巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望

巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如：营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能影响巴斯德毕赤酵母表达系统的相关因素,这些因素包括外源基因的特性、基因拷贝数、产物稳定性及发酵策略等,结合这些因素和具体实践经验,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量进行了阐述;讨论了该表达系统存在的不足之处并且展望了其发展前景。     

影响外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达和分泌的研究进展

巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的外源蛋白表达系统.但外源基因在该系统中表达时,由于受自身特性及环境等诸多因素的影响,在表达过程中出现表达量不够稳定或较低,甚至不表达的情况.本文对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析,并就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了简要的综述.     

提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的研究进展

巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达系统是基因工程研究中广泛使用的真核表达系统 ,与现有的其它表达系统相比 ,巴斯德毕赤酵母在表达产物的糖基化修饰、折叠、加工、外分泌及表达量等方面有明显的优势。外源基因在该系统中表达时 ,由于受基因内部的结构、分泌信号、甲醇诱导的浓度及诱导时间、培养温度、启动子、表达环境的 pH值等诸多因素的影响 ,一些外源蛋白的表达也存在着表达不够稳定、表达量较低 ,甚至不表达的情况。对影响巴斯德毕赤酵母表达的各种可能因素进行了分析 ,结合具体实践经验 ,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量的问题进行了综述。     

酵母表达系统及其应用研究

酵母表达系统是研究真核蛋白质表达和分析的有力工具,拥有转录后加工修饰功能,适合于稳定表达有功能的外源蛋白质。与昆虫表达系统和哺乳动物表达系统相比,酵母表达系统操作简便,成本低廉,可大规模进行发酵,是最理想的重组真核蛋白质生产制备用工具。介绍了酵母表达系统的特点、常用酵母表达系统(载体和菌株)、酵母表达的一般步骤、实现高效表达的策略以及酵母表达系统的应用成果等。     

新型酵母表达系统的研究

酵母表达系统是在酿酒酵母质粒的发现和酵母转化技术的成熟基础上建立起来的真核生物表达系统。许多有应用价值的外源基因成功地在其中表达,但也存在一些局限性。为了开发新的酵母表达系统,人们在酿酒酵母以外的酵母中寻找合适的宿主以建立新的载体－宿主系统。本文综述了建立新的酵母表达系统涉及的有关问题和近几年来的研究进展。     

毕赤酵母高效表达策略概述

毕赤酵母表达系统是外源蛋白表达的较为理想的系统,但是并不是所有蛋白都能利用此系统获得高效表达,不同来源的蛋白,其表达水平、生物活性和稳定性均存有明显差别。概述了影响毕赤酵母高效表达的主要因素以及外源蛋白在毕赤酵母中的高效表达策略。     

重组人血清白蛋白表达研究进展

本文综述了重组人血清白蛋白在细菌,酵母,植物和动物等表达系统中表达的研究进展。用酵母表达系统,尤其是毕赤酵母,表达的重组白蛋白产量高且提取工艺简单,是其产业化最具有前途的表达系统。同时在转基因动物、植物中培养表达也具有诱人的前景。     

毕赤酵母表达系统优化策略概述

毕赤酵母(Pichia pastor)表达系统是近年发展起来的一种高效表达外源蛋白的系统,利用该系统表达外源基因具有良好的应用前景。尽管毕赤酵母表达系统具有比较完备的基因表达调控机制和对真核基因表达产物的加工修饰能力,但由于基因本身及表达系统等诸多因素,仍然存在外源蛋白表达产量很低甚至不表达的情况。针对毕赤酵母表达系统这一因素,对表达载体的优化,毕赤酵母菌株优化及发酵条件优化进行了综述,以期为外源基因在毕赤酵母中的高效表达提供理论基础。     

抗IV型胶原酶单链抗体在毕赤酵母中分泌表达*

利用毕赤酵母系统表达抗 IV型胶原酶人单链抗体。首先把目的基因克隆到毕赤酵母表达载体上 ,电击转化受体菌。在甲醇诱导下表达单链抗体。 SDS- PAGE和免疫印迹显示毕赤酵母分泌表达人单链抗体 ,表达量约 2 0 mg/ L酵母培养物。该表达系统与大肠杆菌相比 ,简化了表达产物的分离纯化程序。     

巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的研究进展

毕赤酵母表达系统是近年来发展起来的一种高效表达外源基因的表达系统。综述了毕赤酵母表达系统的起源、生物学特性、融合蛋白的表达以及影响蛋白表达量的因素。     

Gene expression profiling in the rhesus macaque: Experimental design considerations

The development of species-specific gene microarrays has greatly facilitated gene expression profiling in nonhuman primates. However, to obtain accurate and physiologically meaningful data from these microarrays, one needs to consider several factors when designing the studies. This article focuses on effective experimental design while the companion article focuses on methodology and data analysis. Biological cycles have a major influence on gene expression, and at least 10% of the expressed genes are likely to show a 24-h expression pattern. Consequently, the time of day when RNA samples are collected can influence detection of significant changes in gene expression levels. Similarly, when photoperiodic species such as the rhesus macaque are housed outdoors, some of their genes show differential expression according to the time of year. In addition, the sex-steroid environment of humans and many nonhuman primates changes markedly across the menstrual cycle, and so phase of the cycle needs to be considered when studying gene expression in adult females.     

