香蕉束顶病毒研究进展

香蕉束顶病毒(Bananabunchytopvirus,BBTV)是引起香蕉束顶病害(Bananabunchytopdisease,BBTD)的病毒,它严重地危害了香蕉的生产。综述了近年来香蕉束顶病毒的分离提纯方法,株系划分以及分类地位,较为全面的介绍了BBTV病毒基因组分结构和各组分编码蛋白的功能等,并提出了目前需要进一步澄清的问题。     

利用超低温保存方法脱除香蕉束顶病毒的研究

香蕉束顶病毒(BBTV)是香蕉生产中的严重病害之一,主要通过感病材料和香蕉交脉蚜等昆虫进行传播,目前尚无有效防治方法.本研究以感染BBTV的巴西蕉(Musa AAA Cavendish)为材料,研究了感染BBTV的巴西蕉离体再生和超低温保存技术条件,表明离体茎尖在MS+6-BA 4 0 mg/L+NAA 0 4 mg/L的培养基上分化不定芽较好;采用玻璃化法超低温保存技术保存带有BBTV的香蕉茎尖,再生后植株BBTV脱除率达到60 6%,而常规的茎尖培养对BBTV的脱除率仅为26 7%.     

感染束顶病后香蕉过氧化物酶和多酚氧化酶活性变化(简报)

香蕉束顶病株的过氧化物酶（POD）和多酚氧化酶（PPO）的活性变化均呈单峰曲线，两者在香蕉束顶病毒（BBTV）浸染前期被诱导活性显著提高，接种后21和28d最高，42d后则都比健株低。侵染前期BBTV在体内的运转受抑，接种叶在接种后28d病毒含量最高，而顶叶则在35d后为最高。     

香蕉束顶病毒复制酶基因克隆及转基因表达

以广州市郊获得的香蕉束项病毒(BBTV)的DNA为模板,进行PCR扩增得到香蕉束项病毒复制酶基因的1.1 kb DNA.所获得的DNA序列与澳大利亚的BBTV序列的同源性达90%,这部分序列编码香蕉束顶病毒复制酶基因的羧基端.将改造的BBTV复制酶基因克隆到pBll21的CaMV 35S和NOS终止序列之间,构建表达载体,并采用基因枪轰击香蕉试管苗生长点组织的方法,经PCR检测和Westem blot分析,获得4株具有BBTV复制酶基因整合表达的To代转基因香蕉.转基因植株的抗病性正在检测之中.     

香蕉线条病毒病研究进展

香蕉是重要的经济作物和粮食作物,广泛种植于热带、亚热带地区.在我国的广东、福建、海南、广西和云南等地均有大面积种植,产销量一直居南方四大水果之冠.然而,近年来,许多病毒病害成为香蕉生产发展的主要限制因素,主要包括香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)、香蕉线条病毒(banana streak virus,BSV)、香蕉苞片花叶病毒(banana bract mosaic virus,BBrMV)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)等引起的病害.     

香蕉束顶病毒的纯化及理化特性

从具有典型香蕉束顶病(BBTD)症状的香蕉病组织中提纯了香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)。电镜下可观察到直径为18nm的球形病毒颗粒。最高紫外吸收在255nm,最低紫外吸收在240nm,A_(260)/A_(280)为1.30。用标准BBTV抗体通过ECL-Western转印法测定其外壳蛋白分子量为21kDa。其核酸经DNaseI、RNaseA和Mung Bean Nuclease分析,表明是约1kb的ssDNA。结果与国外文献报道一致。     

香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆和序列分析

香蕉束顶病(banana bunchy top disease,BBTD)是香蕉生产上重要的病害之一,它威胁着世界约1/4香蕉产区的生产[1].到1998年7月,世界上报道发生该病害的国家和地区达20多个,遍及亚洲、南太平洋地区和少数非洲国家.     

香蕉束顶病毒DNA组分4的克隆与序列分析

香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)基因组中至少含有6个DNA组分,我们实验室已经对BBTV广东两个株系(NS和NSP)基因组中的DNA组分1、3、6进行了测序和报道.现又对NS和NSP的DNA组分4分别进行了克隆和序列分析.     

感染BBTV香蕉叶片cDNA文库的构建及评价

为了研究香蕉束顶病毒与香蕉寄主致病的互作分子机制,本文报道利用Make Your Own“Mate＆Plate^TM”Library System试剂盒成功构建感染BBTV香蕉叶片的cDNA文库。通过改良CTAB法提取感染BBTV香蕉叶片的总RNA,采用SMART法反转录合成双链cDNA,经SfiI酶切并去除短片段之后,与经同样酶切的pGADT7-SfiI载体连接,利用电转法将重组载体转化到大肠杆菌宿主细胞中,获得初级cDNA文库,最后以初级文库100万克隆为基数扩增,得到扩增文库并提取质粒。结果得到库容量大于2.0×10⁶的初级文库,检测表明文库cDNA插入片段长度主要分布在700~2 000 bp,文库重组率为87.5％。结果表明,该文库质量较好,可用于后续酵母双杂交互作蛋白筛选试验,本研究为开展病毒与寄主互作的研究奠定基础。     

