CD8~+CD122~+T细胞在脑缺血过程中作用的研究

目的:探讨CD8+CD122+T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法:线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO);激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8+CD122+T细胞/CD3+T细胞的比例及脾和胸腺中CD8+CD122+T细胞数量变化;RT-PCR方法检测CD8+CD122+T细胞对氧糖剥夺(Oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果:各时间点脑缺血组织中均有CD8+CD122+T细胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8+CD122+T细胞/CD3+T细胞比例逐渐增加,5 d和7 d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d0.05,P7d0.05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8+CD122+T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达显著增高,PIFN-γ0.01、PTNF-α0.001、PIL-1β0.01;CD122-blocked组与CD8+组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ0.05、PTNF-α0.05、PIL-1β0.01;CD8+组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P0.05;IL-1β表达有降低的趋势。结论:CD8+CD122+T细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。     

ZnCl_2阻断电压门控质子通道对缺氧后小胶质细胞产生活性氧及促炎因子的影响

为明确电压门控质子通道(voltage-gated proton channel,Hv1)对小胶质细胞的影响,研究了Hv1在正常、激活及抑制后对小胶质细胞活性氧、促炎因子产生的影响及机制,该研究使用原代培养的小胶质细胞,利用免疫荧光染色明确Hv1表达。用Hv1非特异性抑制剂Zn Cl2阻断该通道,用DCFH-DA染色、Real-time PCR观察糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)处理后小胶质细胞产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平的变化。采用Western blot检测Hv1和Nox2蛋白质水平。实验结果显示,小鼠脑部小胶质细胞可检测到Hv1通道的表达;单纯ODG组缺氧后小胶质细胞ROS、TNF-α、IL-1β的产生明显增加;而OGD加Zn Cl2干预组,小胶质细胞ROS、TNF-α、IL-1β的产生较单纯OGD组显著降低;Western blot显示,OGD导致小胶质细胞中Hv1和Nox2蛋白质水平显著增加。以上结果表明,小鼠脑部小胶质细胞存在Hv1通道蛋白质,Zn Cl2阻断该通道可降低OGD诱导的小胶质细胞ROS和TNF-α、IL-1β的产生,该抑制作用可能与其抑制NADPH氧化酶的作用相关。     

CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中作用的研究

目的：探讨CD8＋CD122＋T细胞在脑缺血过程中的作用及其机制。方法：线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）;激光共聚焦显微镜检测小鼠脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞浸润情况;流式细胞仪检测脑缺血组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞的比例及脾和胸腺中CD8＋CD12TT细胞数量变化;RT—PCR方法检测CD8＋CD122＋T细胞对氧糖剥夺（Oxygen—glucosedeprivation,OGD）条件下星形胶质细胞表达TNF-α,IL-1β,IFN-γ的影响。结果：各时间点脑缺血组织中均有CD8＋CD122＋T胞浸润,且随脑缺血时间延长,缺血侧脑组织中CD8＋CD122＋T细胞／CD3＋T细胞比例逐渐增加,5d和7d组差异显著,与非缺血侧相比,P5d〈0．05,P7d〈0．05;MCAO小鼠脾及胸腺中CD8＋CD122＋T细胞呈现先增高后降低的趋势。星形胶质细胞经OGD处理后,与对照组相比,IFN-γ、TNF-α、IL—1β表达显著增高,PIFN-γ〈0．01、PTNF-α〈0．001、PIL-1β〈0．01;CD122-blocked组与CD8＋组相比,IFN-γ、TNF-α、IL-1β表达明显增高,PIFN-γ〈0．05、PINF-α〈0．05、PIL-1β〈0．01;CD8＋组与HBSS组相比,IFN-γ表达降低,P〈0．05;IL-1β表达有降低的趋势。结论：CD8＋CD122可细胞在脑缺血过程中发挥保护性作用,其保护作用通过CD122抑制星形胶质细胞TNF-α,IL-1β,IFN-γ炎症因子表达实现的。     

