脐带间充质干细胞介导TLR4/NF-κB炎症通路及氧化应激改善NAFLD大鼠肝脏损伤作用研究

目的探讨脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠肝脏损伤的作用及其与TLR4/NF-κB炎症通路和氧化应激的关系。 方法SD大鼠随机分为3组：正常对照组（NC组）、模型对照组（MC组）和hUC-MSCs治疗组（MC+hUC-MSCs组）。每组大鼠均为10只,分别喂食常规或高糖高脂饲料并给予相应治疗8周,其中MC+hUC-MSCs组每两周尾静脉注射含5×10⁶个hUC-MSCs。检测各组肝指数、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。光镜和电镜观察大鼠肝脏组织病理改变,评估NAFLD活动度积分（NAS）;Western Blot法检测大鼠肝脏组织超氧化物歧化酶（SOD）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）Toll样受体4（TLR4）和核因子-κB （NF-κB）蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。 结果干预结束后,（1）NC组TG（0.96±0.29）?mmol/?L、TC（2.23±0.37）mmol/L、LDL（0.71±0.18）mmol/L、HDL（2.95±0.27）mmol/L,与MC组TG（5.79± 0.68）mmol/L、TC（6.08±0.79）mmol/L、LDL（6.06±0.31）mmol/L、HDL（0.75±0.18）?mmol/?L比较差异具有统计学意义（均P < 0.05）;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组上述指标差异具有统计学意义（均P < 0.05）。（2）光镜下NC组肝细胞形态正常;MC组出现肝细胞脂肪变性、肝小叶排列不齐及炎症细胞浸润;而MC+hUC-MSCs组肝组织病理改变明显好转。与NC组比较,MC组肝组织NAS升高;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组NAS降低[（0.36±0.16）分vs（8.72±0.35）分、（4.78±0.51）分,P < 0.05]。电镜下亦观察到与MC组比较,MC+hUC-MSCs大鼠肝细胞脂肪变性、胞核变形、内质网和线粒体形态异常明显改善。（3）与NC组比较,MC组大鼠TNF-α、IL-6、8-OHdG、TLR4和NF-κB蛋白表达均增高（均P < 0.05）,SOD降低（P?< 0.05）;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠上述指标改善（P < 0.05）。 结论hUC-MSCs通过抑制氧化应激和TLR4/NF-κB而保护NAFLD大鼠肝脏功能。     

硫化氢通过调控SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨硫化氢（H₂S）对阿霉素（DOX）诱导的H9c2细胞损伤的影响及其作用机制。 方法H₂S对DOX心肌毒性保护作用的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/?L DOX处理组（A组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（B组）,400?μmol/L NaHS单独处理组（C组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（D组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（E组）。SIRT1是否参与H₂S抗DOX心肌毒性作用机制的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/L DOX处理组（F组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（G组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（H组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（I组）。使用MTT法检测细胞活力;Elisa法检测细胞MDA以及SOD水平;DCFH-?DA荧光探针法检测ROS水平;采用Western Blot法检测SIRT1蛋白表达。使用单因素方差分析法进行统计学分析。 结果NaHS预处理可抑制DOX导致的H9c2细胞活力下降：Control组,A组、B组、C组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.05±4.31）﹪、（100.22±4.46）﹪ （F = 134.9,P < 0.001）。NaHS预处理可减弱DOX引起的H9c2细胞ROS、MDA水平的增加以及SOD水平的降低：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（34.18±1.56） μmol/g、（53.69±1.44） U/?mg;A组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.90±12.65）﹪、（72.65±2.66） μmol/g、（31.80±2.05） U/?mg;B组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.08±6.25）﹪、（44.59±1.92） μmol/g、（48.06±1.56） U/mg;C组的ROS、MDA和SOD水平分别是（91.86±1.66）﹪、（32.93±1.56）?μmol/?g、（55.93±1.58）?U/?mg （F?= 83.26,P < 0.001;F = 271.4,P < 0.001;F = 127.0,P < 0.001）。F组（6、12、24?h）H9c2细胞SIRT1蛋白表达水平分别是（0.45±0.03）、（0.27±0.02）、（0.25±0.03）,较Control组（1.00±0.00）降低（F = 611.1,P < 0.001）。本研究还发现,NaHS预处理H9c2细胞能阻止DOX引起的SIRT1蛋白表达下调：Control组、F组、G组、H组的SIRT1蛋白表达水平分别是（1.00±0.00）、（0.31±0.03）、（0.60±0.04）、（1.09±0.09）（F = 123.4,P?2S对DOX诱导的H9c2细胞活力降低的抑制作用：Control组,F组、G组、H组、I组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.37±3.62）﹪、（71.11±2.11）﹪、（97.53±1.45）﹪ （F = 238.2,P < 0.001）。Sirtinol预处理可明显逆转H₂S对DOX导致的H9c2细胞ROS和MDA含量增加及SOD水平降低的抑制作用：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（35.84±2.22）μmol/?g、（53.03±3.16） U/mg;F组的ROS、MDA和SOD水平分别是（184.6±11.33）﹪、（74.78±5.30）μmol/g、（29.26±0.85）U/mg;G组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.5±7.57）﹪、（41.95±3.43）μmol/g、（52.61±2.26）U/mg;H组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.7±5.50）﹪、（67.69±1.52） μmol/g、（35.33±1.95） U/mg,I组的ROS、MDA和SOD水平分别是（98.03±2.86）﹪、（37.66±2.49）μmol/g、51.14 U/mg（F = 112.0,P < 0.001;F = 93.73,P < 0.001;F = 84.92,P < 0.001）。 结论H₂S通过调控SIRT1抑制DOX诱导的H9c2细胞损伤。     

