辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅰ.肝组织内乙型肝炎表面抗原的光学显微镜定位方法

本文报告在光学显微镜下采用辣根过氧化物酶标记抗体(间接法)对肝组织内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的一种定位方法。此法专一性强,重复性好。     

溶酶体膜H^＋—ATP酶的细胞化学观察

本实验在以p-NPP为底物、氯化铈为捕捉剂、Tricine-KOH为缓冲液的中性最适环境中温育大鼠肝组织,进行肝细胞、血窦内皮细胞和枯否氏细胞内溶酶体膜上H~+-ATP酶定位的细胞化学研究。温育反应形成的磷酸铈反应产物电子密度高、颗粒细、分布均匀、非特异性反应产物少、重复性好。对照实验证实,溶酶体膜上的H~+-ATP酶是对哇巴因耐受的,对NEM敏感的囊泡膜H~+-ATP酶。     

大鼠3′-甲基-4,4′-二甲基氨基偶氮苯(3′-MeDAB)诱癌过程甲胎蛋白的动态变化和免疫酶标记定位观察

本工作采用放射火箭电泳自显术和免疫酶标记定位技术,对大鼠3'-MeDAB诱癌过程血清和肝组织甲胎蛋白(AFP)的动态变化和定位情况进行了观察。发现(1)肝硬化假小叶内的少数肝细胞、嗜碱性间变再生结节细胞、少数“幸存肝细胞”及少数“过渡性细胞”,具有合成AFP的能力。未见肝内其他类型细胞合成AFP。合成AFP的细胞大多具有胞浆嗜碱性、生长活跃和形态上去分化的特点。(2)未见胆管癌细胞合成AFP。肝细胞癌分化好的癌细胞绝大多数也未见合成AFP,分化差的癌细胞合成AFP的能力,基本上与其生长活跃程度呈正相关,与分化程度呈负相关,而与癌细胞是否处于核分裂阶段关系不大。(3)肝癌组织AFP酶标的强度和范围与血清AFP水平之间基本上有平行关系。此外,本文还就什么细胞合成AFP、血清AFP“马鞍型”变化的成因及病理组织学基础等进行了讨论,并根据实验结果,对大鼠3'-MeDAB肝癌的组织发生提出了初步的设想。     

兔肾皮质-D氨基酸氧化酶和α-羟酸氧化酶的铈法定位及能谱分析

用铈作捕捉剂,在光镜和电镜下进行兔肾皮质的D-氨基酸氧化酶和α-羟酸氧化酶活性定位。光镜下用Ce-DAB法可显示这两种氧化酶的定位;电镜下,这两种酶主要定位在肾近端小管微绒毛和过氧物酶体上,用能谱仪对这些酶反应产物进行X射线微区元素分析显示铈峰,表明酶的铈法反应具特异性。     

玉米素核苷的酶标免疫测定法

牛血清白蛋白-玉米素核苷(BSA-ZR)的兔抗血清对玉米素核苷具有很高的亲和性,而且专一性强,除了玉米素外,对其它一些细胞分裂素如激动素(KT)的交叉反应甚微。用辣根过氧化物酶(HRP)作为标记物的酶标免疫法,由于它的灵敏度高,相当于几十毫克量的样品就可以测出细胞分裂素的含量。测定范围在0.25—50pmol之间,测定范围较广。由于该方法专一性高,植物组织的粗提取物可以直接用于测定。避免了提取分离的繁琐程序,使得测定方法较简便、快速,可成批进行,适用于一般实验室。用该方法测得风信子(Hyacinthus orientalis L.)各部分的细胞分裂含量(以玉米素核苷计)在10—60×10~(-9)克/克鲜重,即10—60ng/g F.W.。     

海洋寡糖工程药物——壳寡糖制备分离新工艺及其抗癌活性研究

以海洋甲壳多糖为原料,研究了酶法解制备壳寡糖的方法,通过对专一性和非专一性除解用酶的筛选,确定以壳聚糖酶或6036要降为降解酶;考察了底物浓度、酶量、温度、pH、溶解介质等因素对降解反应的影响;提出了反应与分离相耦合制备壳寡糖的新构思,在此基础上进行了扩大试验,确认了过程实现工业化生产的可行性,对所生产壳寡糖的抑瘤活性研究证明一定铁壳寡糖具有很好的生物活性,具有抗肿瘤药物前景。     

化学合成的DNA定位断裂工具

化学合成的 DNA 定位断裂工具是80年代初发展起来的一种新型非酶 DNA 定位断裂工具.它由 DNA 识别结合系统及化学断裂系统组成,能在人们预先设计的任何位点断裂 DNA 分子,具有制备简便、价格便宜、不受酶的天然专一性限制等优点.可应用于基因分离、染色体图谱分析、大片段基因的序列分析以及 DNA 定位诱变、肿瘤基因治疗与新的化学疗法等分子生物学领域.     