香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证

香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)DNA6编码的核穿梭蛋白(nuclear shuttle protein,NSP)在病毒的侵染、复制、运输中起重要作用。为了利用酵母双杂交系统研究BBTV DNA6与寄主香蕉蛋白的互作,本实验利用两对引物的PCR扩增得到BBTV -nsp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位点序列的DNA产物,将目的片段连接到酵母双杂交系统的pGBKT7诱饵载体中,成功获得pGBKT7-nsp,并将重组质粒pGBKT7-nsp转化入Y2H Gold酵母菌株中进行毒性检测和自激活验证。结果表明,pGBKT7-nsp没有自激活活性,同时对酵母细胞也无毒性,符合酵母双杂交诱饵质粒的要求,可用于下一步的蛋白互作实验。     

特异扩增BBTV基因组Ⅲ、Ⅳ、Ⅰ编码区部分序列及其在检测中的应用

香蕉束顶病(BBTD)是香蕉植株的一种毁灭性病害,正在世界(包括中国)的许多香蕉种植区蔓延[1～7].其病原物为香蕉束顶病毒(Banana Bunchy Top Virus,BBTV),被列为我国第三类检疫对象.目前生产上主要采用培育脱毒组培苗来防治BBTD的发生,因此建立一种能快速、灵敏、特异地检测BBTV的方法就显得很重要.国内现在大多采用ELISA方法,但其灵敏度不够高,且需要制备特异性强的抗血清,否则较易出现假阳性.     

植物病毒:对微繁殖的危害及其控制

目前:组织培养被广泛地用作植物快速增殖和种质传播的一种有效方法。然而,它可能会通过侵染培养物或侵染组织培养物衍生的植株的传播而将植物病毒大规模扩散。澳大利亚研究人员R. A. Drew等人已从感染有香蕉束顶病毒(BBTV)(在澳大利亚、亚洲和非洲的一种严重侵染香蕉的病毒)的香蕉树外植体中微繁殖出植株。这些植株尚未表现出病毒侵染症状,与未侵染的对照产生的微繁殖植株没有区别。然而,经16个月的培养后产生的植株有75％表现出BBTV侵染的症状。     

香蕉条斑病毒PCR检测方法的正交优化

香蕉条斑病毒引起的香蕉条斑病,对香蕉生产的危害越来越严重,因此对该病毒的检测也变得很重要.而PCR法已广泛用于植物病毒的检测,所以控制PCR的反应条件对结果的准确性有很大影响.由于在检测过程中使用的是较为敏感的简并引物,因此对PCR反应条件的要求较高.本文采用L9(34)正交设计对PCR体系的反应条件进行了优化.最终获得最佳反应条件为Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTP 0.15 mmol/L,Primer0.5μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5 U.通过最佳反应条件对采集回来的其他带BSV的植株叶片和吸芽的总DNA进行PCR扩增,其结果均表现为比较稳定.     

香蕉束顶病植原体16S rDNA片段的RFLP和序列分析

香蕉束顶病（ＢＢＴ）是一种发生有蕉类作物的严重病害,从带有典型香蕉束顶病症状的香蕉植株中按照检测植原体的方法提取ＤＮＡ,扩增患病植株中植原体１６ＳｒＤＮＡ片段,证明香蕉束顶病中有植原体存在,对此扩增片段进行限制性酶切片长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和核酸序列分析,并与已知植原体的序列进行同源性比较,构建进化树,结果显示该片段与Ｇｒ１的亲缘关系最近。     

香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析

本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α螺旋,7个β折叠。NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间。NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)的基元序列“LXCDE”附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率。     

香蕉束顶病植原体16S rDNA片段的RFLP和序列分析

香蕉束顶病（ＢＢＴ）是一种发生在蕉类作物的严重病害。从带有典型香蕉束顶病症状的香蕉植株中按照检测植原体的方法提取ＤＮＡ,扩增患病植株中植原体１６ＳｒＤＮＡ片段,证明香蕉束顶病中有植原体存在。对此扩增片段进行限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析和核酸序列分析,并与已知植原体的序列进行同源性比较,构建进化树。结果显示该片段与Ｇｒ１的亲缘关系最近。     

香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析

本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α-螺旋,7个β-折叠.NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间.NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,Rb)的基元序列"LXCDE"附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率.     

壳聚糖在香蕉果实贮藏保鲜上的应用效果

以巴西香蕉果实为材料,研究了不同浓度（0、0．5％、1．0％、2．0％）的壳聚糖溶液对香蕉果实贮藏保鲜的影响。结果表明：壳聚糖处理可明显延缓香蕉果实的软化进程和病情指数的升高;同时维持了果实较低的细胞膜透性、多酚氧化酶（PPO）活性和较高的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、β-1,3-葡聚糖酶（GUN）的活性。在四种处理中,以2％壳聚糖处理效果最好。表明壳聚糖对香蕉果实的贮藏保鲜效应可能与其调控病害相关酶的活性有关。     

香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析

对香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）中国分离株ＤＮＡ组份Ｉ（ＤＮＡ－１）、外壳蛋白（ＣＰ）和运转蛋白（ＭＰ）基因进行了克隆和序列分析。ＢＢＴＶＤＮＡ－１含有１１０３个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有８７％－８８％ ９６．９－９８％的核苷酸序列同源性。由ＤＮＡ－１编码的复制酶含有１８６个在酸残基。与南太平洋和亚洲分离株分别有８４．４％－９５．８％和９７．６％、９８．０％的氨基酸序列同源性。外壳蛋白基因由５