hUC-MSCs下调HIF-1α及VEGF表达对NAFLD大鼠肝脏损伤的作用

目的探讨脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）介导HIF-1α/VEGF通路对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝脏损伤的作用。 方法SD大鼠随机分为正常对照组（NC组）、模型对照组（MC组）和MC+hUC-MSCs组。每组鼠数为7只,分别喂食不同饲料和治疗8周。检测大鼠谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。光镜观察大鼠肝脏组织病理改变,计算NAFLD活动度积分（NAS）;Western Blot法检测大鼠肝脏组织HIF-?1α和VEGF蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析、相关分析选用pearson。 结果（1）治疗末,NC组ALT、AST和HOMA-IR分别为（41.1±5.9）U/L,（51.7±5.2）U/L,（1.93±0.22）?U/?L低于MC组（153.9±7.1）U/L,（169.8±15.9）U/L,（23.20±2.63）U/L差异具有统计学意义（P?< 0.05）;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠ALT、AST和HOMA-IR降低分别为（90.7±8.1）?U/?L,（110.0±13.1）U/L,（8.43±1.39）U/L差异具有统计学意义（P?< 0.05）。（2）光镜下NC组肝细胞形态正常;MC组肝细胞呈现脂肪变性,较多细胞核变形,肝小叶排列不齐伴炎症细胞浸润;以上肝组织病理改变在MC+hUC-MSCs组明显改善。与NC组比较,MC组大鼠NAS积分增高;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠NAS积分降低[（0.42 ±0.23）分vs （9.15±0.41）?分、（5.15±0.29）分]。（3）Western Blot法检测肝脏组织HIF-1α和VEGF蛋白表达改变：与NC组比较,MC组大鼠HIF-1α和VEGF蛋白表达均增高（P均< 0.05）;与MC组比较,MC+hUC-?MSCs组大鼠HIF-1α和VEGF蛋白表达均降低（P均< 0.05）。单因素相关分析显示大鼠肝脏组织HIF-?1α表达与HOMA-IR指数呈正相关（P均< 0.05）。而且,大鼠肝脏组织NAS评分与肝脏组织HIF-?1α、VEGF表达亦呈正相关（r值分别为0.901、0.874,P均< 0.05）。 结论?hUC-?MSCs对高糖高脂饲料喂养诱导的NAFLD大鼠受损肝脏功能具有改善作用,其机制与其下调HIF-?1α/?VEGF通路相关。     

白介素—2对心肌细胞[Ca^2＋]i的作用及其信号转导途径

为研究白介素－2（interleukin-2,IL-2）对心肌细胞内钙浓度（[Ca^2 ]i）的影响及其信号转导途径,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞,以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca^2 ]i的变化。结果发现：（1）IL－2（0.5-200U/ml）浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙态,IL－2（200U／ml）对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响;（2）纳洛酮(naloxone,Nal)(10^-8mol/L）和nor-binaltorphimine(nor-BNI,10^-8mol/L）可阻断IL－2对心肌细胞钙瞬态的作用,而纳曲吲哚（naltrindole,NTI）（10^-6mol/L）不能阻断此作用;（3）κ阿片受体激动剂U50488H（10^-6mol/L）降低心肌细胞钙瞬态,nor-BNI(10^-8mol/L）可阻断此作用;（4）5mg/L百日咳毒素（PTX）预处理可取消IL－2降低心肌细胞钙瞬态的作用,而酪氨酸激酶抑制剂genistein(10^-4mol/L）不能取消IL－2的作用;（5）U73122预处理可阻断IL－2的作用。研究结果表明,IL－2降低心肌细胞钙瞬态的作用,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的,其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C。     