蚕豆叶肉细胞中ABA的胶体金免疫电镜定位

利用胶体金免疫电镜定位技术对蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ定位的研究表明,在以ＡＢＡ抗体处理的切片中,叶绿在有大量的金颗粒标记,细胞质和细胞核也有金颗粒标记,但液泡和细胞壁中没有金颗粒标记,免疫染色前用胰蛋白酶处理可显著增强金颗粒标记密度,而不用ＥＤＣ固定或以免疫前兔血清处理的切片中几乎没有金颗粒标记。本实验为蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ的分布提供了直接的证据并说明了该技术是研究ＡＢＡ定位的一种可靠的方法。     

绿豆上胚轴细胞中BR的胶体金免疫电镜定位

利用葡萄球菌A蛋白与胶体金连接的复合物为探针的免疫电镜定位技术对绿豆上胚轴细胞中BR定位的结果表明,在用抗BR抗体处理的超薄切片中,叶绿体、核仁和液泡内有大量的金颗粒标记,细胞膜和淀粉粒也有金颗粒标记,但细胞壁中没有观察到金颗粒。在不用EDC固定的切片中,金颗粒标记密度非常低,而在用正常兔血清处理的切片中,所有细胞器内几乎没有金颗粒.该实验为绿豆上胚轴细胞中BR的分布提供了直接的证据。     

蚕豆（Vicia faba L．）叶肉细胞中ABA的胶体金免疫电镜定位

利用胶体金免疫电镜定位技术对蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ定位的研究表明,在以ＡＢＡ抗体处理的切片中,叶绿体有大量的金颗粒标记,细胞质和细胞核也有金颗粒标记,但液泡和细胞壁中没有金颗粒标记。免疫染色前用胰蛋白酶处理可显著增强金颗粒标记密度,而不用ＥＤＣ固定或以免疫前兔血清处理的切片中几乎没有金颗粒标记。本实验为蚕豆叶肉细胞中ＡＢＡ的分布提供了直接的证据并说明了该技术是研究ＡＢＡ定位的一种可靠的方法。     

BglⅠ限制性核酸内切酶与环状pBR322-DNA专一性和非专一性相互作用的动力学及热力学

 本文选择限制性核酸内切酶BglⅠ和pBR322-DNA为试验系统,用酶促反应的动力学和热力学方法来研究内切酶对环状DNA分子的专一性和非专一性结合及切割过程,求得了各限制位点的切割速度k及活化能E,各限制位点催化速度常数k_c,酶同限制位点专一性结合的平衡常数k_S非专一性结合的平衡常数k_N及其热力学参数△H,△S。研究表明:不论底物的构型如何(线状还是环状),内切酶都以相似的动力学和热力过程对其进行结合与切割。     

肾上腺糖皮质激素对体外培养的人体肝癌细胞的影响 一、对细胞生长及DNA合成的抑制

一些研究工作证明,肾上腺糖皮质激素对其相应的靶组织或靶细胞的生长、分化有诱导功能,能诱导大鼠肝或离体培养的肝癌细胞专一性地合成某些酶,并抑制DNA的合成(Loeb 1973);离体培养的大鼠肝癌细胞膜     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

绿豆上胚轴细胞中BR的胶体金免疫电镜定位

利用葡萄球菌Ａ蛋白与胶体金连接的复合物为探针的免疫电镜定位技术对绿豆上胚轴细胞中ＢＲ定定的结果表明,在用抗ＢＲ抗体处理的超薄切片中,叶绿体、核仁和液泡内有大量的金效果标记,细胞膜和淀粉粒也有金颗粒标记,但细胞壁中没有观察到金颗粒。在不用ＥＤＣ固定的切片中,金颗粒标记密度非常低,而在用正常兔血清处理的切片中,所有细胞器内几乎没有金颗粒。该实验为绿豆上胚轴细胞中ＢＲ的分布提供了直接的证据。     

