基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估

建立并评估分别检测戊型肝炎（戊肝）病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原，建立戊肝捕获法IgM ELISA(E2-IgM)和间接法IgG ELISA(E2-IgG).利用29只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感法与特异性，并与商品化试剂（Genelabs公司抗－HEV IgG和IgM试剂，GL－IgM/GL-IgM)进行比较。29只恒河猴E2－IgM和E2－IgG的阳转率均为100％，其中75％在感染后4周内阳转，均早于ALT异常时间。E2－IgM持续2－14周，平均6周；E2－IgG在70周时仍无一阴转。GL－IgG阳转率为79．3％（23／29），多数晚于ALT异常时间，平均持续约18周，但最长为1只在感染后70周时仍为阳性。用E2－IgM试剂盒检测928份正常人血清，仅2份OD值略高于0．2。检测510份临床急性肝炎血清，可明显将其区分为2个部分，一个部分OD值小于0．2，其OD值分布与正常人相似；另一个部分OD值大于0．4，共131份，其中109份大于1．0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。119份非甲－丙急性肝炎中，E2－IgM阳性57份，GL－IgM阳性29份（E2－IgM均阳性）。5060份普通人群血清的E2－IgG OD值在0．2以下，形成一个近似对数正态峰，均值为0．022，在OD值0．4以上则分布均匀。用E2－IgG试剂检测200份临床急性肝炎血清，结果OD值0．2以下也形成一个与普通人群类似的近似对数正态峰，但OD值在大于1．0－4．0间形成另一个尖峰（峰值在OD2．5处），其中多数E2－IgM阳性。抗－HEV单抗可明显阻断E2－IgM及E2－IgG,单抗Fab段的阻断效果与完整抗体类似，提示这种阻断是表位特异的。建立的戊肝IgM试剂和IgG试剂具有良好的敏感性与特异性。IgM试剂适用于临床戊肝诊断，IgG试剂适用于既往戊肝感染诊断。

Development and Evaluation of ELISAs for Anti-hepatitis E Virus IgM and IgG Detection Based on Polymerized Recombinant Antigen