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1.
利用花色素苷合成调节基因C1—R作为基因抢转化效果指示的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了玉米花色素苷合成调节基因C1-R在小麦幼胚、玉米愈伤组织、小稻愈伤组织、烟草叶片中的瞬时表达情况。由于调节基因C1-R激活了植物体细胞内花色素苷的合成,因此不需任何生色底物,即可活体观察到花色素苷的表达。结果表明,对于目前仍主要通过基因枪法转化的几类主要粮食作物-小麦、玉米、水稻、枪击48h后,放大2位便清晰可见红色斑点,且其表达强度远高于GUS的表达,证明C1-R可作为一个很好的衡量打枪效 相似文献
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小麦中外源基因瞬间表达调控研究及兔防御素(NP—1)基因的转化 总被引:12,自引:0,他引:12
将不同5上游调控序列驱动下的GUS基因用基因枪法导入小麦幼胚和胚性愈伤组织,通过组织化学分析法和荧光分析法对GUS基因的表达进行定量检测,比较了几种烟草花叶病毒(TMV)Ω增强子序列对小麦中外源基因瞬间表达的调控作用;然后将其中效率最高的玉米Ubil启动子与兔防御素(NP-1)连接起来,并加上Nos终止子,构民NP-1基因小麦表达载体,并转化小麦幼胚,经PCR-Suthern blot分析,初步确 相似文献
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小麦抗白粉病相关基因的转化 总被引:7,自引:0,他引:7
利用玉米花青素苷合成调节基因C1-Lc作为报告基因, 通过瞬间表达后愈伤组织表面红色斑点的统计分析, 优化了小麦幼胚愈伤组织的基因枪转化参数。小麦Beclin1类似基因TaTBL和硫代硫酸硫转移酶基因TaTST是2个在白粉菌诱导条件下具有增强表达特性的抗病相关基因。本实验进一步利用基因枪将ubi强启动子控制下的2个基因导入到小麦品种扬麦158的幼胚愈伤组织细胞中, 使用除草剂经两轮选择培养基上的筛选和再生获得抗性植株, 进一步通过抗性植株的PCR分析获得转TaTBL基因植株5株, 转TaTST基因植株6株。转基因植株离体叶片的人工接种实验表明, 外源基因的导入不同程度上增强了植株的白粉病抗性, 表现为延缓了白粉菌的发育。利用玉米花青素苷合成调节基因C1-Lc作为报告基因,通过瞬间表达后愈伤组织表面红色斑点的统计分析,优化了小麦幼胚愈伤组织的基因枪转化参数。小麦Beclin1类似基因TaTBL和硫代硫酸硫转移酶基因TaTST是两个在白粉菌诱导条件下具有增强表达特性的抗病相关基因。本实验进一步利用基因枪将ubi强启动子控制下的两个基因导入到小麦品种扬麦158的幼胚愈伤组织细胞中,使用除草剂经两轮选择培养基上的筛选和再生获得抗性植株,进一步通过抗性植株的PCR分析获得转TaTBL基因植株5株,转TaTST基因植株6株。转基因植株离体叶片的人工接种实验表明,外源基因的导入不同程度上增强了植株的白粉病抗性,表现为延缓了白粉菌的发育。 相似文献
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几丁质酶基因转化亚麻、红豆草、骆驼刺的同工酶研究 总被引:5,自引:0,他引:5
以亚麻、红豆草、骆驼刺的下胚轴为外植体,用含几丁质酶RC24基因的根瘤农杆菌LBA4404进行转化。对3种植物转化植株叶片及对照植株叶片的愈伤组织的过氧化物酶及酯酶同工酶分析表明,转基因植株叶片愈伤组织的同工酶谱与对照系相比具有明显的差异,由此推测转化系愈伤组织中可能存在变化了的基因产物,并认为导入的外源几丁质酶基因可能引起了转化材料的遗传变异。 相似文献
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Transgeni根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ的Ti 质粒pUNN-2 带有Ubi1 启动子驱动的npt Ⅱ基因。7 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选,3 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经PCR 和Southern 杂交鉴定为转基因植株,转化频率( 再生转基因植株的小麦愈伤组织数/ 用于转化实验的愈伤组织数) 为3.7% ~5 .9% 。小麦基因型及转化材料的起始生理状态是影响TDNA转移的重要因素。 相似文献
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玉米醇溶贮藏蛋白基因启动子PCR扩增及其驱动GUS基因在转基因烟… 总被引:1,自引:0,他引:1
以玉米黄化苗为材料,利用PCR技术扩增了玉米19kDa醇溶贮藏蛋白基因(zein)起始密码子上游启动子片段,序列分析结果表明,克隆的-1 ̄-694片段具有19kDa Zein启动子特点,与同一家族中其它基因的对应区段同源性达90%以上。将启动子插入pPKGT的GUS基因及NOS终止子上游构成表达载体。经农杆菌转化烟草,得到了转化植株。转化的烟草的PCR扩增及Southern杂交证明目的片段已整合到 相似文献
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根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生 总被引:19,自引:0,他引:19
根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ的Ti质粒p^UNN-2带有Ubi1启动子驱动的nptⅡ基因。7种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同家度巴龙霉素的筛选,3种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经PCR和Southern杂交鉴定为转基因植株,转化频率为3.7%-5.9%。小麦基因型及转化材料的起始生理状态的影响T-DNA转移的重要因素。 相似文献
9.
