组蛋白去乙酰化酶3对外周CD4+ T细胞分化的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）对外周CD4⁺ T细胞分化及功能的调控作用。方法 采用CD4cre酶介导Hdac3杂合基因缺失小鼠（Hdac3^fl/flCD4^cre+/-）及其野生型正常对照小鼠（Hdac3^fl/fl，WT），流式细胞术检测HDAC3缺失对外周CD4⁺和CD8⁺ T细胞比例和数量的影响；在体外佛波酯（PMA）和离子霉素（Ionomycin）刺激条件下，流式细胞术检测HDAC3缺失对CD4⁺ T细胞中IFN-γ、IL-4和IL-17A的表达以及Tfh细胞产生的影响；采用ELISA检测HDAC3缺失对小鼠血清IFN-γ、IL-4和IL-17表达的影响；分选Hdac3^fl/flCD4^cre+/-和WT小鼠外周初始CD4⁺ T细胞，分别在Th1和Th2分化条件下培养，细胞内染色检测HDAC3缺失对Th1、Th2以及Th17相关细胞因子及其特异转录因子表达的影响；采用Microarray检测HDAC3缺失对CD4⁺ T细胞分化亚群相关基因表达的影响；采用链脲佐菌素（STZ）处理小鼠构建I型糖尿病（TIDM）疾病模型，检测HDAC3缺失对T1DM发病的影响。结果 与WT小鼠相比，Hdac3^fl/flCD4^cre+/-小鼠外周CD4⁺和CD8⁺ T细胞的比例和数量显著降低。Hdac3^fl/flCD4^cre+/-小鼠CD4⁺ T细胞及血清中IFN-γ的表达显著降低，而IL-4和IL-17A的表达显著增加，Tfh细胞比例也显著增加；HDAC3缺失抑制体外培养CD4⁺ T细胞向Th1分化但促进其向Th2分化；Microarray检测发现HDAC3缺失导致Th1型细胞谱系基因表达降低，而Th2、Th17以及Tfh细胞谱系基因表达增加；在STZ诱导条件下，HDAC3缺失抑制小鼠T1DM的发生和CD4⁺ T细胞向Th1分化。结论 HDAC3促进外周CD4⁺ T细胞向Th1细胞分化并加重T1DM的发生。     

川西平原小流域不同水体N2O排放特征及驱动因素

氧化亚氮（N₂O）是一种潜在的、强大的温室气体,应该根据京都议定书规定开展监测和削减。河流、水库、鱼塘和沟渠等受人类影响的小流域水生生态系统是氮素生物地球化学循环的活跃区域,更是N₂O重要的源和汇。然而,同一流域不同水体N₂O的排放特征差异及其驱动因素尚不清楚。因此,选择川西平原西河流域作为研究区,于2016年6月到2017年5月连续监测不同水体水气界面的N₂O排放强度,并结合聚类分析解析N₂O排放特征的驱动因素。结果显示,不同水体的N₂O年排放通量差异显著,沟渠的N₂O年排放通量最高（（52.68±36.09）μg m^-2 h^-1）,城市段河流和鱼塘次之（（34.16±23.97）μg m^-2 h^-1和（29.03±31.41）μg m^-2 h^-1）,乡镇段和农区段河流再次（（8.32±28.60）μg m^-2 h^-1和（8.52±9.43）μg m^-2 h^-1）,水库最低（（-16.45±29.76）μg m^-2 h^-1）。除水库表现为N₂O的汇,其他水体均表现为N₂O的排放源。另外,不同水体N₂O排放的季节特征差异显著,农区段河流和农业沟渠表现为夏天最高,冬春最低（P<0.05）,而其他水体均表现为冬春显著高于夏秋（P<0.05）。根据N₂O排放季节特征及其驱动因素可将西河流域水体分为四类：第一类农业类水体的N₂O排放季节特征受气象因素和农业活动的联合驱动;第二类城乡类河流和第三类鱼塘分别受控于人类活动和养殖活动,与降雨温度等气象指标关系较弱;第四类水库主要受控于气象因素。并且,第一类农业类水体已成为大气N₂O排放的重要源,农业氮素管控是区域控制N₂O排放的重点。     

