒血症时间短,病毒滴度低,或毒株的基因序列与引起急性HE的毒株的序列有一定差异。     

北京血站献血员戊型肝炎流行病学调查

为了解献血员戊型肝炎感染情况,对2002年7～8月向北京市血液中心义务献血的所有人员进行整群抽样并抽血,应用ELISA检测戊型肝炎病毒(HEV)IgG的感染率.结果发现:北京献血员HEV IgG总感染率为26.59%,性别、年龄、省份分布存在着差别,男性比女性感染率高,年龄越大感染率越高,来自高感染省份者感染率也高,但ALT与HEV IgG感染无关.因此,男性、年龄大、来自高感染省份具有较高的HEV感染风险,进一步研究献血员的亚临床感染对HEV的输血安全性具有重要意义.     

广西地区野鼠戊型肝炎病毒感染情况调查

从广西壮族自治区5个市采集256份野鼠肝脏和对应的血清211份,采用HEV抗体(HEV-Ab)酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样本进行抗-HEV检测,并对不同地区HEV抗体阳性率进行χ2检验。采用HEV核酸荧光PCR试剂盒对肝脏样本进行HEV核酸检测。结果显示,211份野鼠血清抗-HEV的抗体阳性率为6.6%,其中百色市的抗体阳性率最高,为14.1%,其他地区抗体阳性率均在10%以下。256份野鼠肝脏中未检测到HEV核酸。由此可见,广西壮族自治区5个市的野鼠中存在HEV感染,但其是否为HEV的自然宿主及在戊型肝炎传播中起何作用需进一步研究。     

不同戊肝抗原检测抗—HEV IgM反庆性研究

目的 比较不同戊肝抗原检测抗－HEV IgM反应性,方法 用HEV E30、E42、E33合成肽和HEV ORF－2重组抗原建立酶免疫试验（EIA）检测肝病患者和健康人群中抗－HEV IgM。结果60份抗－HEV阳性血清中,用E30、E42、E33及重组抗原包被检测抗－HEV IgM,阳性率分别为76.6%,26.6%,18.3%,66.7%。用E30抗原进一步检测肝急性期及恢复期血清,抗HEV IgM阳性率为90％及3.3%。结论 以HEV E30为抗原的EIA特异性强、灵敏度高,是戊型肝炎早期诊断实用可靠的方法。     

抗—HEV的临床意义

为了探索散发性戊型肝炎抗体的临床意义.采用ELISA方法检测.结果为102份抗-HEV阳性血清中抗-HEV·IgM+72份(占70.6%)、IgG+21份(占20.6%)、双阳性9份(占8.8%);IgM阳性与急性期病程和ALT异常呈现正相关.认为抗-HEV·IgM/IgG临床判断IgM为诊断标志、IgG为感染标志;疫区急性期内再感染可能性极少;城市散发戊肝食源性感染是主要传播方式之一;提示应加强饮食服务卫生管理.     

不同人类免疫缺陷病毒感染途径群体中戊型肝炎病毒的流行情况

本研究旨在了解不同人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染途径群体中戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)抗体情况,探讨HEV疫苗接种的必要性。采集HIV感染者的血清或血浆,利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HEV IgG抗体、IgM抗体及抗原,荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HEV核酸,Roche高纯化HIV-1核酸定量检测试剂盒(PCR荧光法)检测HIV感染者的HIV载量。比较分析不同HIV感染途径群体中HEV流行率的差别。结果显示,HIV感染者中HEV IgG抗体的阳性率为37.4%,静脉吸毒、成分献血和传播途径不明HIV感染群体的HEV IgG抗体阳性率分别为49.3%、39.5%和30.4%。HEV核酸荧光PCR检测结果均为阴性。3种HIV感染群体之间HEV IgG抗体阳性率差异无统计学意义(χ~2=2.978,P0.05)。HEV IgG阳性与阴性感染者之间HIV载量差异无统计学意义(P0.05)。结果提示,为保护HIV感染者免受HEV感染,应考虑接种HEV疫苗。     