ATG12对缺氧缺血性脑病小鼠神经细胞凋亡和自噬的影响

目的探讨自噬相关蛋白12 （ATG12）对缺氧缺血性脑病（HIE）小鼠细胞凋亡和自噬的影响及分子机制。 方法通过尾静脉注射腺相关病毒构建ATG12低表达小鼠模型,将40只小鼠分为假手术组、HIE模型组、对照病毒模型（NC-HIE）组和ATG低表达病毒模型（ATG12 shRNA-HIE）组,HIE模型组小鼠左侧颈动脉结扎后低氧（8﹪氧气+92﹪氮气）处理2.5?h,假手术组不予结扎和低氧处理。缺氧处理后,荧光定量PCR检测脑组织ATG12 mRNA表达水平。比色法检测各组小鼠大脑神经细胞SOD和MDA水平;通过Tunel法检测各组小鼠大脑神经细胞凋亡水平;通过Western Blot检测各组小鼠大脑神经细胞LC3A/B、ATG12和SQSTM1/?p62蛋白表达水平。采用t检验和单因素方差分析对实验数据进行统计分析。 结果与假手术组小鼠脑组织ATG12 mRNA水平（1.00±0.14）相比,HIE模型组小鼠脑组织ATG12 mRNA水平（5.23±0.37）显著升高（t?= 33.60,P?< 0.01）;与假手术组小鼠脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性[（103.60±4.84）?U/?mgprot]和丙二醛（MDA）含量[（42.40±3.17）?μmol/?mgprot]比较,HIE模型组小鼠脑组织SOD活性[（62.60±3.44）?U/?mgprot]显著降低,MDA含量[（83.80±4.39）?μmol/?mgprot]显著升高,与NC-HIE组小鼠脑组织SOD活性[（61.20±4.39）?U/mgprot]和MDA含量[（85.20± 2.70）?μmol/?mgprot]比较,ATG12 shRNA-?HIE组小鼠脑组织SOD活性[（93.80± 5.43）?U/?mgprot]显著升高,MDA含量[（49.20±3.49）?μmol/mgprot]显著降低,差异具有统计学意义（F?= 222.7,P?< 0.01;F?=?415.8,P?相似文献   

人脐带间充质干细胞对1型糖尿病鼠肝脏损伤的保护作用

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）对初发1型非肥胖型糖尿病（NOD）小鼠肝脏损伤的保护作用。 方法雌性NOD小鼠共33只,饲养9周后,将成模的21只小鼠随机分为糖尿病组和干细胞组,每组10只,其中干细胞（MSCs）组发病后第3天尾静脉注射hUCMSCs 1?次;另取10只未发病小鼠为正常对照组。各组小鼠每周检测随机血糖（GLU）水平,8周后处死小鼠,取肝脏,HE染色后观察肝脏结构改变,ELISA法检测糖基化终末产物（AGEs）水平,Real-time PCR法检测糖基化终末产物受体（RAGE）、NF-κB P65、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α） mRNA的表达水平。采用单因素方差分析和SNK-q检验进行统计学分析。 结果MSCs治疗8周后,MSCs组小鼠随机血糖（8.46±1.37）mmol/L比T1DM组（32.82±0.59）?mmol/L降低,差异具有统计学意义（P < 0.05）。同时T1DM组肝脏细胞形态异常,炎症细胞浸润,而MSCs组的较T1DM组明显改善。MSCs组小鼠肝脏组织的AGEs浓度（0.72±0.10）μg/ml低于T1DM组（1.35±0.22）μg/ml;同时MSCs组的NF-κB P65、IL-6、TNF-α、RAGE mRNA水平（分别为10.08±1.94、9.31±1.67、11.92±1.82、3.87±0.27）,均低于T1DM组（分别为15.46±3.09、18.04±1.69、22.12±3.23、5.12±0.26）,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论hUCMSCs可以降低糖尿病小鼠血糖水平,改善肝脏微观病理状态,降低AGEs浓度及某些炎性因子的水平以减轻肝脏损伤。     

