补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓胎盘组织一氧化氮合酶活性的影响

为了探讨补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓（ＩＵＧＲ）胎盘组织一氧化氮（ＮＯ）生成的影响,本文对正常孕妇、ＩＵＧＲ患者及补肾益气活血中药治疗后患者各１２例,采用ＮＡＤＰＨ黄递酶法研究了一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在胎盘组织的分布,应用化学发光法测定胎盘组织ＮＯＳ活性。结果表明：正常孕妇胎盘绒毛合体滋养层细胞ＮＯＳ呈强阳性反应,绒毛干血管壁呈阳性反应,终末绒毛毛细血管壁呈阴性反应;ＩＵＧＲ患者绒毛合体滋养层细胞和绒毛干血管壁ＮＯＳ染色明显变浅,而终末绒毛毛细血管壁呈阳性反应;中药治疗后合体滋养层细胞和绒毛干血管壁ＮＯＳ染色明显加深。ＮＯＳ活性测定中药组较ＩＵＧＲ未治疗组显著增高,与正常孕妇相比其差异无显著性。结果提示：ＮＯ参与ＩＵＧＲ的病理生理过程,补肾益气活血方通过增强ＮＯＳ活性促进胎盘组织ＮＯ的产生     

纳米金生物条形码技术检测痕量二噁英类化合物

建立一种基于纳米金生物条形码技术的二噁英快速筛检方法.利用二噁英诱 导激活的芳香烃受体复合物,特异识别以纳米金为报告基团的二噁英反应探针,该 探针被释放后进行条形码放大,通过纳米金银染技术增强识别信号,并记录其吸光度值,从 而可以简单灵敏地快速筛检二噁英类化合物.在一定的反应时间和浓度范围内（10^-14～10^-10mol/L）,溶液的吸光度值与2,3,7,8 四氯二苯并二噁英（2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD）浓度之间呈正相关 ,方法检测限为0.01 pmol/L,变异系数为5%～8%.用纳米金生物条形码（Nano Barcod e,nanoparticle based bio barcode）方法和现有的生物分析方法（CALUX,chemical activated luciferase gene expression）分别测定TCDD标准品,并绘制剂量效应曲线.结 果表明,本方法灵敏度高,线性范围宽,重复性好.本研究纳米金生物条形码方法的检测灵 敏度高于CALUX将近5倍(EC₅₀分别为 4×10^-12 mol/L 和 2×10^{- 11} mol /L),检测限较CALUX降低了10倍（检测限分别为1×10^-14 mol/L 和1×10 ^-13 mol/L）,变异系数分别为5%～8%和15%～30%.     

完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染

为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .     

二恶英反应增强子调控的虫荧光素酶报告基因质粒的构建

为加强二恶英类化学物质的快速筛选和半定量检测,我们构建了一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光素酶报告基因质粒。二恶英反应增强子来源于pHAV质粒,MMTV启动子来源于pCatM质粒,上述两者连接后与虫荧光素酶载体连接,转染人HepG2肝癌细胞,以2,3,7,8四氯代二苯并二恶英(TCDD)诱导报告基因表达后检测虫荧光素酶活性。结果表明该质粒中虫荧光素酶的表达受二恶英反应增强子的调控,且在一定浓度范围内虫荧光素酶的活性与TCDD的量呈线性关系。研究显示该质粒转染的细胞株有望用于快速筛选及半定量检测二恶英,可进一步加强研究作为二恶英类化学物质监测的常规方法。     

基于银染增强的纳米金探针定量检测microRNA

MicroRNA是一类存在于动植物体内的重要的、序列高度同源的基因表达转录后调节因子,近来对microRNA不同表达模式和调节作用的研究要求能够快速、灵敏、特异地检测痕量microRNA的方法．利用纳米金银染增强技术建立了一种简单快速的microRNA定量方法,以纳米金标记的寡核苷酸分子作为信号探针,以生物素标记寡核苷酸分子作为捕获探针,经链霉亲和素-生物素作用将靶序列捕获在固相载体酶标孔上,继而通过纳米金催化的银染增强放大效应产生高灵敏的识别信号,记录其吸光度值从而实现microRNA分子的定量．用该方法检测小鼠肝脏,脑组织中miR-122a和miR-128各自的含量及合成miR-122a,结果表明其在良好的线形范围(10 pmol/L～10 fmol/L)内最低检测限为10 fmol/L,能够特异地区别单核苷酸错配的靶microRNA．     

NO在体实时传感器

目前用来检测ＮＯ的方法有近１０种，但多为间接的测定方法。用ＮＯ传感器可对生物样品产生的ＮＯ进行直接、快速、灵敏的在体原位检测，还可测量ＮＯ的释放动力学。本文综述了几种常见的ＮＯ传感器的设计原理、结构特征和有关参数。     

适配分子在分子识别中的作用

抗体是分子识别领域应用最广的一类分子,在临床治疗和诊断方面均发挥了巨大的作用,随着配体指数增强系统进化技术（SELEX）的发展,已经可能筛选出针对任何靶分子以高特异性、高亲和力结合的适配分子,在治疗和诊断的分子识别领域,它已经成为能够和抗体竞争的一类分子。     

一株受二噁英类化学物质诱导表达的萤光素酶肝癌细胞系

构建了一对二英类化学物质敏感的人肝癌细胞株 ,用于二英类化学物质生物筛选和快速半定量检测 .首先构建一在二英增强子调控下的萤光素酶报告基因质粒 ,该质粒转染入人肝癌细胞株HepG2 ,筛选稳定转染细胞株 .2 ,3,7,8 四氯代二苯并二英 (TCDD)诱导稳定转染细胞株萤光素酶表达 ,发光检测萤光素酶活性 .该细胞株用于TCDD检测 ,检测下限为 1 1pmol L ,线性范围为 1～ 10 0pmol L .该细胞系的建立可用于二英类化学物质的生物筛选和快速半定量检测     

重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究

采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件.结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光,对非分枝杆菌发光值很低,两者差异有显著性;不同的分枝杆菌发光值有差异：卡介苗的发光值最高,结核分枝杆菌的发光值最低;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40,差异显著.因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌,但Phage 88的效果优于Phage 40.     

一株受二噁英类化学物质诱导表达的萤光素酶肝癌细胞系

 构建了一对二英类化学物质敏感的人肝癌细胞株 ,用于二英类化学物质生物筛选和快速半定量检测 .首先构建一在二英增强子调控下的萤光素酶报告基因质粒 ,该质粒转染入人肝癌细胞株HepG2 ,筛选稳定转染细胞株 .2 ,3,7,8 四氯代二苯并二英 (TCDD)诱导稳定转染细胞株萤光素酶表达 ,发光检测萤光素酶活性 .该细胞株用于TCDD检测 ,检测下限为 1 1pmol L ,线性范围为 1～ 10 0pmol L .该细胞系的建立可用于二英类化学物质的生物筛选和快速半定量检测