华中五味子降转氨酶成分的研究

从华中五味子中分离得6种结晶成分,并确定了它们的化学结构。其中酯甲、乙、丙及丁经药理和临床试验证明有降低血清GPT作用,去氧五味子素及酯戊无效。用电子显微镜观察酯甲对小鼠四氯化碳中毒后肝细胞亚微结构的影响,认为肝细胞的损伤受到保护,酯甲对肝细胞无直接损害作用。氚标记醇甲口服后很快吸收,在肝内从脂溶性迅速转化为水溶性代谢物,主要经肾排泄。提纯大鼠肝GPT酶蛋白,免疫家兔后,用抗原抗体反应证明酯甲的降酶机理可能与抑制肝内GPT活力有关。     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅱ.肝细胞内乙型肝炎表面抗原的电子显微镜定位方法

本文介绍辣根过氧化物酶标记抗体对肝细胞内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的免疫电镜定位方法。电镜样品制备,可采用酶标免疫显色组织切片的再包埋、或直接利用超薄切片进行酶标免疫显色定位。对实验中应注意的一些问题进行了讨论。在电子显微镜下初步观察了HBsAg 阳性肝细胞中HBsAg 的分布和形态,并发现在光学显微镜下,辣根过氧化物酶标免疫定位HBsAg 完全为阴性部位的肝细胞中,有的细胞胞浆内或扩大的内质网池内,尚可见到少量散在的HBsAg 与酶标抗体的沉积物,提示电镜观察有更好的灵敏性。     

人用鼠源单克隆抗体的生产和质量控制的指南——药品专门委员会、生物工程学/药学特别工作组

<正>1.引言 免疫动物的B-淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合结果形成杂交细胞,即杂交瘤细胞,该细胞不断生长并产生抗体。这种细胞可经克隆化后筛选,使其稳定分泌特定的专一性抗体。这些克隆细胞系的连续培养可以大量制备单克隆抗体。这种方式生产的单克隆抗体可用于各种治疗目的,如抗肿瘤治疗,免疫调节,被动免疫以及体内诊断和生物制品的制备方法。下述要求是对得自鼠源杂交瘤细胞的单克隆抗体拟在人体治疗和体内诊断应用时的要求。拟用于纯化其它制品的单抗应经本文所述方法证明为纯品不含杂质。本文不涉及用于体外诊断目的的单抗。 鼠源单克隆抗体在临床应用方面的一个重要考虑是该抗体可能与人体组织抗原(除已有描述者外)有非特异的免疫交叉反应以及可能有病毒和/或潜在致癌大分子物质。 鼠单抗用于人体治疗的基本问题可能是受者对鼠免疫球旦白或产品中的其它旦白产生抗体。这些可引起有害反应并且会限制有效抗体治疗的持续。对患者采用不能自己合成免疫球旦白链的亲代骨髓     

植物酶的组织和细胞化学定位研究方法

酶是参与植物体内生化反应的特殊蛋白质。在保持活组织和细胞结构完整性的条件下,利用组织化学、细胞化学、免疫学和显微检测等技术研究酶的即位定位,是了解酶在组织、细胞和亚细胞中的分布、活性动态与定量及酶功能等的重要途径。对植物体中酶定位的组织化学和细胞化学方法的概念、原理与研究进展进行了综述,并根据国际酶化学分类编号顺序,分别介绍了25种酶的组织化学染色定位所用的反应介质和染色方法及46种酶的细胞化学定位方法的参考文献。     

神经肽的脑内免疫组织化学定位

大量研究工作证明神经肽在中枢神经系统中起着重要的作用,其中有些很可能是神经递质。由于方法学的改进,尤其是灵敏度高、专一性强的放射免疫分析和免疫组织化学的发展,使这些神经肽的微量测定和精确定位有了可能。掌握这些神经肽的脑内分布是了解其功能的必不可少的环节。近年来发展起来的过     

斑点酶免疫实验检测流行性出血热抗体方法的研究

本文应用斑点酶免疫试验(DEIA),检测流行性出血热病人血清42份,其结果与间接免疫荧光(IFA)进行了比较,符合率100％,其DEIA几何干均滴度为1:880,IFA为1:580,同类风湿因子阳性血清[RF(+)]无交叉反应,证明本方法具有较高的敏感性和特异性,本文还对不同方法处理组织内源酶的效果和不同阻断剂的阻断效果进行了比较。试验结果表明本法不但敏感、特异,而且简单、快速、安全、经济、易于推广。