消疬膏对脾胃虚弱证颈部淋巴结核患者CD4+CD25highFoxP3+调节性T淋巴细胞和胃肠激素的影响

摘要 目的：研究消疬膏对脾胃虚弱证颈部淋巴结核患者CD4⁺CD25^highFoxP3⁺调节性T淋巴细胞和胃肠激素的影响。方法：选择南京市中西医结合医院于2020年3月~2022年1月期间收治的颈部淋巴结核患者120例。按照随机数字表法分为对照组（60例）和研究组（60例）。对照组接受常规抗结核方案，研究组接受消疬膏联合常规抗结核方案，两组疗程均为6个月。观察两组治疗前和治疗6个月后的中医证候积分、CD4⁺CD25^highFoxP3⁺调节性T淋巴细胞相关指标和胃肠激素的变化，记录两组治疗期间用药安全性。结果：两组治疗6个月后肿疡大小、肿疡皮色、面色、纳呆、倦怠乏力、便溏、舌质、脉象评分均下降，且研究组低于对照组（P<0.05）。研究组治疗6个月后CD4⁺CD25^highFoxP3⁺调节性T淋巴细胞、白介素-10（IL-10）水平低于对照组，γ-干扰素（IFN-γ）水平高于对照组（P<0.05）。研究组治疗6个月后胆囊收缩素（CCK）、胃泌素（GAS）水平低于对照组，胃动素（MTL）水平高于对照组（P<0.05）。研究组的不良反应总发生率低于对照组（P<0.05）。结论：消疬膏治疗脾胃虚弱证颈部淋巴结核患者，可有效改善患者临床症状，可能与调节CD4⁺CD25^highFoxP3⁺调节性T淋巴细胞和胃肠激素水平有关。     

四川地区猪源艰难梭菌分子分型调查

[背景] 艰难梭菌是一种重要的人畜共患肠道病原菌,可引起人和多种动物抗生素相关性腹泻或假膜性肠炎。四川作为我国主要的生猪产区,还未有猪源艰难梭菌流行病学调查的相关报道,对猪源艰难梭菌的防控及保障猪肉安全带来挑战。[目的] 调查四川地区猪源艰难梭菌的感染、流行情况,并对分离出的艰难梭菌进行分子分型研究。[方法] 收集来自四川生猪主要产区6个养殖场中猪的粪便标本（n=110）,采用厌氧培养技术在艰难梭菌鉴别培养基上进行分离培养;采用PCR方法扩增艰难梭菌4个毒素基因（tcdA、tcdB、cdtA、cdtB）和7个管家基因（adk、atpA、dxr、glyA、recA、sodA、tpi）,对分离株进行毒素基因分型和多位点序列分型。[结果] 从110份样品中,经革兰氏染色镜检及PCR鉴定,共分离出20株艰难梭菌,分离率高达18.18%;毒素基因分型结果显示共获得3种毒素基因型,包括tcdA⁺tcdB⁺cdtA/cdtB⁺（n=3）、tcdA⁺tcdB⁺cdtA/cdtB^—（n=6）、tcdA^—tcdB^—cdtA/cdtB^—（n=11）;多位点序列分型结果显示获得5个ST型,包括ST11（n=3）、ST3（n=1）、ST35（n=2）、ST36（n=4）、ST109（n=10）;进化树结果显示,所有分离株聚集为2个大群,分别为3个分支和17个分支。[结论] 四川主要生猪产区猪群存在艰难梭菌感染,分离株的分子分型呈多样性,主要流行型为ST11、ST3、ST35、ST36、ST109型,并且存在ST11型高毒力菌株流行的风险。     

