沙利度胺通过诱导G1阻滞和凋亡抑制血管内皮细胞增殖

沙利度胺是一种抗血管生成药物,临床上用于治疗多种肿瘤,但其抗肿瘤血管生成机制尚不十分清楚. 本文采用MTT法观察沙利度胺对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响. 结果发现,沙利度胺能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为16.47 μg/mL;然后采用Hoechst染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,发现沙利度胺能够诱导内皮细胞凋亡,并干扰细胞的周期,出现G0/G1期阻滞. 最后,通过Western印迹方法分析沙利度胺对血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达的影响,发现抗凋亡的Bcl-2蛋白表达水平随沙利度胺浓度增大而降低. 初步结果提示,沙利度胺可能通过阻遏抗凋亡分子Bcl-2表达,激活诱导G1期阻滞的信号通路而抑制内皮细胞新生,从而抑制肿瘤生长. 诱导内皮细胞凋亡及G1期阻滞的具体分子机制正在研究中.     

角膜内皮细胞再生研究新进展

人角膜内皮细胞的主要功能是维持角膜透明性,角膜内皮单层发育成熟形成细胞接触后,内皮细胞会停止分裂增殖,但并没有退出细胞周期。角膜内皮细胞的增殖有多种因素的参与和影响,接触抑制和G1期抑制使细胞增殖暂时停止;细胞因子TGF-β2抑制人角膜内皮细胞进入细胞周期S期,而EGF、FGF、NGF则能够促进细胞的增殖;ROCK抑制剂Y-27632能够促进角膜内皮细胞的粘连,有助于内皮细胞的损伤修复。体外培养角膜内皮前体细胞、诱导多潜能干细胞向角膜内皮细胞分化,为今后治疗角膜内皮失代偿提供了新方向。     

低分子量透明质酸寡糖片段介导内皮细胞增殖的信号通路

为研究低分子量透明质酸寡糖片段(hyaluronan oligosaccharides, o-HA)对血管内皮细胞生长与迁移的影响,及透明质酸（hyaluronan,HA）受体（CD44与RHAMM）在此过程中的作用,首先通过细胞计数、MTT实验、细胞周期分布及单层细胞损伤模型修复实验,观察o-HA对血管内皮细胞（猪髂总动脉内皮细胞,porcine vascular endothelial cell line,PIEC）增殖及创伤愈合的影响．结果显示,o-HA明显促进血管内皮细胞生长,并且能够促进内皮细胞向创伤区迁移.蛋白质免疫印迹分析证明,o-HA作用于PIECs后,细胞Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度增强,c-Myc蛋白、周期蛋白D1表达水平增高.Src 激酶特异性的化学抑制剂PP2可轻度抑制ERK-1/2磷酸化;进而通过抗-CD44与抗-RHAMM抗体分别预先封闭细胞表面相应的特异性受体位点后,再用o-HA刺激细胞,探讨HA受体在o-HA介导PIECs信号传导过程中的作用．结果显示,抗CD44抗体不能抑制o-HA介导的ERK-1/2磷酸化;而抗RHAMM抗体可轻度抑制o-HA介导的ERK-1/2磷酸化．结果提示,o-HA具有促进血管内皮细胞增殖及创伤愈合的作用,其机制可能是通过血管内皮细胞表面受体RHAMM实现的.该作用可能通过激活Src激酶及细胞内MAPK（ERK-1/2）信号通路,启动早期反应基因转录,诱使c-Myc蛋白高表达,从而促进血管内皮细胞生长．该作用也可能与上调细胞周期蛋白 D1的表达有关．     

c-ski对大鼠皮肤成纤维细胞增殖的调节作用及机制

c-ski是成纤维细胞增殖的复杂调节子,它对中胚层来源的皮肤成纤维细胞增殖的作用还不清楚。在观察正常成纤维细胞周期c-ski表达的时相特点的基础上,通过体外转染c-ski,观察它对细胞增殖活性、细胞周期进展以及周期蛋白表达的影响。结果显示：c-ski mRNA表达在加入血清后开始升高,在细胞周期G,期的高峰期达到峰值,S期显著下降,在G2／M期维持在较低的水平：转染的c-ski可以以剂量依赖的方式增加细胞的增殖活性,并且可以逆转Smad3对细胞增殖活性的抑制作用;C-ski使成纤维细胞提前达到G0／G1期的最低点,进入S期：同时细胞G1期周期蛋白cyclinD的表达增加。这些结果表明：C-ski是皮肤成纤维细胞G1期的调节子,通过加快G1期进展促进增殖,抑制Smad3活性,促进cyclinD的表达可能与这一作用的分子机制有关。     