上海部分地区戊型肝炎病毒(HEV)基因型的分析

为了解戊型肝炎病毒(HEV)在上海部分地区流行的基因型,采用RT-nPCR的方法检验35例急性散发性戊型肝炎患者中HEV RNA,并对阳性产物进行克隆测序,然后对其基因型进行分析.结果显示在35例急性散发性戊型肝炎患者中PCR阳性为9例,测序证实8例为HEV的基因序列;其中1例为HEV 1型,7例为HEV 4型.提示在上海部分地区的急性散发性戊型肝炎中以HEV 4型感染为主.     

无偿献血者ALT异常与戊型肝炎病毒感染的关系

目的 了解无偿献血者ALT异常（按血站标准,以大于25赖氏单位为异常）与戊型肝炎病毒感染的关系。方法 对萧山地区2004年8～11月无偿献血者中,ALT异常的102例血清标本,进行抗-HEV IgM抗体检测;同时对照检测450份ALT正常的无偿献血者血清标本。结果 在102例ALT异常血清中,抗-HEV IgM抗体阳性为6例,阳性率为5.88%,在450份ALT正常血清中,抗-HEV IgM抗体阳性为5例,阳性率为1.11%。结论 在无偿献血者ALT异常血清中,抗-HEV IgM抗体检出比例较高。     

抗原检测在戊型肝炎临床诊断中的应用

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,已经成为全球范围内的公共卫生问题,在临床人群中进行HE的诊断对于疾病传播的预防与控制具有重要的公共卫生意义,对于疾病的治疗具有重要的指导意义。本文对HEV抗原新指标的建立和发展进行综述,同时将其与现有指标进行比较,对其应用前景和优化方向提出展望。     

装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳的制备及其特性研究

为制备一种可以实际应用于戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)核酸检测的质控品,即装载戊型肝炎病毒核酸片段的重组MS2噬菌体衣壳(rHEPC)。根据装甲RNA技术原理,设计将MS2噬菌体基因组的5’端部分非编码区、成熟酶蛋白、衣壳蛋白以及部分复制酶起始位点等编码基因与HEV ORF2保守区部分基因序列串联并合成目标基因MS2-HEV。随后将MS2-HEV基因克隆、插入原核表达载体pET-28b中构建pET-28b-MS2/HEV重组质粒,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),经过1mM/L IPTG诱导培养4h后,SDS-PAGE鉴定表达情况;将验证的表达菌体超声破碎、离心、取上清、去除核酸杂质后再经超滤离心纯化、浓缩,电镜分析回收浓缩的rHEPC形态;梯度稀释rHEPC进行稳定性鉴定包括DNase I、RNase A抗性以及保存期三方面的稳定性试验检测。SDS-PAGE分析结果表明重组MS2-HEV基因获得有效表达,重组rHEPC纯度高无杂带;RT-PCR鉴定结果表明设计的HEV保守基因序列成功地被包装到重组rHEPC中。进一步的病毒颗粒稳定性试验结果表明制备的rHEPC能够有效抵抗高浓度的DNase I和RNase A的降解作用,并且在-20℃条件下可以持续保存7个月而无明显降解。上述结果表明制备的rHEPC达到了作为RNA病毒核酸检测阳性质控品的基本要求。     