视频脑电图联合PEWS评分、NSE、CD4+/CD8+比值对病毒性脑炎患儿病情评估及预后预测的临床价值

摘要 目的：探讨视频脑电图（VEEG）联合儿童早期预警评分（PEWS）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、CD4⁺/CD8⁺比值对病毒性脑炎患儿病情评估及预后预测的价值。方法：选择2020年3月至2022年3月南京医科大学附属儿童医院收治的152例病毒性脑炎患儿，根据病情严重程度将患儿分为重症组（67例）和轻症组（85例），另选择72例无神经系统损伤住院患儿为对照组。治疗2周后，根据儿童格拉斯哥预后量表（CGOS）将其分为预后良好组（4~5级，89例）与预后不良组（1~3级，63例）。所有研究对象均接受PEWS测评和VEEG检查，检测血清NSE水平，计算CD4⁺/CD8⁺比值。采用单因素和多因素Logistic回归分析影响病毒性脑炎患儿预后的因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析PEWS、VEEG 及血清NSE、CD4⁺/CD8⁺比值预测病毒性脑炎患儿预后的价值。结果：重症组PEWS、VEEG重度异常比例及血清NSE水平高于轻症组和对照组，CD4⁺/CD8⁺比值低于轻症组和对照组（P＜0.05）；轻症组PEWS、VEEG重度异常比例及血清NSE水平高于对照组，CD4⁺/CD8⁺比值低于对照组（P＜0.05）。预后不良组PEWS、VEEG重度异常比例、血清NSE水平高于预后良好组，CD4⁺/CD8⁺比值低于预后良好组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，持续惊厥、高PEWS、VEEG重度异常、血清NSE水平升高是病毒性脑炎患儿预后不良的危险因素，CD4⁺/CD8⁺比值升高是保护因素（P＜0.05）。联合PEWS、VEEG 及血清NSE、CD4⁺/CD8⁺比值预测病毒性脑炎患儿预后曲线下面积为0.859，高于各指标单独预测。结论：病毒性脑炎患儿高PEWS、VEEG重度异常、血清NSE水平升高、CD4⁺/CD8⁺比值降低，与病情加重和预后不良有关，联合以上四项指标辅助预测病毒性脑炎患儿预后的价值较高。     

不同CO2浓度升高和氮肥水平对水稻叶绿素荧光特性的影响

为研究不同CO₂浓度升高和氮肥水平对水稻叶绿素荧光特性的影响,利用由开顶式气室（OTC）组成的CO₂浓度自动调控平台开展田间试验。以粳稻9108为试验材料,CO₂浓度设置CK（对照,环境大气CO₂浓度）、C₁（CO₂浓度比CK增加160 μmol/mol）和C₂（CO₂浓度比CK增加200 μmol/mol）3个水平;氮肥设置低氮（N₁：10 g/m²）、中氮（N₂：20 g/m²）和高氮（N₃：30 g/m²）3个水平。结果表明,在低氮条件下,与CK相比,C₁处理使拔节期的F_o上升4.8%（P=0.031）;C₂处理使拔节期的F_o上升6.3%（P=0.015）,F_v/F_m下降4.8%（P=0.003）,使孕穗期的F_o上升12.7%（P=0.039）,F_v/F_o下降18.2%（P=0.039）。在高氮条件下,与CK相比,C₂处理使灌浆期的F_m、F_v和F_v/F_m分别下降3.6%（P=0.039）、4.9%（P=0.013）和1.3%（P=0.039）。在中氮条件下,与CK相比,C₁和C₂处理的影响不明显。在整个生育期内,CO₂浓度升高与施氮处理交互作用对水稻叶绿素荧光特性的影响未到达显著水平。研究表明,大气CO₂浓度升高使水稻叶片光系统Ⅱ受损,抑制其电子传递能力、电子受体Q_A氧化还原情况、最大光化学效率和潜在活性,通过适量施氮可以有效地缓解其负面效应。     

