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产气肠杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性?… 总被引:3,自引:0,他引:3
用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出0.9kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒,pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。 相似文献
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重组α—乙酰乳酸脱羧酶的表达及部分酶学特性 总被引:2,自引:0,他引:2
用聚合酶链式反应方法以短芽胞杆菌基因组DNA为模板,克隆出0.97kb的DNA片段,经DNA测序证明α-乙酰乳酸脱羧酶基因。将该基因重组到质pBV220中,构建了重组表达质粒pBVYI,转化大肠杆菌DH5α后,经筛选得到了能表达0633-ALDC活性的转化子细胞。 相似文献
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二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用 总被引:3,自引:0,他引:3
利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
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利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
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α—乙酰乳酸脱羧酶的研究 总被引:7,自引:1,他引:6
从细菌中筛选出14株α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌。从其中的一株α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌提取粗酶,将粗酶样品分别加到主发酵的啤酒和主发酵后的啤酒后,在两种情况下均能明显降低啤酒中的总双乙酰量。 相似文献
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一个新的水稻MADS—box基因的克隆及表达分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据MADS-box基因保守区结构,设计简并性引物,利用3'RACE从水稻(Oryza sativa L.)中克隆了1个新的水稻MADS-box基因的cDNA片段,同时利用5&RACE获得了全长cDnA命名为FDRMADSS。序列分析表明,该cDNA全长1406bp,开放阅读框共编码233个到,具有典型的植物MADS-box基因的结构。推测的氨基酸序列与拟南芥的MADS-box基因,AGL14同 相似文献
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大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
胰岛β-细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶(Glutamicaciddecarboxylase,GAD,EC4.1.1.15)同源物,以双链cDNA为模权,用PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑GAD基因的cDNA将此包括编码593个氨基酸的全长DNA片段重组入pUC质粒并用双脱的氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为1779bp,经比较发现Wistar大鼠脑与Russell报导的大鼠脑G 相似文献
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淀粉样前体蛋白(APP)是阿尔茨海默氏病(AD)病因学中重要的分子,但其正常的生理功能尚不清楚.为了研究细胞内过量产生其各种片段对细胞生理机能的影响.将人APP695cDNA中编码C端105个氨基酸残基的DNA片段重组到真核表达载体pDORneo中形成重组质粒pDOR-neo-CT.然后用脂质体将其转染到人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中.用800μg/mlG418筛选获得了在mRNA和蛋白质水平均表达相应片段的稳定细胞系.MTT和LDH分析表明,APPC端的表达未能对SH-SY5Y细胞产生明显的毒性作用. 相似文献
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α-乙酰乳酸脱羧酶加速啤酒成熟的研究进展与应用 总被引:15,自引:0,他引:15
较详细地介绍了国内外α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)的分子生物学研究,细菌ALDC基因在酵母菌中的克隆和表达,以及ALDC酶制剂加速啤酒成熟的应用。 相似文献
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胰岛β-细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶(Glutamicaciddecarboxylase,GAD,EC4.1.1.15)同源物。以双链cDNA为模板,用PCR方法快速克隆了Wistar大鼠脑GAD基因的cDNA,将此包括编码593个氨基酸的全长DNA片段重组入pUC质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为1779bp.经比较发现Wistar大鼠脑与Russell报导的大鼠脑GAD基因序列,有一处碱基的差别,但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用PCR扩增长片段DNA进行了方法学上的探讨。 相似文献