强大的广谱基因表达分析技术——基因表达系列分析法

基因表达系列分析(serial analysis of gene expression,SAGE)是一项强大的数字化分析基因组整体表达模式的技术。它的诞生为定量、全局性地分析特定细胞内的基因表达情况提供了可能。本文介绍了SAGE技术的基本原理、最新进展和应用。     

Stochastic gene expression, disruption of tissue averaging effects and cancer as a disease of development

Despite the extensive literature describing the somatic genetic alterations in cancer cells, the precise origins of cancer cells remain controversial. In this article, I suggest that the etiology of cancer and the generation of genetic instability in cancer cells should be considered in the light of recent findings on both the stochastic nature of gene expression and its regulation at tissue level. By postulating that gene expression is intrinsically probabilistic and that stabilization of gene expression arises by cellular interactions in "morphogenetic fields", development and cellular differentiation can be rethought in an evolutionary perspective. In particular, this article proposes that disruptions of cellular interactions are the initial source of abnormal gene expression in cancer cells. Consequently, cancer phenotypes such as genetic and epigenetic instabilities, and also the presence of cells with stem cell-like properties, may result from inaccurate and aberrant patterns of gene expression generated by microenvironmental alterations. Finally, the therapeutic implications of this view are discussed.     

脑细胞的基因及其表达与衰老

概述了脑与衰老在神经分子生物学方面的研究进展 ,包括 :细胞衰老分子机制的主要进展 ,衰老脑在基因及其表达水平的研究进展 ;阿尔茨海默病 (AlzheimerDisease ,AD)相关基因研究进展 ,帕金森病 (porkinsondisease ,PD)相关基因研究进展[7] 。这些研究成果对脑与衰老的关系、对脑在基因及其表达水平上衰老机制认识的加深乃至对衰老脑的基因治疗均具有理论意义和应用价值。     

Aromatase--key enzyme of estrogen biosynthesis

Estrogens control a large range pivotal life functions as reproductive development and fertility, bone growth and sexual behavior. Aromatase is a key enzyme of estrogen biosynthesis. The property, structure and reaction mechanism of aromatase as well as detailed structure of human aromatase cytochrome P450 gene (CYP19) was discussed in this article. It was pointed that unique human CYP19 gene expression results from presence of many tissue specific promoters and alternative splicing. The molecular mechanism of control aromatase cytochrome P450 gene expression in various species ovaries, testes and human adipose tissue and placenta was discussed in details. Because of a very important role of estrogen in breast cancer a molecular base of aberrant expression CYP19 gene in breast tumor and adipose tissue proximal to breast tumor and potential possibility of pharmacological silencing of this gene expression was discussed in the article.     

乳腺生物反应器制备中表达载体的发展

腺生物反应器拥有巨大的开发价值,但开发成功的例子却寥寥可数,主要的原因是外源基因的表达量较低,达不到开发生产的要求。提高外源基因表达量的关键在于乳腺生物反应器表达载体的构建。近年来,这方面的新思路、新方法不断出现,本文对此进行了综述。     

Allele-specific gene expression uncovered

Genetic variation in populations can result in variation in levels of gene expression but the extent to which this occurs has been unclear. In this article, recent studies of allele-specific expression among autosomal non-imprinted genes are reviewed. These new data provide evidence that differential expression is relatively common and that allelic differences are heritable and can be highly context specific.     

逆境胁迫下作物基因表达更替的研究进展

本文综述了高等植物在厌氧、热激,盐分胁迫,养分胁迫,紫外辐射等各种逆境条件下,基因表达更替的一系列过程,提出基因表达变化对作物适应逆境条件的意义,并对今后的研究作了展望。     

植物基因工程表达载体的改进和优化策略

外源基因在转基因植物中表达效率低一直是令相关研究困扰的一个问题。转基因植物的生物安全性最近在全球范围内开始引起世人的担优。本简要介绍了近年来在植物表达载体构建方面所采用的一些新策略,这些策略有助于增强外源基因的表达水平,提高生物工程体的安全性。