几种细胞因子对HSV─1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ─１接种人单核细胞系Ｕ＿（９３７）和小鼠腹腔巨噬细胞,并在接种前后分别以不同的细胞因子处理。经病毒滴定、免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因,研究了细胞因子对ＨＳＶ─１感染单核巨噬细胞的影响。结果证实,ＴＮＦ─α５０ｕ／ｍＬ　、Ｍ─ＣＳＦ２００ｕ／ｍＬＩＦＮ─γ１０００ｕ／ｍＬ、ＩＦＮ－α１０００ｕ／ｍＬ均能增强单核巨噬细胞对ＨＳＶ─１的抗性,加速细胞对ＨＳＶ─１ＤＮＡ的清除,抑制病毒抗原的表达;并能拮抗ＬＰＳ对ＨＳＶ─１在单核巨噬细胞中表达的促进作用。     

几种细胞因子对HSV—1感染单核巨噬细胞的影响

以ＨＳＶ－１接种人单核细胞系Ｕ９３７和小鼠腹腔巨噬细胞，并在接种前后分别以不同的细胞因子处理，经病毒滴定，免疫荧光试验检测病毒抗原及多聚酶链反应技术检测病毒基因研究了细胞因子对ＨＳＶ－１感染单核巨噬细胞的影响。结果证实，ＴＮＰ－α５０ｕ／ｍＬ，Ｍ－ＣＳＦ２００ｕ／ｍＬ，ＩＦＮ－γ１０００ｕ／ｍＬ，ＩＦＮ－α１０００ｕ／ｍＬ均能增强单核巨噬细胞对ＨＳＶ－１的抗性，加速细胞对ＨＳＶ－１ＤＮＡ的清除，抑     

巨噬细胞,细胞因子与人类免疫缺陷病毒

单核－巨噬细胞是人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染的主要靶细胞之一。本文概述了ＨＩＶ感染后,体内外细胞因子的产生情况,各种细胞因子如ＩＬ－２、ＩＬ－１０、ＩＦＮ－α、转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）和ＴＮＦ－α等对ＨＩＶ在巨噬细胞中表达的调控及影响ＨＩＶ表达的机制,并对今后的研究方向进行了展望。     

RT—nested PCR检测肾综合征出血热患者血清病毒核酸

采用异硫氰酸胍－酚－氯仿（ＡＧＰＣ）一步法提取病毒ＲＮＡ,并依据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）核蛋白（ＮＰ）编码基因保守区核苷酸序列合成两对巢式引物,建立了逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测ＨＦＲＳＶＲＮＡ方法,应用此法对ＨＦＲＳＶ感染的ＶｅｒｏＥ６细胞培养液及ＨＦＲＳ患者血清中的病毒ＲＮＡ进行检测。结果显示,感染细胞培养液及３５例ＨＦＲＳ患者血清均为阳性,正常的ＶｅｒｏＥ６     

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）对常见呼吸道病毒的抑制作用

用人重组肿瘤坏死因子－α（Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）和人天然α干扰素（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－α－,ＩＦＮ－α）在人胚胎肺纤维母细胞（ＨＥＦ）和Ｈｅｐ－２细胞系上对常见呼吸道病毒所致细胞病变抑制进行比较观察。病毒包括不同型别的腺病毒５株,单疱病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－Ｉ）１株,鼻病毒１株,仙台病毒１株,ＶＳＶ１株。结果提示ＴＮＦ－α和ＩＦＮ－α均具有广谱抗病毒活性。ＴＮＦ－α的抑毒作用能被ＴＮＦ－α申抗和ＩＦＮ－β单抗完全去除,被ＩＦＮ－α单抗部分去除ＴＮＦ－α的抗病毒效应。ＴＮＦ－－α中和试验的结果提示：ＴＮＦ抗病毒活性仍为ＩＦＮ－β诱生所介导。     

巨噬细胞,细胞因子与人类免疫缺陷病毒感染的关系

目的研究认为在人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染过程中除了ＣＤ４＾＋Ｔ细胞外,单核巨噬细胞是ＨＩＶ最易侵犯的目标。同时认为ＨＩＶ感染单核－巨噬细胞不仅受各种细胞因子的调节,而且ＨＩＶ的感染能影响因素的产生。本文重点介绍限ＨＩＶ感染单核－巨噬细胞的机制、体内外有关细胞因子产生的研究及各种细胞因子对ＨＩＶ表达的调节作用。通过细胞因子网络功能的研究,进一步阐明ＨＩＶ致病机制,并积极探索出治疗ＨＩＶ感染造成免     