基于NF-κB通路探讨IRAK3基因表达对脂多糖诱导的心肌细胞损伤的作用及机制

摘要 目的：探讨白介素1受体相关激酶3（IRAK3）基因表达对脂多糖（LPS）诱导的心肌细胞损伤的作用及机制。方法：分离培养SD乳鼠原代心肌细胞,随机分为对照组、LPS组、siIRAK3组和siIRAK3+LPS组。siIRAK3组和siIRAK3+LPS组心肌细胞转染IRAK3沉默核糖核酸（siRNA）,对照组和LPS组转染阴性对照siRNA。转染48 h后LPS组和siIRAK3+LPS组分别用LPS（10 μg/mL）处理心肌细胞6 h,对照组和siIRAK3组加入等量的PBS溶液。采用免疫蛋白印迹法（Western blot）检测LPS对心肌细胞IRAK3表达的影响,采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测四组心肌细胞增殖,采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测四组心肌细胞凋亡。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测四组心肌细胞上清液中炎症因子白介素（IL）-6、肿瘤坏因子（TNF）-α的水平。Western blot检测核转录因子-κB（NF-κB）蛋白和NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）的表达。结果：Western bolt结果显示,LPS使原代心肌细胞IRAK3的蛋白表达升高（P<0.05）,CCK-8和TUNEL结果显示,与对照组相比,LPS组心肌细胞活力降低,心肌细胞凋亡比例升高（P<0.05）;siIRAK3组细胞活力和细胞凋亡比例与对照组相比均无明显差异（P>0.05）。与LPS组相比,siIRAK3+LPS组心肌细胞活力升高,心肌细胞凋亡比例降低（P<0.05）。与对照组相比,LPS组心肌细胞分泌的IL-6、TNF-α升高,NF-κB蛋白表达升高而IκB-α蛋白表达降低（P<0.05）。与LPS组相比,siIRAK3+LPS组心肌细胞炎症因子分泌减少,NF-κB蛋白表达降低,IκB-α蛋白表达升高（P<0.05）。结论：干扰IRAK3基因表达通过负向调控NF-κB通路减轻LPS诱导的大鼠原代心肌细胞损伤。     

NF-κB p65在高糖诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用

建立高糖诱导胰岛素抵抗的细胞模型,研究高糖对3T3-L1脂肪细胞NF-κB p65表达及转位的影响。诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞与5.0mmol/L的葡萄糖含或不含0.6nmol/L的胰岛素(LGIns 组与LGIns-组)或者与25.0mmol/L葡萄糖含或不含0.6nmol/L的胰岛素(HGIns 组与HGIns-组)培养18h,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western印迹检测总NF-κBp65及核NF-κB p65的表达,用激光扫描共聚焦(CLSM)对NF-κB p65进行定位显示。结果显示,仅HGIns 组,即3T3-L1脂肪细胞与25.0mmol/L葡萄糖含0.6nmol/L的胰岛素培养18h后,胰岛素刺激的葡萄糖转运减少55%(P<0.01),同时Western印迹和CLSM均显示NF-κB p65核转位增加(P<0.01),但对3T3-L1脂肪细胞总NF-κB p65的表达无明显影响(P>0.05)。研究结果表明,只有在胰岛素(0.6nmol/L)存在的条件下,高糖(25.0mmol/L)才可以诱导胰岛素抵抗,其分子机制可能与其刺激NF-κB p65的核转位,调节相关基因的表达有关。     

骨髓间充质干细胞对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对肾移植受者T淋巴细胞分化和miRNA-155表达的影响。 方法选取2013年1月至2017年12月于福州总医院接受MSCs诱导+同种异体肾移植术的受者20例（MSCs组）,对照组为同期配对的异体肾移植受者20例。两组患者术后免疫抑制方案均为霉酚酸酯+他克莫司+强的松。两组患者分别于移植术前、术后第15天抽取静脉血,流式细胞仪检测外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值;ELISA检测白细胞介素2（IL-2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素10（IL-10）浓度;免疫磁珠分选外周血T淋巴细胞后,Rea1-time PCR法检测外周血T淋巴细胞中miRNA-?155的表达。两组间均数比较采用独立t检验,治疗前后均数比较采用配对t检验。 结果移植前两组肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值、IL-2、IL-?10、TNF-α、T淋巴细胞miRNA-155表达水平差异均无统计学意义（P均> 0.05）;术后第15天,与对照组相比,MSCs组外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞亚群比值（30.44﹪?± 4.23﹪? vs 26.06﹪?±4.77﹪,t = 2.365,P = 0.042）、IL-10水平（20.35?ng/?L?±?5.10?ng/?L? vs 16.63?ng/?L±6.26?ng/?L,t = 2.062,P?=?0.046）上升,而IL-2（27.47ng/?L±4.30 ng/?L vs 31.40?ng/?L±5.33 ng/L,t = 2.252,P = 0.015）、TNF-α（41.52?ng/?L±8.32?ng/L vs 46.67?ng/?L±6.71?ng/L,t = 2.157,P = 0.037）和T淋巴细胞miRNA-155表达水平（1.61±0.31 vs 1.89±0.15,t = 3.688,P?= 0.001）则降低。 结论MSCs能够升高肾移植受者外周血CD4⁺ CD25⁺ FoxP3⁺ Treg细胞/?CD4⁺细胞比值和IL-10水平,降低IL-2、TNF-α和T淋巴细胞miRNA-155表达水平,与MSCs的免疫耐受诱导有关。     