新疆地区猪戊型肝炎血清流行病学调查

戊型肝炎(HE)是一种经粪-口传播的疾病,在发展中国家造成非常严重的健康问题.近年来的研究证实发达国家也存在戊型肝炎问题.该病主要威胁青壮年,孕妇病死率可高达20%.我国自1982年起就有HE的报道,新疆是HE的高流行区.由于HEV的组织培养研究尚不成熟,因此其诊断手段主要是利用RT-PCR检测病毒RNA,或利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体.而用于血清学检测的抗原主要来自HEV ORF2和ORF3的产物,并且用ORF2产物建立的检测法有足够的敏感性和特异性.自Meng[1]1997年从美国猪体内克隆出戊型肝炎病毒(HEV)基因后,我国以及加拿大,西班牙,新西兰,澳大利亚,印度等国家也都克隆出本国猪HEV基因.虽然我国也进行了猪HEV的检测,但在1988年爆发过人源戊型肝炎的新疆地区猪群感染HEV的情况还不清楚.本研究调查了HEV在猪群的感染状况,对新疆不同地区,猪场,年龄段及品种的猪进行HE的血清学检测.     

不同戊肝抗原检测抗-HEV IgM反应性研究

目的比较不同戊肝抗原检测抗-HEVIgM反应性。方法用HEVE30、E42、E33合成肽和HEVORF-2重组抗原建立酶免疫试验（EIA）检测肝病患者和健康人群中抗-HEVIgM。结果60份抗-HEV阳性血清中,用E30、E42、E33及重组抗原包被检测抗-HEVIgM,阳性率分别为76.6%,26.6%,18.3%,66.7%。用E30抗原进一步检测戊肝急性期及恢复期血清,抗HEVIgM阳性率为90%及3.3%。结论以HEVE30为抗原的EIA特异性强、灵敏度高,是戊型肝炎早期诊断实用可靠的方法。     

上海部分地区戊型肝炎病毒（HEV）基因型的分析

为了解戊型肝炎病毒 (HEV)在上海部分地区流行的基因型 ,采用RT nPCR的方法检验 35例急性散发性戊型肝炎患者中HEVRNA ,并对阳性产物进行克隆测序 ,然后对其基因型进行分析。结果显示在 35例急性散发性戊型肝炎患者中PCR阳性为 9例 ,测序证实 8例为HEV的基因序列 ;其中 1例为HEV 1型 ,7例为HEV 4型。提示在上海部分地区的急性散发性戊型肝炎中以HEV 4型感染为主     

基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估

建立并评估分别检测戊型肝炎（戊肝）病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原,建立戊肝捕获法IgM ELISA(E2-IgM)和间接法IgG ELISA(E2-IgG).利用29只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感法与特异性,并与商品化试剂（Genelabs公司抗－HEV IgG和IgM试剂,GL－IgM/GL-IgM)进行比较。29只恒河猴E2－IgM和E2－IgG的阳转率均为100％,其中75％在感染后4周内阳转,均早于ALT异常时间。E2－IgM持续2－14周,平均6周;E2－IgG在70周时仍无一阴转。GL－IgG阳转率为79．3％（23／29）,多数晚于ALT异常时间,平均持续约18周,但最长为1只在感染后70周时仍为阳性。用E2－IgM试剂盒检测928份正常人血清,仅2份OD值略高于0．2。检测510份临床急性肝炎血清,可明显将其区分为2个部分,一个部分OD值小于0．2,其OD值分布与正常人相似;另一个部分OD值大于0．4,共131份,其中109份大于1．0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。119份非甲－丙急性肝炎中,E2－IgM阳性57份,GL－IgM阳性29份（E2－IgM均阳性）。5060份普通人群血清的E2－IgG OD值在0．2以下,形成一个近似对数正态峰,均值为0．022,在OD值0．4以上则分布均匀。用E2－IgG试剂检测200份临床急性肝炎血清,结果OD值0．2以下也形成一个与普通人群类似的近似对数正态峰,但OD值在大于1．0－4．0间形成另一个尖峰（峰值在OD2．5处）,其中多数E2－IgM阳性。抗－HEV单抗可明显阻断E2－IgM及E2－IgG,单抗Fab段的阻断效果与完整抗体类似,提示这种阻断是表位特异的。建立的戊肝IgM试剂和IgG试剂具有良好的敏感性与特异性。IgM试剂适用于临床戊肝诊断,IgG试剂适用于既往戊肝感染诊断。     

