细胞内AhR信号转导通路的机制研究

芳香族化合物受体((Aryl hydrocarbon receptor,AhR)是一个属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix(bHLH))Per-Arnt-Sim同源域(Per-Arnt-Sim homology domain(PAS))家族的转录因子.在外界环境激素2,3,7,8-四氯-二苯并-对-二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,2,3,7,8-TCDD)的刺激下,AhR从细胞质中转运入细胞核中,与另一个蛋白AhR核转运蛋白(AhR nuclear transportor,ARNT)合,形成异二聚体,结合在下游靶基因上,使相应基因,如细胞色素(cytochrome P4501A1/cytochrome P450 1B1,CYP1A1/CYP1B1)等异常表达,从而干扰动物的内分泌,引起免疫毒性,甚至导致癌症的发生.AhR的激活过程,涉及多种蛋白修饰的变化,如磷酸化、泛素化等,这些修饰调控了蛋白的定位、活性、稳定性等.AhR信号转导通路,与其他的很多通路,如E2-ER,MAPK通路等相互交义.本文旨在描述细胞内AhR通路的激活过程,功能,以及与其他通路之间相互的调控作用,以期为TCDD引发的相关疾病的预防和治疗提供思路.     

二噁的危害

二口恶口英(ｄｉｏｘｉｎ)是含氯的化合物的俗称。其全称为多氯二苯并———对———二口恶口英,呈无色针状晶体。对二口恶口英化合物的测定研究,根据其分子中氯原子的不同位置和数目能产生200多种异构体,但它的许多化学性质至今仍未完全确定,在750℃以上高温下才会快速分解。目前通过检测出的2,3,7,8———四氯二苯并———对———二口恶口英为二口恶口英中毒性最强的有毒化合物,其毒性是氰化钠的130倍,砒霜的900倍。研究确定二口恶口英是一种具有生殖毒性、免疫毒性和内分泌毒性的化合物。它可经皮肤、粘膜、呼吸道、消化道进入人体内。…     

金顶侧耳化学成分的研究

对榆黄蘑的化学成分进行了研究,从子实体中分离和鉴定出D-甘露醇、麦角甾醇、1-癸醇、5-氧代-L-脯氨酸甲酯、5,10-二乙氧基-2,3,7,8-四氢化-1H,6H-联吡咯-[1,2-a;1,2-d]吡嗪、邻苯二甲酸二丁酯和环戊-1,2-二酮等物质。并采用高效薄层析和高效液相色谱两种方法证明了洛伐他汀在金顶侧耳中的存在。     

TCDD诱发斑马鱼胚胎shh基因表达降低及其对下颌发育的影响

2,3,7,8-四氯-二苯基-对-二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)为毒性 很强的环境污染物质。用O-1．0μg／L的TCDD处理受精后24 h(24 hpf)的斑马鱼胚至观察时为止,进行了形 态学观察、基因阻断、原位杂交、TUNEL染色以及免疫学染色等实验。结果表明,TCDD处理后会引起斑马鱼 下颌短小,Shh基因在下颌部表达降低;而在芳烃基受体AhR功能阻断的胚胎中,TCDD并没有引起斑马鱼下 颌短小,同时也没有观察到Shh基因表达缺失;免疫学染色表明TCDD和Shh阻断物质Cyclopamine均可引起 斑马鱼下颌区域增殖细胞的减少。TCDD引起的下颌短小可能是首先引起以AhR为媒介的Shh表达缺失,进而 造成下颌部增殖细胞减少,最终引起下颌短小的发生     

芳香烃受体蛋白质生理功能及在肿瘤中的作用机制

芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor, AHR)作为一种配体依赖性的转录因子,介导2,3,7,8-四氯二苯并对二恶英(2,3,7,8-tetrachloro-dibenzop-dioxin, TCDD)等卤代烃的毒性作用,属于碱性螺旋-环-螺旋-PAS (basic Helix-Loop-Helix-PER-ARNT-SIM,bHLH-PAS)家族成员,具有进化保守性,在多种动物和人类中表达。该蛋白质通过与特定配体结合发生构象改变,转位至细胞核同AHR核转运蛋白(AHR nuclear translocator, ARNT)形成二聚体,并对下游靶基因表达发挥调控作用。最近研究发现,AHR也成为控制细胞增殖分化、凋亡、迁移黏附等多种生理过程的关键转录因子,揭示了AHR在细胞稳态、宿主免疫和肿瘤发展中的重要作用。本文基于国内外对AHR的系列研究,讨论了AHR功能结构、发挥作用的信号通路及其多样性的配体,重点阐述其在防御和屏障保护、调节自身免疫进程、参与调节B细胞和多种T细胞亚群发育分化及其细胞因子的表达,以及在不同微环境中对肿瘤发挥促进或抑制作用的讨论,旨在为相关...     