白介素-2对心肌细胞[Ca~(2 )]_i的作用及其信号转导途径

为研究白介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )对心肌细胞内钙浓度 ([Ca2 ]i)的影响及其信号转导途径 ,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞 ,以Fura 2 /AM为钙探针 ,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞 [Ca2 ]i 的变化。结果发现 :(1)IL 2 (0 5～ 2 0 0U/ml)浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙瞬态 ,IL 2 (2 0 0U/ml)对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响 ;(2 )纳洛酮 (naloxone ,Nal) (10 -8mol/L)和nor binaltorphimine (nor BNI,10 -8mol/L)可阻断IL 2对心肌细胞钙瞬态的作用 ,而纳曲吲哚 (naltrindole ,NTI) (10 -6mol/L)不能阻断此作用 ;(3)κ阿片受体激动剂U5 0 488H (10 -6mol/L)降低心肌细胞钙瞬态 ,nor BNI (10 -8mol/L)可阻断此作用 ;(4 ) 5mg/L百日咳毒素 (PTX)预处理可取消IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,而酪氨酸激酶抑制剂genistein (10 -4 mol/L)不能取消IL 2的作用 ;(5 )U7312 2预处理可阻断IL 2的作用。研究结果表明 ,IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C。     

H型高血压合并冠心病患者外周血中EMMPRIN、ADMA、Hcy、MMPs、Treg和Th17细胞水平检测

目的探讨H型高血压合并冠心病患者进行外周血各细胞因子水平检测的意义 方法选取陆军军医大学第一附属医院2015年5月至2018年2月收治的84例高血压合并冠心病患者作为观察组,其中H型高血压合并冠心病患者42例,归为H组,非H型高血压合并冠心病患者42例,归为非H组。随机选取同期我院收治的50例未合并高血压的冠心病患者为冠心病组,50例未合并冠心病的高血压患者为高血压组,45名健康成人为对照组。比较各组外周血EMMPRIN、MMPs、ADMA、Hcy、Treg、Th17细胞水平。采用方差分析和q检验进行统计学分析。 结果H组、非H组、冠心病组、高血压组患者外周血细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）、基质金属蛋白酶（MMPs）、不对称二甲基精氨酸（ADMA）、Hcy、Th17细胞含量均高于对照组,Treg细胞含量与Treg/Th17的比值低于对照组（P?< 0.05）。H组患者血浆ADMA[（11.01±2.67）μmol/L]、Hcy含量[（17.78±3.32）μmol/L]高于非H组[（7.34±1.34）μmol/L、（6.26±2.17）μmol/L]、冠心病组[（9.11±2.28）μmol/?L、（7.39±3.09）μmol/L]、高血压组[（8.89±1.89）μmol/L、（6.89±2.38）μmol/L],差异有统计学意义（F?= 13.360,8.961,P?< 0.05）。而H组、非H组、冠心病组、高血压组患者外周血单核细胞表面的EMMPRIN表达量、MMPs、Treg细胞、Th17细胞含量与Treg/Th17的比值比较,差异均无统计学意义（P?> 0.05）。 结论H?型高血压合并冠心病患者外周血中EMMPRIN、MMPs、ADMA、Hcy水平升高,Treg/?Th17比值降低,其中ADMA的升高与H型高血压有相关性。     