器官移植病人戊型肝炎病毒慢性化感染及治疗

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染引起的急性病毒性肝炎,其发病率居急性病毒性肝炎之首。戊型肝炎通常呈急性感染病程,2008年以来陆续发现器官移植病人等免疫抑制患者感染HEV后可能迁延为慢性化。在无抗病毒药物治疗的情况下,器官移植病人感染HEV后迁延为慢性感染的比例超过60%,其中10%的病人慢性感染HEV后可能出现肝纤维化,并且在较短的时间内进展为失代偿性肝硬化导致死亡。本文简要综述器官移植病人HEV慢性化感染及治疗。     

慢性戊型肝炎治疗的新进展

戊型肝炎(hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)感染引起的一类病毒性肝炎。自从20世纪80年代HEV被发现以来,近30年里人们对戊型肝炎的研究不断深入。戊型肝炎通常是一种自限性疾病,但最近研究发现免疫力低下的人群,如人类免疫缺陷病毒感染者、器官移植接受者或者接受免疫抑制治疗的恶性肿瘤患者等感染HEV,甚至普通人感染后,均可能发展为慢性戊型肝炎(chronic hepatitis E,CHE)。然而,目前国际上尚无治疗慢性戊型肝炎的特异性药物及方法,本文将对国内外临床上慢性戊型肝炎的治疗方法及潜在药物作一综述。     

鼠源戊型肝炎病毒IgG抗体定量检测方法的建立

目的制备鼠源戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)抗体定量参考品,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,并对其进行验证及初步应用。方法制备鼠源抗-HEV IgG参考血清MS1,以世界卫生组织人源抗-HEV Ig标准品(NIBSC code:95/584)对其进行标定并检测其稳定性;以标定的参考品为标准,建立小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,对线性、范围、重复性、准确度等进行验证,并对戊肝疫苗免疫后小鼠血清进行HEV IgG抗体定量检测。结果制备的MS1血清含量为30.9U/m L(95%CI:±1.1),CV为4.8%;加速稳定性试验和冻融稳定性试验中,MS1含量CV均15%。建立的小鼠抗-HEV IgG抗体定量检测方法在0.01~0.15 U/m L范围内具有良好的线性(r0.99);灵敏度为0.007 U/m L;对高、中、低3份不同含量抗-HEV阳性小鼠血清重复检测3次,CV均10%;加样回收率为83.8%~107.7%。戊肝疫苗免疫1 w,3 w,5 w时,小鼠血清HEV IgG抗体均值分别为0.3 U/m L、39.4 U/m L、345.4 U/m L。戊肝疫苗初次免疫小鼠1 w后抗体阳转率为100%,但抗体均处于较低水平;血清抗体水平随着免疫针次的增加而升高(P0.05)。结论制备的鼠源HEV IgG抗体定量参考稳定性良好的,建立的小鼠HEV IgG抗体定量检测方法,具有良好的灵敏度、重复性及准确度,可用于小鼠实验中戊肝疫苗免疫原性的评价。     

不同戊肝抗原检测抗-HEVIgM反应性研究

目的　比较不同戊肝抗原检测抗 -HEVIgM反应性。方法用HEVE30、E42、E33合成肽和HEVORF 2重组抗原建立酶免疫试验 (EIA)检测肝病患者和健康人群中抗 HEVIgM。结果 6 0份抗 HEV阳性血清中 ,用E30、E42、E33及重组抗原包被检测抗 HEVIgM ,阳性率分别为 76 .6 % ,2 6 .6 % ,18.3 % ,6 6 .7%。用E30抗原进一步检测戊肝急性期及恢复期血清 ,抗HEVIgM阳性率为 90 %及 3 .3 %。结论以HEVE30为抗原的EIA特异性强、灵敏度高 ,是戊型肝炎早期诊断实用可靠的方法。