食品中痕量二恶英分析选择最有效的解决方案

二恶英是由210种异构体组成的混合物,其中含4氯～8氯取代的二恶英就有136种,而其中毒性较大的2,3,7,8-位氯代异构体有17种,要将这些组分及异构体从食品样品这样复杂的基质中分离分析并定量,对方法的特异性、选择性和灵敏度都提出了极大的挑战。     

利用离体大白鼠肝癌细胞的EROD诱导指示二恶英的复合毒性效应

离体条件下,以大白鼠肝癌细胞株H4IIE的7－乙氧基－3－异吩恶唑酮－脱乙基酶（EROD）活力诱导作为毒性指标,测定了2,3,7,8－TCDD单独存在以及与一定浓度的2,3,7,8,－TCDF,OCDD,PCB126和PCB77分别共存下的EROD活力,并用TEF和独立作用模型（independence)两种方法对实验结果进行了评估。利用TEF评估的结果表明实验的TEQ值和理论计算的TEQ值十分接近,复合毒性表现为加合作用（additivity),这一结果与用独立作用模型评估的结果完全一致。研究结果不仅证实了TEF评估方法的有效性和利用模型方法评估二恶英类化合物复合毒性的可行性,同时还表明离体条件下,大白鼠肝癌细胞株H4IIE的EROD酶活力诱导适用于化合物的复合毒性的研究。     

二恶英反应增强子调控的虫荧光素酶报告基因质粒的构建

为加强二恶英类化学物质的快速筛选和半定量检测,我们构建了一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光素酶报告基因质粒。二恶英反应增强子来源于pHAV质粒,MMTV启动子来源于pCatM质粒,上述两者连接后与虫荧光素酶载体连接,转染人HepG2肝癌细胞,以2,3,7,8四氯代二苯并二恶英(TCDD)诱导报告基因表达后检测虫荧光素酶活性。结果表明该质粒中虫荧光素酶的表达受二恶英反应增强子的调控,且在一定浓度范围内虫荧光素酶的活性与TCDD的量呈线性关系。研究显示该质粒转染的细胞株有望用于快速筛选及半定量检测二恶英,可进一步加强研究作为二恶英类化学物质监测的常规方法。     

有机污染物二氯二苯三氯乙烷、三丁基锡和2，3，7，8-四氯二苯并二嗯英暴露下的四膜虫毒理基因组学研究

有机污染物二氯二苯三氯乙烷（DDT）、三丁基锡（TBT）和2,3,7,8．四氯二苯并二嗯英（TCDD）因对水生生态系统的危害以及对人体健康造成的严重伤害而受到重视．本实验以模式生物原生动物嗜热四膜虫为研究对象,利用microarray技术筛选了在上述3种污染物下分别暴露24h后差异表达2倍以上的基因,并在geneontology功能注释的基础上,通过富集分析考察了这些基因涉及的主要功能,其中许多功能和多细胞生物中的报道相一致．随后,以TCDD中富集功能注释的基因为核心,通过CLR算法构建了TCDD相关基因的相互作用网络,依照功能将其划分为2个亚网络,并在此基础上推测了TCDD在四膜虫中的作用机制模型．结果显示,四膜虫具有成为在基因组水平研究毒物作用机制的单细胞生物模型的巨大潜力．     

维生素E对2，3，7，8-四氯二苯并二嗯英急性染毒小鼠卵巢内分泌及其结构的影响

为研究维生素E对2,3,7,8-四氯二苯并二嗯英（TCDD）染毒小鼠生殖内分泌功能和卵巢的影响,设计了急性染毒实验。将24只4—5周龄的健康雌性小鼠（Musmusculus）随机分为对照组、TCDD（30ag／kg）染毒组和染毒同时给予100mg／kg维生素E组3组。通过放射免疫法测定小鼠血浆孕酮、雌二醇含量的变化,显微镜下计数卵泡数量并观察其形态变化。结果表明,TCDD能导致小鼠血浆孕酮含量的降低及卵巢结构的紊乱、卵泡数量的减少。100mg／kg的维生素E能明显对抗急性TCDD染毒引起的雌鼠孕酮含量和卵泡数量降低,缓解TCDD引起的小鼠卵巢形态结构的病变;TCDD染毒和维生素E对小鼠血浆雌二醇含量均没有明显影响。结果表明,维生素E对TCDD引起的内分泌功能紊乱以及卵泡数量降低有拮抗作用。