下调TLR4对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制

目的探讨TLR4对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及其机制。 方法将3条siRNA-TLR4-1、siRNA-TLR4-2和siRNA-TLR4-3转染至16HBE细胞中,筛选出最佳的siRNA-TLR4干扰序列进行实验。实验分为对照组（未处理）、LPS组（给予50 μg/ml LPS处理）、LPS+siNC组（转染siRNA-NC后给予50 μg/ml LPS处理）和LPS+siTLR4组（分别转染设计的3条siRNA-TLR4后给予50 μg/ml LPS处理）,采用RT-PCR检测TLR4、IL-6和TNF-α mRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κB p65和IκBα蛋白的表达。多组间比较使用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q,两组间比较采用独立样本t检验。 结果LPS组与LPS+siTLR4-2组TLR4 mRNA（2.05±0.12,3.28±0.15）和蛋白表达（0.38±0.03,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 11.091,11.585,P均< 0.001）;LPS组与LPS+siTLR4-3组TLR4 mRNA（1.39±0.09,3.28±0.15）和蛋白表达（0.31±0.02,0.77±0.05）比较,差异具有统计学意义（t?= 20.857,12.650,P均?< 0.001）且siRNA-TLR4-3的效果最为显著。与对照组相比,LPS组、LPS+siNC组和LPS+siTLR4组细胞中IL-6 mRNA（11.42±1.05,11.38±1.34,6.22±0.35,0.97±0.06,F?= 98.803,P均< 0.01）、TNF-α mRNA（15.76±1.12,15.69±0.87,7.54±0.41,1.03±0.09,F?= 278.064,P均< 0.01）、Cleaved Caspase-3蛋白（0.75±0.06,0.77±0.05,0.38±0.03,0.13±0.02,F?= 154.851,P均< 0.01）、Bax蛋白（0.48±0.05,0.52±0.05,0.33±0.02,0.11±0.02,F?= 71.310,P均< 0.01）、NF-κBp65蛋白（0.64±0.05,0.67±0.05,0.45±0.04,0.28±0.02,F?= 56.571,P?均?< 0.01）的表达水平和细胞凋亡率[（21.36±2.85）﹪,（20.94±3.22）﹪,（13.08±1.16）?﹪,（7.25±1.28）﹪,F?= 25.685,P均< 0.01]均明显升高,而细胞活力（0.53±0.04,0.51±0.04,0.78±0.06,1.15±0.08,F?= 80.811,P均< 0.01）和Bcl-2蛋白（0.28±0.03,0.25±0.03,0.40±0.03,0.69±0.06,F?= 76.762,P均< 0.01）、IκBα蛋白（0.38±0.03,0.35±0.03,0.44±0.03,0.72±0.06,F?= 53.635,P均< 0.01）的表达水平均明显降低;与LPS组相比,LPS+siTLR4组中IL-6 mRNA、TNF-α mRNA、Cleaved Caspase-3蛋白、Bax蛋白、NF-κBp65蛋白的表达水平和细胞凋亡率均明显降低,差异有统计学意义（t = 8.138,11.937,9.553,4.825,5.140,4.661,P均< 0.01）,而细胞活力和Bcl-2蛋白、IκBα蛋白的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（t = 6.005,4.899,3.674,P < 0.05）,而LPS组和LPS+siNC组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论下调TLR4可通过抑制NF-κB通路激活抑制LPS诱导的细胞凋亡和炎症反应减轻16HBE细胞损伤。     