片仔癀对人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖、凋亡及周期的影响

目的：研究片仔癀对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖抑制作用,及其对细胞周期、细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法观察片仔癀对人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,westem—blot检测相关蛋白的表达。结果：片仔癀以剂量依赖式抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,片仔癀250、500、1000μg·mL-1作用于OVCAR-3细胞24h后,其早期凋亡率分别为6．6％、30．9％、43．2％,而对照组为0％,其诱导凋亡作用呈现剂量依赖性;细胞积聚在G0／G1期,同时S期细胞比例减少;Akt、PARP、CDK6表达下调。结论：片仔癀可以抑制OVCAR-3细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,并能阻滞细胞于G0／G1期,有望成为卵巢癌治疗药。     

低氧对体外人软骨终板干细胞增殖、衰老、凋亡的影响

该文应用原代培养的方法获得人软骨终板干细胞(cartilage endplate derived stem cells,CESCs)。采用水溶性四唑盐(WST)-1法、Edu掺入法、β-半乳糖苷酶染色法、流式细胞术检测低氧(1%O2)刺激对CESCs细胞增殖、衰老、凋亡以及细胞周期的影响。结果显示,与常氧(21%O2)组相比较,低氧刺激对CESCs增殖活性有显著的促进作用,低氧处理72 h后,CESCs的增殖活性增加最为显著,低氧刺激能够极为显著的抑制CESCs的衰老,低氧对CESCs的凋亡同样具有极为显著的抑制作用;低氧影响CESCs的细胞周期,呈现出G1期细胞比例先增加后减少和(S+G2/M)期细胞比例先减少后增加的趋势。结果表明,低氧刺激能够促进CESCs增殖、抑制细胞衰老和凋亡。     

细胞周期素G1、G2在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期素G1、G2与血管瘤发生发展及退化的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对50例血管瘤和5例正常皮肤组织检测细胞周期素G1、G2的表达;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果增生期血管瘤内皮细胞胞浆或胞核内cyclin G1呈强阳性表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G1无表达;增生期血管瘤内皮细胞胞浆内无cyclin G2表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G2呈强阳性表达。增生期组与退化期组、正常皮肤组分别相比,细胞周期素G,阳性表达差异有显著性（P〈0．05）,退化期组与增生期组、正常皮肤组之间,细胞周期素G2的阳性表达差异有显著性（P〈0．05）。结论细胞周期素G1、G2在血管瘤发生、发展及退化中起着重要作用。     

Src-MAPK信号通路参与透明质酸寡糖片段诱导PIEC细胞的增殖

探讨透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长的影响及机制。采用细胞计数、流式细胞术、Western blot等方法,检测o-HA作用于内皮细胞后,Src激酶、丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK-1/2)的磷酸化程度及细胞周期蛋白D1的表达水平。o-HA在10μg/ml浓度时可明显地促进血管内皮细胞的增殖,包括细胞周期水平及细胞数量。继续增加o-HA的浓度及延长培养时间均未出现进一步的变化;细胞增殖在12h开始出现,72h达到高峰。1μg/ml的o-HA作用于细胞2min后,胞内Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度即增强,并在3h后检测到周期蛋白D1的表达水平增高。o-HA具有促进血管内皮细胞增殖的作用,其机制可能是通过激活Src激酶及细胞内MAPK信号通路,从而促进血管内皮细胞生长;该作用也可能与上调周期蛋白D1的表达有关。     

双歧杆菌对食管癌细胞增殖的抑制作用及细胞周期的影响

目的探讨青春双歧杆菌对食管癌EC109细胞的增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法用MTT比色法测定EC109细胞活性,用流式细胞仪测定EC109细胞周期。结果青春双歧杆菌对EC109细胞具有显著的增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;经青春双歧杆菌处理后,EC109细胞周期发生变化：细胞分裂阻滞于G1期。结论青春双歧杆菌可通过影响细胞周期抑制食管癌EC109细胞的生长。     

胍基丁胺对血清诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察胍基丁胺对血清诱导大鼠肺动脉血管平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法原代培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs分对照组和胍基丁胺组,比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活力。液闪计数仪测定^3H-TdR掺入量,流式细胞仪测定细胞周期,图像分析法测定增殖细胞核原含量（PCNA）作为细胞增殖的指标。结果：胍基丁胺对PASMCs培养液中LDH活力无明显影响;胍基丁胺可显著减少血清诱导增殖PASMCs的^3H-TdR掺入量和PCNA的含量（P〈0．01）,使G0／G1期细胞比例显著增加,G2／M期细胞比例显著减少（P〈0．01）。随着胍基丁胺浓度的增加,PASMCs ^3H—TdR掺入量也相应显著减少（P〈0.01）。结论：胍基丁胺对PASMCs不产生明显的细胞毒性作用;但可抑制血清培养大鼠PASMCs的增殖,这种抑制作用呈剂量依赖性。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.