桂皮醛衍生物的合成及其对CVB3的作用

目的:合成桂皮醛衍生物,观测其对心肌细胞的毒性及抗CVB3病毒的作用.方法:化学合成6种桂皮醛衍生物,其中3种进行了红外、质谱等结构表征;MTT法检测被CVB3病毒感染和用桂皮醛衍生物治疗后的心肌细胞活性.结果:α-溴代对氨肉桂醛、α-溴代对甲基肉桂醛、对氯肉桂醛3种桂皮醛衍生物对心肌细胞的半教毒性浓度(TC50)分别为2151.28μ g·mL-1,1475.32μg·mL-1,22460.32μ g·mL-1;对CVB3病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为178.94μg·mL-1、173.35μg·mL-1,6045.25μg·mL-1;对CVB3病毒的治疗指数(TI)分别为12.02,8.51,3.71.结论:桂皮醛3种衍生物具有直接抑制CVB3病毒作用,但对病毒的细胞合成和吸附无明显作用.     

桂皮醛对小鼠柯萨奇病毒诱发病毒性心肌炎的作用(英文)

已知Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)及其下游信号组分在柯萨奇病毒(CoxsackievirusB,CVB)诱发的病毒性心肌炎中扮演重要的角色,其在治疗中的作用仍不明确。桂皮醛具有抗病毒以及成剂量依赖性抑制由TLR4诱导的核因子活性的作用,而其对病毒性心肌炎的作用机制尚不明确。我们的实验结果显示:在体外,桂皮醛对正常心肌细胞的IC50为15μM;100-1000μM桂皮醛能显著抑制心肌细胞中的病毒滴度(P0.01),而细胞存活率与CVB组无统计学差异(P0.01)。而在病毒性心肌炎小鼠体内,与模型组比较,20和40mg/kg桂皮醛i.p.使第7 d血清中NO的含量以及心肌中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS),肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α),核因子κB P65(nuclear factor-κB P65,NF-κB P65)和TLR4蛋白质表达显著降低(P0.05)。降低第21 d心脏体重比(Heat Weight/Body Weight,Hw/Bw)比值,提高小鼠生存率,减轻病理损伤的作用。这些结果显示桂皮醛虽在体外无抗病毒活性,但其在体内具有降低病毒滴度和抑制TLR-4-NF-κB信号传导的作用,对病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。桂皮醛可能通过对TLR-4-NF-κB信号传导抑制作用,作为一种新的方法治疗病毒性心肌炎。     

双酶法水解辐照改性马铃薯淀粉动力学研究

为了解辐照改性马铃薯淀粉的酶解特性,用α-淀粉酶和糖化酶同时作用于马铃薯原淀粉和经400 kGy剂量辐照处理后淀粉,考察了pH值、酶解温度、α-淀粉酶用量、糖化酶用量对反应速率的影响.以米氏方程为基础,用Lineweaver-Burk法求解动力学参数.结果表明,辐照后马铃薯淀粉的酶解反应速率明显高于马铃薯原淀粉.在单一水解体系中,α-淀粉酶和糖化酶对辐照前后马铃薯淀粉的降解都遵循Michaelis-Menten方程,α-淀粉酶的Km分别为11.343 mg· mL-1和9.386 mg· mL-1,Vmax分别为0.406 mg（mL·min）-1和1.079 mg（mL·min）-1;糖化酶的Km分别为10.307 mg· mL-1和8.905 mg·mL-1,Vmax分别为0.338 mg（mL·min）-1和0.821mg（mL·min）-1;水解产物葡萄糖对反应体系具有竞争性抑制剂的作用,其抑制常数Ki分别为1.298 mg·mL-1和0.934 mg·mL-1.研究结果表明辐照有效提高了马铃薯淀粉的酶解反应活性.     

肉桂醛对NaCl胁迫下番茄幼苗生长特性的影响

为探明肉桂醛对番茄幼苗耐盐性的影响,该研究以番茄‘合作903’为试验材料,探究肉桂醛(100μg·L^-1)对处于100 mmol·L^-1 NaCl胁迫下番茄种子萌发与幼苗生长特性的影响。在试验中设置4组处理：对照(CK,蒸馏水)、NaCl (100 mmol·L^-1)、NaCl+CA(100 mmol·L^-1 NaCl+100μg·L^-1 CA)、CA(100μg·L^-1)。结果表明：(1)在100 mmol·L^-1 NaCl胁迫下,添加100μg·L^-1的肉桂醛,番茄种子的发芽势和发芽率均有所提升,番茄幼苗的根长和鲜重均显著提高,说明添加肉桂醛对NaCl胁迫下番茄种子的萌发与幼苗生长均有一定缓解作用。(2)肉桂醛能够有效降低NaCl胁迫导致的番茄幼苗根尖总活性氧(reactive oxygen species, ROS)的过量累积,缓解膜脂过氧化程度从而降低细胞死亡率。综上表明,肉桂醛处理能够通过缓解幼苗的氧化...     