水沙条件及氮输入对黄河口滨岸潮滩湿地碱蓬和土壤15N吸收特征的影响

受自然及人为活动的影响,黄河三角洲水沙条件存在较大变化,由此带来的外源营养物质增加对潮滩湿地植被生长及元素吸收利用具有重要的影响。为此采用3因素4水平的正交试验,以黄河口滨岸潮滩湿地先锋物种碱蓬（Suaeda salsa）为研究对象,利用¹⁵N示踪技术,研究了水沙条件及氮输入对碱蓬和土壤¹⁵N吸收特征的影响。结果表明：淹水深度、泥沙沉积及氮输入对土壤全氮含量的影响不显著,但外源氮输入对土壤¹⁵N固持量（N_dff）和比例（N_dff%）的影响达到显著水平,且最大值（10.44 mg/kg和3.83%）均出现在W₄S₂N₃（30 cm淹水+3 cm泥沙沉积+6 g/m²氮输入）处理;碱蓬叶和茎中全氮含量、¹⁵N吸收量（N_dff）及比例（N_dff%）在深淹水和泥沙沉积处理时较大,而根中全氮含量、N_dff及N_dff%在高氮输入较大。且根N_dff和N_dff%最大值（1.10 mg/kg和18.21%）在W₁S₄N₄（2 cm淹水+12 cm泥沙沉积+9 g/m²氮输入）处理时取得,此时碱蓬的生长情况最好,表明适当的淹水和泥沙埋深以及高氮输入（9 g/m²）有利于根系对外源氮的吸收,从而促进植株的生长。由此可见,在黄河三角洲水沙变化大的背景下,淹水、泥沙沉积和外源氮输入的适当把控,可促进碱蓬对外源氮的吸收利用而有助于其生长,从而对维护黄河三角洲潮滩湿地的健康具有重要作用。     

城市化地区典型水体的N2O排放通量特征——以南京市为例

内陆淡水水体是大气中N₂O的重要排放源,然而目前对于内陆典型城市水体N₂O排放通量的监测数据依然匮乏,典型城市水体的N₂O排放特征及驱动因素尚不清楚。本研究选取了南京市江北新区的典型水体,包括湖库、河流、养殖池塘和景观池塘,在2020年5月-2021年4月利用漂浮箱法连续监测了不同水体类型的水-气界面N₂O排放特征,并通过测定水环境特征,探究驱动水体N₂O排放通量的关键因素。研究结果表明,典型城市水体整体均表现为N₂O排放源,河流和养殖池塘的日平均排放通量最大,分别为（503±1236）μg m^-2 d^-1和（508±797）μg m^-2 d^-1,其次为景观池塘（（179±989）μg m^-2 d^-1）,而湖库的N₂O排放通量最小,仅表现为微弱的N₂O排放源（（54±212）μg m^-2 d^-1）。水体的N₂O排放呈现季节性差异,河流和养殖池塘夏季的N₂O排放通量显著高于其他季节（P<0.01）。水体全年N₂O排放数据与水体温度和溶解氧含量（DO）呈显著相关。而在温度较高的5月份-9月份（>20℃）,氮输入成为影响N₂O排放通量的关键因素（P<0.01）,因此控制城市水体的氮输入尤其是在水温较高的夏季是减少N₂O排放的有利措施。此外,由于水文化学条件差异等因素,小型封闭水体包括养殖池塘和景观池塘的N₂O排放通量差异较大,未来应加强监测不同水体的水文化学特征和N₂O的时空排放特征,探讨影响小型封闭水体水-气界面N₂O排放通量的具体驱动因素。此研究为城市区域N₂O排放的精准核算提供了数据支撑,为N₂O排放模型的修正提供了科学依据。     

孕14-19+6周正常胎儿胼周动脉的超声评估

摘要 目的：探讨应用超声SlowflowHD（超低速血流成像）联合RadiantFlow（二维立体血流成像）技术评估孕14-19⁺⁶周正常胎儿胼周动脉的可行性，观察胎儿胼周动脉及分支走行，测量其长度和高度，并探讨二者与孕周及双顶径的关系。方法：纳入2022年5月-2023年3月来南京医科大学附属苏州医院进行常规超声检查的150例孕14-19⁺⁶周孕妇，在胎儿正中矢状切面上获取胎儿胼周动脉及分支的图像，测量其长度和高度，测量重复3次，取平均值，并观察胎儿胼周动脉及分支走行。所有孕妇均随访至中孕晚期（20-28周）或晚孕期行产前超声检查未见胼胝体异常及其他颅内结构异常。采用pearson相关分析和回归分析判断胎儿胼周动脉长度及高度与孕周及双顶径的关系。结果：胎儿胼周动脉长度及高度随着孕周及双顶径的增加而增加（P＜0.05）。胎儿胼周动脉长度与孕周、双顶径之间呈线性正相关，且胎儿胼周动高度与孕周、双顶径之间呈线性正相关（P＜0.05）。在孕14-19⁺⁶周中所有111病例均类"C"形走行，额前内侧动脉、额中内侧动脉、额后内侧动脉三者几乎与胎儿胼周动脉垂直，类"鸡冠"，三者显示率100%；旁中央动脉在孕14-15⁺⁶周、16-17⁺⁶周、18-19⁺⁶周显示率分别约53.1%（17/32）、88.2%（45/51）、92.8%（26/28）；楔前动脉在孕14-15⁺⁶周、16-17⁺⁶周、18-19⁺⁶周显示率分别约3.1%（1/32）、35.2%（18/51）、78.5%（22/28）。结论：应用超声SlowflowHD（超低速血流成像）联合RadiantFlow（二维立体血流成像）技术显示孕14-19⁺⁶周正常胎儿胼周动脉及分支具有可行性，胎儿胼周动脉长度和高度与孕周及双顶径呈一定的线性相关。     