ROCK特异性抑制剂Y27632对缺氧后少突胶质前体细胞分化的影响

目的观察ROCK特异性抑制剂Y27632对缺氧损伤(Oxygen-glucose deprivation,OGD)后少突胶质前体细胞分化的影响。方法培养SD大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞,实验分为对照组、对照+Y27632组、OGD组、OGD+Y27632组四组;对细胞进行OGD处理2h,取4d后时间点,进行免疫荧光组化染色和Western blot实验,检测细胞A2B5、NG2、O4及MBP蛋白表达情况。结果与对照组相比,OGD组表达少突胶质细胞特异性蛋白MBP量明显增多(P0.01);OGD+Y27632组比单纯OGD组表达少突胶质细胞特异性蛋白MBP的量显著增加(P0.01)。结论 OGD损伤可促进OPCs的分化,Y27632特异性抑制ROCK可以进一步促进OGD损伤后OPCs的分化,提示ROCK信号通路在缺氧诱导OPCs分化的过程中有重要的调控作用。     

TRPC3/6/7通道在氧糖剥夺星形胶质细胞凋亡中的作用

目的研究TRPC3/6/7在氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)后对星形胶质细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将体外培养星形胶质细胞分为空白对照组、野生型(wild type, WT)OGD/R组、TRPC3/6/7基因敲除OGD/R组,通过Western blot检测星形胶质细胞OGD/R后Bcl-2、Bax的变化,通过钙信号荧光测量技术检测星形胶质细胞OGD/R下的钙内流,通过流式细胞术对3组细胞进行凋亡率检测和分析。结果 TRPC3/6/7基因敲除鼠星形胶质细胞OGD/R后Bcl-2水平较野生型OGD/R组明显增高,Bax水平较野生型OGD/R组明显降低;钙影像结果显示,TRPC3/6/7基因敲除的星形胶质细胞经OGD/R处理后,Tg刺激引起的钙内流较野生型OGD/R组明显降低;TRPC3/6/7基因敲除鼠星形胶质细胞OGD/R后凋亡率较野生型OGD/R组明显降低。结论 TRPC3/6/7基因敲除可抑制OGD/R后星形胶质细胞凋亡的发生,并且能够抑制钙超载引起的脑缺血再灌注损伤,降低Ca~(2+)稳态失衡在脑缺血再灌注脑损伤中的作用。     

Juxtanodin（JN）表达下调对少突胶质细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨JN表达下调对少突胶质细胞氧化应激损伤的影响及其可能的机制。方法:采用大脑中动脉线栓法制备小鼠局灶性脑缺血模型,通过m NSS评分分析JN-/-小鼠及其同窝阴性对照鼠神经功能缺损的情况。通过制备少突胶质细胞系OLN93的氧糖剥夺模型(oxygen glucose deprivation, OGD)模拟脑白质缺血的病理改变。使用si RNA下调模型细胞中JN的表达,分析JN表达下调后模型细胞的存活情况以及与氧化应激有关的指标如乳酸盐脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性、一氧化氮(Nitric Oxide,NO)及丙二醛(Methane Dicarboxylic Aldehyde,MDA)等的变化情况;并通过western blot检测BNIP3(Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3, BNIP3)的表达变化。结果:JN-/-小鼠m NSS评分较其同窝阴性对照鼠升高(P0.05)。OGD模型细胞与对照组相比,其存活率及SOD活性分别下降35.82%及37.27%,LDH活性、MDA及NO水平分别升高52.01%,86.15%及149.78%,且BNIP3蛋白表达上调461%(P0.01)。而与OGD模型组相比,JN表达下调可使细胞存活率和SOD活性分别下降33.23%及33.31%,而LDH的释放、MDA及NO水平分别增加58.12%,57.02%及52.64%,且BNIP3表达上调72%(P0.01)。结论:敲除JN使小鼠在脑缺血后神经功能恶化,而JN表达下调可使少突胶质细胞对氧化应激损伤更敏感,其机制可能与BNIP3表达上调有关。     

TRPC3参与糖氧剥夺致培养的少突胶质细胞凋亡

目的:研究瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)少突胶质细胞的凋亡。方法:以原代培养的新生SD大鼠少突胶质细胞为对照组,以OGD2h的少突胶质细胞为模型组,将模型组+Pyr3阻断设为处理组。采用蛋白质免疫印迹法检测TRPC3蛋白的表达水平,MTT试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,fluo-3染色后经流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定胞内游离钙的变化。结果:少突胶质细胞A2B5和MBP特异性标记阳性,细胞纯度可达到95%以上;少突胶质细胞OGD2h成功建立OGD模型;OGD组TRPC3蛋白表达增加;OGD组细胞活性为(54.34±6.55)%,凋亡率为(24.24±0.86)%,与对照组有显著差异(P0.05),Pyr处理组细胞存活率为(72.26±5.41)%,凋亡率为(14.82±0.28)%,与OGD组有显著差异(P0.05);OGD组胞内游离钙浓度显著升高,而Pyr3阻断以后可以部分抑制其升高。结论:TRPC3表达增加介导胞内游离钙离子水平的升高可能是OGD少突胶质细胞凋亡的重要原因之一。     