熊果酸衍生物的合成及其对肺癌细胞活性抑制的研究

目的：探讨合成的熊果酸衍生物对肺癌LTEP-α-2肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法：熊果酸经氧化、肟化和腙化合成为3-氧代熊果酸、3-肟基熊果酸和3-（2＇,4＇-二硝基）-苯腙熊果酸。采用MTT法检测熊果酸及其衍生物对肺癌LTEP-α-2细胞的体外抗肿瘤活性。结果：熊果酸及其衍生物对肺癌LTEP-α-2细胞有抑制作用,且3-肟基熊果酸对肺癌LTEP-α-2细胞抑制作用高于其他化合物,其抑制率为90.0%,IC50为7.4μg/m L。结论：熊果酸衍生物3-肟基熊果酸抗肺癌LTEP-α-2肿瘤细胞活性高于熊果酸的活性。     

对—氯代苯胺（PCA）在填充床生物反应器中的降解作用

以氯代苯胺（ＰＣＡ）为选择基质,用驯化技术从降解对二氯苯（ｐＤＣＢ）的富集培养物中得到了以同化ＰＣＡ为唯一碳源和氮源的混合微生物．将这种固定在填充床反应器中的微生物用于ＰＣＡ的降解作用研究中．在该反应器里,ＰＣＡ的生物降解遵循Ｌｏｇｉｓｔｉｃ方程ｑ＝ｑｍａｘ／（１＋ｅα－βＵｖ）．由方程求出了主要的动力学常数,Ｋｓ（半速率常数）和ｑｍａｘ（最大比基质降解速率）．于ＰＣＡ降解的同时,释放氯离子到培养基中．在水力停留时间３ｈ,进水ＰＣＡ浓度为３６０ｍｇ·Ｌ－１情况下,基质的体积降解率达到１２５ｍｇ·Ｌ－１·ｈ－１;基质的百分去除率为９１％．     

TGF-beta1通过抑制HIF-1alpha减少风湿性心脏病心肌细胞胶原合成

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在转化生长因子β1(TGF-β1)促风湿性心脏病心肌细胞胶原合成中的作用。方法:以体外培养风湿性心脏病(风心病)患者经瓣膜置换术后留取组织分离而来的心肌细胞为研究对象,依据加入TGF-β1的浓度将前期实验分为四组:0,5,10及20(μg/L),观察TGF-β1对风湿性心脏病心肌细胞胶原合成及HIF-1α表达的影响;而后实验选取10μg/L TGF-β1为干预浓度,将Scrambled si RNA或HIF-1αsi RNA转染入细胞内。48小时后,分别收集各组细胞,采用RT-PCR检测I型胶原的m RNA水平,Western Blot技术测定细胞内I型胶原和HIF-1α的蛋白表达水平。结果:与0、5及10μg/L浓度TGF-β1组相比,5、10及20μg/L浓度的TGF-β1分别显著地增加了风心病心肌细胞I型胶原及HIF-1α的表达。另外,HIF-1αsi RNA则明显减少了TGF-β1诱导的心肌细胞I型胶原生成。结论:HIF-1α介导了TGF-β1对风湿性心脏病心肌细胞I型胶原合成的促进作用。     

Ca~(2+)信号在肿瘤坏死因子-α诱导心肌肥大PI3-K信号途径中的作用

目的:研究Ca2+信号在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大PI3-K信号途径中的作用。方法:Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;[3H]-亮氨酸掺入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变。结果:①TNF-α(100μg/L)明显诱导心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及体积的增加,PI3-K特异性抑制剂LY294002(50μmol/L)明显抑制TNF-α诱导的心肌肥大,但对正常心肌细胞生长无影响。L型Ca2+通道阻断剂verapamil(1μmol/L)对TNF-α诱导的心肌肥大无明显影响。②TNF-α引起心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬间变化幅度增高,LY294002明显降低TNF-α诱导的上述改变,L型Ca2+通道阻断剂verapamil(1μmol/L)对TNF-α引起的变化无明显影响。结论:PI3-K可能通过引起心肌细胞[Ca2+]i升高参与TNF-α诱导的心肌细胞肥大,但与L型Ca2+通道无关。     