2型糖尿病并发肺结核患者PCT、HMGB1、CD4+/CD8+比值与继发肺部感染的关系

摘要 目的：探讨2型糖尿病并发肺结核患者降钙素原（PCT）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）、CD4⁺/CD8⁺比值与继发肺部感染的关系。方法：选择2019年1月至2022年6月四川大学华西医院呼吸与危重症医学科收治的97例2型糖尿病并发肺结核患者,根据入院治疗时是否继发肺部感染分为肺部感染组（53例）及非肺部感染组（44例）。检测两组血清PCT、HMGB1水平以及外周血CD4⁺/CD8⁺比值。单因素和多因素Logistic回归分析2型糖尿病并发肺结核患者继发肺部感染的因素。受试者工作特征（ROC）曲线分析PCT、HMGB1和CD4⁺/CD8⁺比值预测2型糖尿病并发肺结核患者继发肺部感染的价值。结果：肺部感染组血清PCT、HMGB1水平高于非肺部感染组（P＜0.05）,外周血CD4⁺/CD8⁺比值低于非肺部感染组（P＜0.05）。糖化血红蛋白及血清PCT、HMGB1水平升高是2型糖尿病并发肺结核患者继发肺部感染的危险因素（P＜0.05）,高CD4⁺/CD8⁺比值是保护因素（P＜0.05）。PCT、HMGB1、CD4⁺/CD8⁺比值预测2型糖尿病并发肺结核患者继发肺部感染的曲线下面积为0.719、0.761、0.738,联合PCT、HMGB1和CD4⁺/CD8⁺比值预测的曲线下面积为0.878,高于各指标单独预测。结论：2型糖尿病并发肺结核患者血清PCT、HMGB1水平增高,外周血CD4⁺/CD8⁺比值降低,均与继发肺部感染有关,PCT、HMGB1联合CD4⁺/CD8⁺比值可辅助预测2型糖尿病并发肺结核患者继发肺部感染的风险。     

Probing N6-methyladenosine RNA modification status at single nucleotide resolution in mRNA and long noncoding RNA

N⁶-methyladenosine (m⁶A) is the most abundant modification in mammalian mRNA and long noncoding RNA (lncRNA). Recent discoveries of two m⁶A demethylases and cell-type and cell-state-dependent m⁶A patterns indicate that m⁶A modifications are highly dynamic and likely play important biological roles for RNA akin to DNA methylation or histone modification. Proposed functions for m⁶A modification include mRNA splicing, export, stability, and immune tolerance; but m⁶A studies have been hindered by the lack of methods for its identification at single nucleotide resolution. Here, we develop a method that accurately determines m⁶A status at any site in mRNA/lncRNA, termed site-specific cleavage and radioactive-labeling followed by ligation-assisted extraction and thin-layer chromatography (SCARLET). The method determines the precise location of the m⁶A residue and its modification fraction, which are crucial parameters in probing the cellular dynamics of m⁶A modification. We applied the method to determine the m⁶A status at several sites in two human lncRNAs and three human mRNAs and found that m⁶A fraction varies between 6% and 80% among these sites. We also found that many m⁶A candidate sites in these RNAs are however not modified. The precise determination of m⁶A status in a long noncoding RNA also enables the identification of an m⁶A-containing RNA structural motif.