老年大鼠单核／巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多

为研究老年时肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）分泌及表达的改变,在内毒素（ＬＰＳ）１．０μｇ／ｍｌ刺激大鼠单核／巨噬细胞后,用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定培养液中ＴＮＦ－α含量,用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＫ）测定ＴＮＦ－αｍＲＮＡ。同时测定培养液中一氧化氮（ＮＯ）和前列腺素Ｉ２（ＰＧＩ２）的含量。结果显示：老年鼠ＴＮＦ－α分泌量及其ｍＲ－ＮＡ明显高于青年鼠。ＮＯ产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠ＰＧＩ２分泌明显低于青年鼠。由于ＰＧ能抑制ＴＮＦ－α释放,从而推测,ＰＧＩ２产生能力的降低可能是老年大鼠单核／巨噬细胞ＴＮＦ－α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。     

重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合,置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游,构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１）,ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性,说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．     

α-黑色素细胞刺激素的神经免疫调节作用

许多证据表明α－黑色素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）是一种内源性的神经免疫调节肽,可抑制发热与主要类型的实验性炎病。在人类,炎性部位的α－ＭＳＨ浓度升高,感染性疾病或内毒素注射后血浆中α－ＭＳＨ浓度也升高。α－ＭＳＨ有拮抗前炎性细胞因子的作用,并可抑制其生成。这种抗细胞因子肽的免疫调节效应经下述途径产生：（１）直接作用于外周巨噬、单核和嗜中性粒细胞等免疫细胞上的α－ＭＳＨ本;（２）作用于脑内神经元上的α     

单核／巨噬细胞分泌TNF—α的调控及在老年时的改变

肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）是一种主要由单核／巨噬细胞分泌的细胞因子。它不仅有杀伤肿瘤细胞的特性,还在炎症、休克和自身免疫等病理过程中起重要作用。刺激巨噬细胞分泌ＴＮＦ－α的主要物质有内毒素、病毒、某些细胞因子和有丝分裂原以及神经肽等。而前列腺素Ｅ（ＰＧＥ）、ｃＡＭＰ类似物和肾上腺素类等可抑制其分泌。很多文献报道ＴＮＦ－α在老年时单核／巨噬细胞的分泌有改变。     

LPS介导细胞激活的信号转导：从CD14到p38MAPK通路的研究

近年来对脂多糖（ＬＰＳ）介导细胞激活的信号转导过程已取得实质性进展,ＬＰＳ与血浆ＬＰＳ结合蛋白（ＬＢＰ）结合被运输到单核巨噬细胞表面,与ｍＣＤ１４受体结合起起细胞激活。ＭＡＰＫ参与了ＬＰＳ激活细胞产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等活性物质的细胞内信号转导过程。ｐ３８ＭＡＰＫ对ＴＮＦ－α等细胞因子具有重要的调节作用。对ＬＰＳ激活细胞的信号转导研究呆能为治疗内毒素休克提供新的理论和思路。     

用逆转录病毒载体表达人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子

应用基因工程的方法,将含有巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的基因片段和人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）的ｃＤＮＡ,克隆进逆转录病毒载体Ｎ２Ａ,得到重组质粒Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ｈＧＭ－ＣＳＦ．经脂质体包装并转染包装细胞,通过Ｇ４１８药物筛选,得到抗性克隆。经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ检测证实,ＧＭ－ＣＳＦ基因已整合到该克隆细胞的染色体上,获得的逆转录病毒滴度达１０￣４ＣＦＵ／ｍｌ,克隆细胞培养上清用ＴＦ－１细胞可检测到ＧＭ－ＣＳＦ活性。     

乳腺癌HSV—1,HSV—2与c—erbB—2的免疫组化研究

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测５２例手术切除乳腺癌组织ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白和ＨＳＶ－１、ＨＳＶ－２表达情况。结果发现癌组织中ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性３４例（６５．４％）;ＨＳＶ－１阳性３８例（７３．１％）;ＨＳＶ－２阳性１５例（２８．８％）。癌旁组织３２例,阳性分别为３例（９．４％）;１２例（３７．５％）;２例（６．３％）。乳腺癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率明显高于癌旁组织。乳腺癌及癌旁的ＨＳＶ－１阳性率明显高于ＨＳＶ－２,乳腺癌ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性组中ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２的表达有显著差异,而在阴性组二者无差异,提示乳腺癌的发生可能和ＨＳＶ－１感染密切相关,ｃ－ｅｒｂＢ－２表达也可能和ＨＳＶ－１感染有关。     