利用激光微束穿刺法将外源基因导入小麦的研究 总被引:21,自引:1,他引:20
用激光微束穿刺法将携带有新霉素磷酸转移酶(NPT-Ⅱ)基因的质粒pJIT101导入京花1号小麦幼胚细胞。方法是将小麦幼胚细胞进行高渗缓冲液预处理,用微米级的激光微束处理,然后在卡那霉素培养基上筛选出具抗性的愈伤组织及绿色小植株。第一年,从150个小麦幼胚中,在卡那霉素培养基上筛选出4株绿苗,取两株进行NPT-Ⅱ酶活性分析,测到了NPT-Ⅱ酶的活性。第二年重复实验,从245个小麦幼胚中,经筛选获得1株绿苗,进行了叶片DNAPCR扩增检测,转化的绿色小苗扩增出所导入的NPT-Ⅱ基因编码的片段。结果表明,外源NPT-Ⅱ基因已导入了小麦,并实现了整合表达。 相似文献
10.
烟草叶片愈伤组织BECTLIN Ⅰ基因的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
分别以烟草盆栽实生苗和组培继代苗的叶片为外植体,在MS (1.0 mg·L-1 6-BA与0.5mg·L-1 2, 4-D)培养基中诱导形成的愈伤组织为材料,检测与细胞程序性死亡有关的BECTLIN Ⅰ基因。RT-PCR检测表明,烟草盆栽实生苗和组培继代苗的叶片及其愈伤组织均有BECTLIN Ⅰ基因的表达,但组培继代苗叶片愈伤组织的BECTLIN Ⅰ基因表现出持续、稳定的表达,说明培养基中的激素可能对BECTLIN Ⅰ基因的表达产生影响,同时表明烟草叶片愈伤组织形成过程中可能产生了细胞程序化死亡,其结果可能导致烟草叶片原初形态不同、功能各异的细胞在脱分化阶段形成了形态结构和功能完全相似的胚性细胞。 相似文献
11.
John de Majnik R. G. Joseph G. J. Tanner P. J. Larkin M. A. Djordjevic B. G. Rolfe J. J. Weinman 《Plant Molecular Biology Reporter》1997,15(2):134-140
A set of vectors has been developed that simplify shuttling expression cassettes between small plasmids of high copy number
ideal for experiments involving biolistic transient expression and a binary transformation plasmid. Three cassettes for the
expression of a cloned coding sequence behind different promoters have been modified; combinations of these cassettes can
be excised withNot I, and sequentially cloned into the transformation vector in a procedure that removes the first cloning site. The system
is demonstrated by inducing anthocyanin synthesis with paired regulatory genes of maize biolistically delivered to a maize
cell suspension, and then expressed in transformed tobacco. 相似文献
12.
为满足植物功能基因组学研究及转基因安全性需要,本研究根据一些国内外引进或商业化的植物表达载体及其相关元件,构建了3个适合于植物,尤其是单子叶植物转化的表达载体,即p AH006、p WMB022和p WMB025。p AH006载体包含由玉米泛素ubi启动子调控的GUS基因和bar基因的完整T-DNA区域,此区段能够被酶切回收,可用于单子叶植物农杆菌介导转化效率评价及基因枪介导线状DNA转化效果研究;p WMB022载体携带由双35S启动子调控的玉米色素基因Lc和C1,可用作基因枪介导的共转化筛选标记,直观筛选含目标基因转基因材料;p WMB025载体携带由ubi启动子调控的、商业化转基因植物中广泛利用的EPSPS基因,可用于禾谷类作物农杆菌或基因枪介导的遗传转化,载体多克隆位点可通过酶切方式更换目标基因。酶切鉴定结合农杆菌或基因枪介导的小麦幼胚愈伤组织或叶片转化验证此3个载体表明,载体构建正确,其标记基因、可视化基因和报告基因均能正常表达。这3个载体的构建对于小麦等植物转化效率提升、安全型转基因作物获得和植物功能基因组学研究等具有重要意义。 相似文献
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Roland Bilang Shibo Zhang Nathalie Leduc Victor A. Iglesias reas Gisel John Simmonds Ingo Potrykus Christof Sautter 《The Plant journal : for cell and molecular biology》1993,4(4):735-744
A method has been established that allows the targeted delivery of DNA-carrying gold particles to vegetative shoot apical meristems of cereal species. Meristems of 8- to 10-day-old seedlings of wheat ( Triticum aestivum ), rice ( Oryza sativa ) and sorghum ( Sorghum bicolor ) were manually exposed by removal of the coleoptile and the first three to four leaves. Using ballistic microtargeting, equal-sized gold particles of different diameters ranging from 1.0 to 2.0 µm were propelled to meristems by pulses of compressed nitrogen ranging from 9 to 13 MPa. When accelerated by 13 MPa, particles of 1.4 µm or larger penetrated to cells of L2 in 80% of the bombarded wheat meristems. Expression vectors containing either the gene for β-glucuronidase ( gusA ) or genes regulating the anthocyanin biosynthesis ( Bperu and C1 from maize) were delivered to wheat meristems. The level of transient gene expression was dependent on the osmotic pressure of the MS-based medium that was used to mount the explants for shooting: an increase of the sucrose concentration from 2 to 10% in the medium resulted in an increase of transient gene expression from 5 to 25% of the bombarded meristems. Although particles of 1.4 µm were efficiently delivered to L1 and L2, transient gene expression occurred predominantly in the L1 layer. In contrast, up to 10% of the bombarded meristems had expressing cells in L2 when particles of 2.0 µm were used. Ten days after bombardment, GUS-positive sectors in meristems and in leaf primordia were observed. When destructive GUS detection was omitted, between 80 and 90% of the bombarded ex-plants recovered in vitro on basal MS medium and then regenerated to fertile plants in the greenhouse. 相似文献
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