口腔鳞状细胞癌患者外周血Naa10及淋巴细胞免疫分型的特点及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者外周血N-α-乙酰基转移酶10 （Naa10）及淋巴细胞免疫分型的特点,并分析其临床意义。 方法选取97例OSCC患者及50名健康体检者,分别纳入患者组、对照组。检测两组受试者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型,并比较不同TNM分期、不同淋巴结转移状态患者外周血Naa10、淋巴细胞免疫分型的差异,总结其特点与临床意义。不同性别人数采用χ²检验,计量资料行正态性检验,满足正态性且组间方差相等则采用t检验,不满足正态性则采用非参数Wilcoxon秩和检验,相关性分析采用Pearson法。 结果患者组血清Naa10为（62.91±17.15）pg/ml,高于对照组的（38.82±9.04）pg/ml,差异有统计学意义（t?= 9.280,P?< 0.05）。患者组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比分别为（71.63±9.11）﹪、（34.34±4.26）﹪、（1.03±0.28）、（14.23±4.61）﹪,低于对照组的（76.25±2.87）﹪、（45.41±7.08）﹪、（1.77± 0.39）、（19.96±5.13）﹪,CD8⁺、B淋巴细胞百分比分别为（14.23±4.61）﹪、（14.91±3.29）﹪,高于后者的（19.96±5.13）﹪、（9.11±2.60）﹪,差异有统计学意义（P?< 0.05）。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者42例,其血清Naa10为（64.08±15.26）?pg/?ml,与Ⅲ~Ⅳ期患者的（61.71±13.15）pg/ml比较,差异无统计学意义（t?= 0.820,P?> 0.05）。淋巴结转移者34例,其血清Naa10为（65.15±14.07）pg/ml,与无淋巴结转移者的（61.45±12.66）?pg/?ml比较,差异无统计学意义（t?= 1.321,P?> 0.05）。Ⅰ~Ⅱ期患者CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、NK细胞百分比低于Ⅲ~Ⅳ期患者,其CD8⁺、B淋巴细胞百分比高于后者,差异有统计学意义（P?< 0.05）。Pearson相关性分析示,外周血Naa10与CD3⁺ （-0.631）、CD4⁺ （-0.529）、CD4⁺/CD8⁺ （-0.587）、NK细胞百分比（-0.603）呈负相关,与CD8⁺ （0.558）、B淋巴细胞百分比（0.670）呈正相关（P?< 0.05）。 结论OSCC患者外周血Naa10明显升高但与TNM分期、淋巴结转移无关;其淋巴细胞免疫分型存在明显改变,且TNM分期的上升、淋巴结转移的发生伴随着CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/?CD8⁺、NK细胞百分比的下降,以及CD8⁺、B淋巴细胞百分比的上升。     

艾拉莫德增强丝裂霉素C诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡

目的探讨艾拉莫德增强丝裂霉素C（MMC）诱导的人食管癌Eca109细胞凋亡的作用及其机制。 方法将人食管癌Eca109细胞分为五组：对照组、MMC组、25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德+MMC组;通过CCK-8和DCFH-DA染色法分别检测25,50,100 μg/ml浓度艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞活力和细胞活性氧（ROS）生成的影响,流式细胞术检测艾拉莫德联合MMC对人食管癌Eca109细胞凋亡的影响,并通过Western Blot检测艾拉莫德联合MMC对TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达的影响。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK-8结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.85±0.03）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组A450值（0.73±0.02,0.52±0.02,0.33±0.02）均降低,差异具有统计学意义（F = 127.60, P < 0.01）;DCFH-DA染色检测结果显示,与0 μg/ml T-614+MMC组DCFH荧光值（130.00±10.00）比较,25、50、100 μg/ml T-614+MMC组DCFH值（219.67±9.50,280.33±10.50,338.33±16.07）均升高,差异具有统计学意义（F = 170.20,P < 0.01）;流式细胞术检测结果显示,与对照组的细胞凋亡率（5.33±0.35）﹪比较,T-614和MMC组的凋亡率（20.30±2.00）﹪,（25.60±3.00）﹪均升高。与MMC组细胞凋亡率（25.60±3.00）﹪比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的细胞凋亡率（56.20±3.00）﹪升高,差异均具有统计学意义（F = 247.50,P < 0.01）;Western Blot结果显示,与MMC组细胞TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（0.87±0.06,0.25±0.03）比较,艾拉莫德与MMC联用组（T-614+MMC）食管癌Eca109细胞的TNF-α和cleaved caspase3蛋白表达（1.28±0.08,0.59±0.03）升高,差异均具有统计学意义（F = 96.90,P < 0.01）。 结论艾拉莫德能够增强MMC对食管癌Eca109细胞活力的抑制作用,其机制可能通过促进ROS的生成,激活线粒体凋亡通路,最终导致食管癌Eca109细胞凋亡。     