AHF及NE、人参皂甙对不同年龄大鼠VSMC c-myc基因和HSP_(70)基因表达的影响

用原位杂交法及激光光密度计灰度扫描半定量法,比较了老年组（２４月龄）与青年组（６周龄）Ｗｉｓｔａｒ大鼠离体培养的主动脉ＶＳＭＣ（５－１０代）ｃ－ｍｙｃ与ＨＳＰ７０基因的表达及红细胞抗高血压因子（ＡＨＦ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）与人参皂甙对上述基因表达的影响。结果表明：１．增龄导致的ＶＳＭＣ增殖很可能与ｃ－ｍｙｃ基因的过度表达有关,ＮＥ、ＡＨＦ和人参皂甙可以通过调控ｃ－ｍｙｃ基因的表达来影响ＶＳＭＣ增殖。２．增龄伴随的应激能力下降可能与ＨＳＰ７０基因表达的减少有关。３．ＨＳＰ７０基因也可能参与了ＶＳＭＣ增殖与分化的调控,ＮＥ、ＡＨＦ与人参皂甙可能通过调控ＨＳＰ７０基因的表达来影响ＶＳＭＣ的增殖     

重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标记的非融合蛋白基因转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃ将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）基因成功地插入病毒ＡｃＮＰＶ的基因组中．ｈＧＭ－ＣＳＦ基因在感染重组病毒的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）培养细胞Ｓｆ９中得到表达,感染后的Ｓｆ９细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达２．７×１０５５ＣＦＵ／ｍｌ。以ｈＧＭ－ＣＳＦ单抗所作的ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ表明,表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ对是３种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为１５ｋｄ,１８ｋｄ和２０ｋｄ。     

TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成     

过量表达的hTR75可独立介绍hTNFα的细胞毒性

利用细小ＲＮＡ病毒属脑炎和心肌炎病毒（ＥＭＣＶ）的内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）元件构建了人肿瘤坏死因子受体－７５基因（ｈＴＲ７５）和新霉素抗性基因（ｎｅｏ＾Ｒ）的双顺反子表达载体,通过电脉冲转染ＢＨＫ－２１细胞,筛选出分别和同时稳定过量表达两种ｈＴＮＦ受体的细胞株。这些细胞在ｍＲＮＡ和蛋白质水平均可检测到ｈＴＲ７５的表达。利用野生型和具有两种受体选择性结合活性的ｈＴＮＦα突变体对这些细胞株进行测定     

培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生巨噬细胞集落刺激因子及其受体的表达

本研究用培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）,结果如下：（１）用生物活性检测法发现ＶＳＭＣｓ无血清条件培养液可刺激巨噬细胞集落形成,其作用能被抗巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）抗体抑制;（２）用免疫细胞化学技术证明ＶＳＭＣｓ存在ＭＣＳＦ受体;（３）用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ技术证明ＶＳＭＣｓ有ＭＣＳＦ及其受本的ｍＲＮＡ表达,血清刺激使两者表达明显增强。本研究首次报道了培养大鼠主动脉ＶＳＭＣ     

人类疱疹病毒6型可诱生TNF－α

用生物活性法和双抗体夹心桥联酶免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测了人类疱疹病素６型（ＨＨＶ－６）ＧＳ株和南京地方株ＣＮ５,８,１０感染的淋巴细胞培养上清中的肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的水平,发现培养２４ｈ即可检出高水平的ＴＮＦ,４８～７２ｈ述到峰值,此后逐渐下降,与未感染耐照组比较有及其显著的差异（Ｐ＜０．００１）。ＧＳ株与地方株同诱生ＴＮＦ水平无儿著性差异（Ｐ＞０．１）,三株地方株诱生ＴＮＦ也无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。ＴＮＦ－α单抗可以完全中和培养上清中ＴＮＦ的活性,证实上清中有ＴＮＦ－α。与ＬＰＳ比较,ＨＨＶ－６诱生ＴＮＦ－α的能力要强得多。     

HIV—1 SF2株env基因（120）在大肠杆菌中的表达

运用基因重组技术,将ＨＩＶ－１ ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组,构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ,并在大肠杆菌（Ｅ．ＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达,经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ反应证实,该重组蛋白与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。