阻断趋化因子CXCL10对脑缺血再灌注损伤及神经炎症的影响

目的:探讨趋化因子CXCL10在脑缺血再灌注损伤中对神经炎症的影响。方法:(1)线栓法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,TTC染色检测梗死面积,Western blot检测CXCL10的表达;(2)建立小鼠神经瘤母细胞N2a氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型,通过CXCR3拮抗剂-NBI 74330阻断趋化因子CXCL10表达,Western blot检测CXCL10和CXCR3蛋白的表达;Real-time PCR检测CXCL10、CXCR3以及神经炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-2 m RNA的表达。结果:(1)脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)模型大鼠脑梗死侧CXCR10的表达量显著高于其对侧和假手术组(P<0.05);(2)阻断CXCL10使得小鼠神经瘤母细胞N2a中CXCL10、CXCR3以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-2的表达量均显著降低(P<0.05);(3)阻断CXCL10使得小鼠神经瘤母细胞细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:抑制CXCL10降低了氧糖剥夺模型细胞炎症因子的表达,表明阻断CXCL10可能通过减轻神经炎症在脑缺血再灌注损伤中发挥保护作用。     

低氧促进脂多糖诱导小胶质细胞CXCL10表达

本文旨在观察低氧处理对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小胶质细胞CXC趋化因子配体10 (CXC-chemokine ligand-10,CXCL10)表达的影响,并探讨其作用机制。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、低氧组、LPS组以及低氧联合LPS组,LPS组腹腔注射0.5 mg/kg LPS,低氧组放置于低压低氧舱(模拟海拔6 000 m)中,处理6 h后收集血清和海马组织样品。用ELISA法检测血清和海马组织中CXCL10的含量。用低氧(1%O2)和/或LPS (100 ng/mL)刺激小胶质细胞系BV2和原代小胶质细胞6 h,用实时定量PCR检测细胞CXCL10 mRNA表达水平,用ELISA检测细胞培养上清中CXCL10的含量,用Western blot检测核因子κB (nuclear factorκB, NF-κB)信号通路相关蛋白p65和IκBα的表达。另外,用小分子化合物PDTC阻断NF-κB信号通路后检测BV2细胞CXCL10 mRNA表达水平。结果显示,在LPS诱导的小鼠炎症模型中,低氧处理可促进LPS对小鼠血清和海马组织中CXCL...     

二十二碳六烯酸对氧糖剥夺环境下大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响

摘要 目的：评价二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)预处理对氧糖剥夺环境下(Oxygen and glucose deprivation,OGD)大鼠脑星形胶质细胞凋亡及血管生成因子分泌的影响。方法：大鼠脑星形胶质细胞传代培养,第3~4代用于实验。采用随机数字法将培养的细胞分为6组：正常对照组、OGD组、OGD+10 μMDHA组、OGD+40 μMDHA组、OGD+10 μMDHA+GW9662组、OGD+40 μMDHA+GW9662组。在所有缺氧模型组(除正常对照组外)先用无糖、无血清的DMEM液置换原培液;其次在OGD+10 μMDHA、OGD+40 μMDHA、OGD+10 μMDHA+GW9662、OGD+40 μMDHA+GW9662组加入相应浓度的DHA,同时在OGD+10 μMDHA+GW9662组和OGD+40μMDHA+GW9662组加入5 μM GW9662(过氧化物酶体增殖物激活受体PPARγ的抑制剂)。预处理完成后,正常对照组和其余各组分别在5% CO₂:95%空气和94％N₂:5％ CO₂:1％O₂条件下培养24 h。采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附剂测定（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测培养上清液中的促血管生成素1（Angiopoietin-1,Ang1）、促血管生成素2（Angiopoietin2,Ang2）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的分泌量,Western blotting法检测Bax、Bcl-2、caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,其余组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显降低(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA组和OGD+40 μMDHA组细胞凋亡率、Bax、Caspase-3表达水平明显降低(P＜0.01),而Bcl-2、Bcl-2/Bax表达明显增加(P＜0.01);Ang1分泌量明显增加(P＜0.01),而Ang2和VEGF分泌量明显降低(P＜0.01);上述各指标的差异在OGD+40 μMDHA组里更加显著(P＜0.01)。与OGD组比较,OGD+10 μMDHA+GW9662和OGD+40 μMDHA+GW9662组各个观察指标均无明显差异(P＞0.05)。相关性统计分析结果显示细胞凋亡率与Ang1水平呈显著负相关(P<0.01),与Ang2和VEGF的水平呈显著正相关(P<0.01)。结论：二十二碳六烯酸(DHA)预处理能够减少大鼠脑星形胶质细胞在氧糖剥夺(OGD)环境下的凋亡,其机制与增加Ang1分泌,减少Ang2和VEGF分泌,进而调控Ang/Tie2信号通路相关。     