舒林酸调节IKK通路对3T3-L1细胞IRS-1酪氨酸磷酸化的影响

目的探讨舒林酸通过调节IKK通路对分化成熟3T3-L1细胞胰岛素受体后信号转导蛋白胰岛素受体底物1（IRS-1）蛋白酪氨酸/丝氨酸（Tyr/Ser）残基磷酸化表达的影响。 方法用地塞米松、IBMX和胰岛素三联培养诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色观察脂肪细胞形态。诱导分化成熟的脂肪细胞如下分组干预,实时荧光定量PCR检测不同浓度炎症因子IL-1 β（0,1,10,100 ng/ml）和（或）不同浓度IKK特异阻断剂舒林酸（0,0.1,1,10 mmol/L）对诱导分化成熟的脂肪细胞IKK通路激活状态的影响。Western Blot检测IL-1β和（或）舒林酸对诱导分化成熟的脂肪细胞IRS-1酪氨酸/丝氨酸残基磷酸化状态的影响。采用单因素方差分析进行统计学分析。 结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,IL-1β 10 ng/ml组诱导成熟脂肪细胞IKKβ mRNA较对照组相对表达水平增加,分别为[（2.85±0.16）﹪,（1.00±0.12）﹪,P < 0.01];而IRS-1酪氨酸的磷酸化相对表达量较对照组下降,分别为[（0.72±0.26）﹪,（1.00±0.24）﹪,P < 0.01]。进一步予舒林酸（1?mmol/?L、10?mmol/L）干预后较对照组显著逆转IL-1β诱导脂肪细胞IRS-1酪氨酸磷酸化的表达水平,分别为[（1.72±0.16）﹪,（1.90±0.08）﹪,（1.00±0.13）﹪,P < 0.01],同时下调IRS-1丝氨酸磷酸化的表达水平[（0.79±0.16）﹪,（0.66±0.08）﹪,（1.00±0.10）﹪,P < 0.05]。 结?论IL-1β通过促进诱导分化成熟脂肪细胞IKKβ的表达,激活脂肪细胞IKK炎症通路,抑制脂肪细胞IRS-1酪氨酸残基磷酸化的表达,舒林酸通过调节脂肪细胞IRS-1酪氨酸/丝氨酸残基磷酸化的表达,改善脂肪细胞胰岛素受体后信号转导。     

替米沙坦调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A通路减轻缺氧诱导的神经细胞PC12损伤

目的探讨替米沙坦（TM）调控miR-495-3p/心肌细胞增强因子2A （MEF2A）通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响和机制。 方法将PC12细胞进行正常培养（对照）,缺氧（缺氧24 h）,缺氧+ 0.1、1、10 μg/mL TM、缺氧+ miR-NC （转染miR-NC）,缺氧+miR-495-3p （转染miR-495-3p模拟物）,缺氧+TM+anti-miR-NC （转染anti-miR-NC,10 μg/mL TM）和缺氧+ TM+anti-miR-495-3p （转染anti-miR-495-3p,10 μg/mL TM）处理。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）和Western blot检测miR-495-3p、心肌细胞增强因子2A （MEF2A）表达水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,缺氧处理的PC12细胞LDH漏出率[（9.46±0.97）﹪比（45.69±4.31）﹪]、细胞凋亡率[（5.36±0.54）﹪比（28.36±2.41）﹪]、MEF2A mRNA（1.00±0.08比2.74±0.26）和MEF2A蛋白表达水平（0.39±0.03比0.87±0.06）均升高;SOD活性[（12.24 ±1.13）比（5.13±0.52 ）U/mL）]和miR-495-3p表达水平（1.00±0.08比0.35±0.03）均降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧处理比较,缺氧+0.1、1、10 μg/mL TM干预的PC12细胞LDH漏出率[（45.69±4.31）﹪比（32.14±3.84）﹪、（23.54±3.17）﹪、（16.87±1.46）﹪]、细胞凋亡率[（28.36±2.41）﹪比（22.46±2.31）﹪、（17.14±1.65）﹪、（10.23±1.12）﹪]、MEF2A mRNA（2.74±0.26比2.26±0.23、1.87±0.19、1.34±0.18）和MEF2A蛋白表达水平（0.87±0.06比0.75±0.05、0.63±0.04、0.46±0.03）均降低;SOD活性[（5.13±0.52）比（6.87±0.69 ）、（8.01±0.81）、（10.12±1.02）U/mL]、miR-495-3p表达水平（0.35±0.03比0.49±0.04、0.61±0.06、0.83±0.07）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+ miR-NC比较,缺氧+ miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（46.87±4.28）﹪比（19.65±1.87）﹪]和细胞凋亡率[（28.38±2.44）﹪比（12.36±1.25）﹪]均降低,SOD活性[（5.15±0.51）比（9.67±0.97）U/mL]升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。与缺氧+TM+anti-miR-NC比较,缺氧+TM+anti-miR-495-3p的PC12细胞LDH漏出率[（17.64±1.79）﹪比（32.69±3.57）﹪]和细胞凋亡率[（10.98±1.75）﹪比（22.64±2.13）﹪]均升高,SOD活性[（12.63±1.27）比（7.32±0.71）U/mL]降低,差异有统计学意义（P均< 0.05）。 结论TM通过上调miR-495-3p/MEF2A通路对缺氧诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。