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CD40配体(CD40L)是TNF超家族成员,表达于人活化的CD4^+T细胞表面,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相就受体CD40分子相互作用,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD40L全长cDNA质粒中扩增CD40L胞外段编码cDNA,即可溶性CD40L(sCD40L)编码cDNA,并克隆入pSK质粒;cDNA序列经测序证实后与pPICZαA质粒重组构建成pPICZαA-s 相似文献
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LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaI片段的作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuI位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的cDNA含有可译框架的全 相似文献
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α-乙酰乳酸脱羧酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合型表达 总被引:2,自引:0,他引:2
α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中能加快啤酒成熟,有重要的应用价值。本研究将枯草芽孢杆菌启动子P43克隆到质粒pUC19-ALDC中的α-乙酰乳酸脱羧酶基因之前,得到重组质粒pUC19-P43-ALDC。重组质粒pUC19-P43-ALDC与质粒pMLK83-BN同源重组,筛选得到枯草芽孢杆菌整合质粒pMLK83-ALDC。用此整合质粒转化枯草芽孢杆菌1A751,挑选出新霉素抗性且无淀粉酶活性的重组菌株。此菌株用LB培养基在37℃、220r/min摇瓶培养过夜,测得α-乙酰乳酸脱羧酶活力为15.6U/mL,说明整合的α-乙酰乳酸脱羧酶基因能够在重组菌株中稳定传代和表达。本研究首次在枯草芽孢杆菌中用整合型的方式重组表达了α-乙酰乳酸脱羧酶,提出了一种有潜力的生产α-乙酰乳酸脱羧酶的新方法。 相似文献
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大鼠甘氨肽酰化单氧酶在CHO细胞中的活怀表达及在体外酰胺化?… 总被引:2,自引:0,他引:2
将大鼠脑CDNA库来源的PAM基因片段,经克隆重组,成真核表达质粒PSV-PAM〈并转染CHO细胞,获得在CHO中稳定表达活性型α-酰胺化酶的细胞株DGAE。 物为双功能酶,分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。体外酰胺化加工研究表明。以α-N_acetyl-Tyr-Val-Gly为底物,该酶催化反应的Km为12.5μmol/L,Vmax为180μmol/mg/h,而且催化反应中表现中有最适铜离子浓度 相似文献
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将尿激酶原(pro-UK)cDNA和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)A链cDNA克隆到M13mp18中,经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到u-PA(Leu144-Gly408)/t-PA(Ser1-Thr263)(ut-PA)融合基因.将ut-PA融合基因克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCM-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞,筛选稳定表达株.收集无血清表达上清,经苯甲脒柱纯化得到ut-PA纯品,SDS-PAGE和纤维蛋白自显影显示ut-PA有两种分子量形式,分子量分别为68kD和61kD.纤维蛋白亲和性试验表明,LUK(低分子量尿激酶)对纤维蛋白没有亲和性,而含有LUK的ut-PA则对纤维蛋白表现出很强的亲和性,但ut-PA的亲和性略低于亲本t-PA. 相似文献
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丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用 总被引:3,自引:0,他引:3
通过逆转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR),从中国人丙型肝炎病毒(HCV)携带者的血清中扩增并克隆到2段cDNA片段,即HCV基因组C区抗原基因C831cDNA片断(约530bp)和NS3区抗原基因C33ccDNA片段(约860bp)。C33ccDNA片段同C831cDNA片段经连接 肽Ser-Pro-Gly-Ser连接成为基因嵌合体C33c-C831(约1400bp)。C33c-C831基因嵌合体同温控型原核表达载体pBV220重组,构建成表达质粒pBV/C33c-C831,并在大肠杆菌细胞中获得了重组嵌合抗原C33c-CL的表达。通过酶切分析和Western免疫印迹法,对约占菌体可溶性蛋白9%的表达产物做了鉴定。采用TritonX-100和盐析处理,获得粗提表达产物。粗提的表达产物经尿素裂解和离子交换层析纯化,得到可用于检测抗HCV核壳蛋白和抗NS3区抗体的重组嵌合抗原C33c-CL。对C33c-CL做抗原性分析发现,它同时具有完整的C33c抗原和C22抗原的免疫反应活性,完全能替代单纯的C33c和C22抗原。该嵌合抗原在血清学诊断中有重要的应用价值,可望成为新一代HCVEIA诊断试剂的优选抗原。 相似文献