SEC-10在秀丽线虫逆行行为中功能的研究

秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)是一种研究行为和神经系统相互关系的良好的模式生物,可以在实验条件下给予它物理、化学等多种外部刺激,也可以在分子水平改变其基因结构以改变线虫的行为方式,从而进一步研究神经系统中与行为相关的分子机制.以sec-10突变为遗传背景,采用一种秀丽线虫逆行行为的简单测定方式,研究发现sec-10突变导致线虫逆行动作增多,初步探讨了在突变体线虫的神经系统中重新表达野生型SEC-10可以回复该逆行行为缺陷.     

Genetics of human height

Height is correlated with risk to certain diseases and various socio-economic outcomes. As an easy to observe and measure trait, it has been a classic paradigm in the emergence of fundamental concepts regarding inheritance and genetics. Resemblances in height between relatives suggest that 80% of height variation is under genetic control with the rest controlled by environmental factors such as diet and disease exposure. Nearly a century ago it was recognised that many genes were likely to be involved but it is only with recent advances in technology that it has become possible to comprehensively search the human genome for DNA variants that control height. About 50 genes and regions of the genome have been associated with height to date. These begin to explain the biological basis of height, its links to disease and aid our understanding of the evolution of human height. The genes discovered so far have a very small individual effect and hundreds, maybe thousands, more of even smaller effects are still lost in the genome. Despite a successful start to height gene mapping, there remain considerable theoretical, technological, and statistical hurdles to be overcome in order to unravel its full genetic basis.     

转基因克隆牛胎盘中印迹基因PEG10的DNA甲基化水平

低效率的体细胞核移植技术显著制约着该技术在转基因动物生产上的广泛应用。目前认为供体细胞核不能被受体卵母细胞胞质完全的表观重编程是其效率低下的最主要原因,而DNA甲基化是基因表观修饰的主要方式之一。为了探求转基因克隆牛的死亡是否与其胎盘中印迹基因的甲基化的重编程程度相关,文章通过亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)和亚硫酸氢盐联合限制性内切酶分析法(Combined bisulfite restriction analysis,COBRA),对印迹基因PEG10在围产期死亡且存在发育缺陷的转基因克隆牛的胎盘(死亡组)和存活的转基因克隆牛的胎盘(存活组)与正常对照牛胎盘(对照组)的DNA甲基化水平进行了详细的比较。结果发现,与对照组相比,PEG10基因在死亡组上表现出异常的超甲基化水平,而存活组与对照组相比无显著性差异。研究结果显示,胎盘中印迹基因的DNA甲基化表观重编程不彻底可能是导致转基因克隆牛发育异常进而死亡的主要原因之一。     

小鼠KCTD10特异性抗体制备及其在小鼠背神经上皮和背根神经节中的表达

KCTD10蛋白是一个TNF-α诱导表达的蛋白,能与DNA聚合酶δ的小亚基和PCNA相互作用。但其具体功能尚不清楚。为了研究KCTD10的功能,用小鼠KCTD10融合蛋白免疫新西兰大白兔获得兔抗鼠KCTD10多克隆抗体。由于小鼠KCTD10蛋白与小鼠PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白有较高的蛋白序列相似性,KCTD10抗体同PDIP1蛋白、TNFAIP1蛋白有抗体交叉反应。将同源蛋白PDIP1和TNFAIP1的部分降解片段与抗KCTD10血清在4℃下孵育3h从而消除非特异性抗体,成功地消除了KCTD10多克隆抗体对PDIP1蛋白和TNFAIP1蛋白的交叉反应。用此抗体做小鼠胚胎及胚胎切片的免疫组化,发现KCTD10蛋白在E12.5d的小鼠胚胎背根神经节以及神经管神经上皮中有明显的表达。该结果提示KCTD10可能在小鼠的神经管神经上皮和背根神经节发育中发挥作用。     

Distal trisomy of 10q. Report of a new case of duplication 10q25.2-25.3-->qter defined by FISH

In the present work, we report on a 2.5-year-old male patient with typical clinical features of partial trisomy of the distal third of chromosome 10 long arm. The karyotype was: 46,XY, dir dup(10)(q25.2-25.3-->qter). The identification of the duplicated segment was carried out by the fluorescence in situ hybridization technique using region-specific probes. The proband's phenotype is compared with previously reported cases.     

蛋白酶体的结构与功能

蛋白酶体又称26S蛋白酶体,由催化颗粒（CP）和调节颗粒（RP）构成。CP含α亚基和β亚基各7个,且各自成环,组成圆桶样结构。其中α环位于圆桶两端,β环位于中间。RP分为三倍体ATP酶亚基（Rpt)和非ATP酶亚基（Rpn)。基高级结构分为盖部和基底部。基底部位于CP的两端,由6个Rpt和Rpn组成。盖部由其他Rpn构成,位于基底部外侧。蛋白酶体具有蛋白水解酶活性,Rpt水解ATP供能。蛋白酶体水解作用需要泛蛋白参加,位于盖部的Rpn10是其受体。部分RP还具有与蛋白质水解无关的其他作用,如参与DNA修复工作等。蛋白酶体经不同的加工可以转变为免疫蛋白酶体,橄榄球蛋白酶体和杂化蛋白酶体,各有其重要的生理功能。     

江苏水稻黑条矮缩病毒S10的cDNA克隆序列分析

从来自江苏连云港并在本实验室保存的水稻黑条矮缩病毒接种的病株玉米中提取dsRNA,采用改进的单引物扩增技术获得了病毒基因组片段S10的cDNA克隆并测定了其全序列.结果表明S10全长1 801bp,含有一个ORF,组织结构与日本报道的RBSDV基本一致,核苷酸和推导的氨基酸序列与MRDV的相似性分别为87.5%和92.6%,与RBSDV的相似性分别为93.3%和96.4%.该研究也为病毒dsRNA克隆和序列分析奠定了基础.     

High-performance capillary electrophoresis measurement of dolastatin-10

A high-performance capillary electrophoresis (HPCE) assay was used to determine the concentration of a potent cytotoxic agent, dolastatin-10, in human plasma. Following extraction from plasma, using a solid-phase C₁₈ cartridge, capillary zone electrophoresis was used to separate, detect and quantitate dolastatin-10 using the structurally related compound dolastatin-15 as the internal standard. Migration times for both dolastatins are less than 20 min. The recovery of the drug was approximately 90% and was quantified over the assay range of 39 to 5000 ng/ml with good precision and accuracy. The method is linear up to 5000 ng/ml with a lower limit of detection of 25 ng/ml. Data resulting from the use of the assay for the in vitro metabolism of the drug are presented. This is the first report of a validated HPCE assay for determining dolastatin-10 levels in human plasma.     

磁胁迫对烟草细胞生长和CoQ10含量的影响

用0.4 T恒定磁场处理烟草细胞0.5～1.5 h后,细胞活力和存活率可受到一定的影响,但处理间差异不显著.处理0.5～1.0h的细胞分裂指数和细胞生物量显著提高,分别提高15.4%和49.6%,细胞干重分别提高18.4%和42.3%,但CoQ10的生物合成和积累受抑.处理1.5 h的细胞分裂和细胞生长受抑,但CoQ10的生物合成和积累得到促进,CoQ10含量提高25.2%.     

几种营养物质对烟草细胞生长和CoQ10含量的影响

研究了蔗糖、KH₂PO₄、NH₄NO₃比对烟草细胞生长和CoQ₁₀量的影响,结果表明,当蔗糖浓度为30g/L时,CoQ₁₀总量最高,此时细胞产量、CoQ₁₀含量和总量分别为19.8g/L、414.7μg/g(dwt)、8212μg/L。在上述蔗糖浓度下,当KH₂PO₄起始浓度为340mg/L、NH₄NO₃为12时,细胞产量、CoQ₁₀含量和总量分别最高,高于此比例时有利于CoQ₁₀形成 ,但不利于细胞生长。