缬氨酸杀虫菊酯的合成

缬氨酸杀虫菊酯是一类很有发展前景的杀虫杀螨剂,它的菊酸部分为Ｒ－构型,菊醇部分为Ｓ－构型,其合成是由相应的缬氨酸或者它的活性衍生物与相应的醇经酯化而制得。具体过程是Ｄ－缬氨酸经６ＮＨＢｒ／ＮａＮＯ２溴化制成（Ｒ）－α－溴代异戊酸,再与对三氟甲基苯胺反应合成（Ｒ）－Ｎ－［（４－三氟甲基）苯基］α－缬氨酸,后被Ｎ－氯代琥珀酰亚胺氯化制成（Ｒ）－Ｎ－［２－氯－４－（三氟甲基）苯基］α－缬氨酸,最后与（Ｓ）－α－氰基－３－苯氧苯基甲醇用ＤＣＣ脱水酯化合成缬氨酸杀虫菊酯Ｉ（Ｒ１＝Ｆ３Ｃ,Ｒ２＝Ｈ,ＣＬ,Ｒ３＝Ｈ）。还给出了两种菊酯２×４种异构体杀虫（烟草夜蛾和家蝇）活性数据。     

鸢尾苷元磺酸钠对柯萨奇B3型病毒诱导细胞固有免疫的初步研究

柯萨奇B组3型（Coxsackievirus B3,CVB3）病毒目前仍严重危害人类健康,目前没有批准的用于CVB3治疗的特效药,亟需开发新的抗CVB3药物。鸢尾苷元磺酸钠（Tectorigenin sodium sulfonate,TSS）是中药川射干化学成分鸢尾苷元的修饰物,本研究应用细胞感染模型评估了TSS体外抗CVB3作用。实验中,以CVB3感染的HT-29细胞为体外模型,在最大无毒浓度（TC0）情况下观察不同浓度药物作用于HT-29细胞后,在72h收集细胞,采用相对荧光定量RT-PCR法检测细胞中CVB3病毒核酸量,TLR3、TRIF mRNA表达水平;收集上清液,采用ELISA法测定上清液NF-κB,TNF-α、IL-6、IFN-β含量。结果显示TSS对HT-29细胞的TC0为15.625μg/mL。与模型组比较,15.625μg/mL剂量的鸢尾苷元磺酸钠能有效增加HT-29细胞活性,降低CVB3病毒滴度（P<0.001）,能明显降低细胞内转导和转录活化因子TLR3、TRIF、NF-κB的表达水平（P<0.05）,降低炎症因子TNF-α、IL-6、IFN-β的含...     

HPLC法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法：色谱柱为DiamonsilTM C18（250×4.6 mm,5滋m）,流动相为甲醇-0.05mol.L-1磷酸溶液（93∶7）为流动相,检测波长210 nm,进样量10滋L。结果：熊果酸在21.28滋g.mL-1～212.8滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997）,平均回收率为97.79%（RSD=1.30%）;齐墩果酸在24.02滋g.mL-1～240.2滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,平均回收率为98.36%（RSD=1.11%）。结论：该方法简便、灵敏、准确,可用于鸡矢藤药材的质量评价。     

益气活血中药复方对CVB3大鼠心肌细胞感染模型ATP6基因表达的影响

目的：研究益气活血中药复方对CVB3大鼠心肌细胞感染模型ATP6（ATP synthase F0 subunit 6）基因表达的作用机制。方法：本实验用新生2-3dWistar大鼠心肌细胞,建立CVB,病毒感染模型,通过改良的抑制性消减杂交技术（SSH）,克隆了受CVB,攻击的心肌细胞中被中药（益气活血中药复方）调控的基因。结果：ATP6基因,在中药组中高表达,而病毒组中表达减弱或抑制。结论：益气活血中药复方能影响受CVB,病毒攻击的宿主细胞ATP6基因的表达,有效保护心肌、阻断病程进度,从而实现治疗病毒性心肌炎的目的。     

呼肠孤病毒Ⅲ型免疫荧光检测方法的建立及初步应用

目的 建立呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo3）免疫荧光（IFA）检测方法,应用于人用动物源性生物材料及生物制品外源Reo3的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选Reo3敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,方阵法滴定免疫荧光素最佳工作浓度。并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BSC-1细胞作为Reo3敏感细胞,病毒感染力滴度（TCID50）为10-5.8/mL;免疫荧光素最佳工作浓度为1∶100;与小鼠鼠痘（Ect）病毒、小鼠肝炎（MHV）病毒均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶1280;可检测到的病毒滴度最低为10-4.1/mL。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于人用动物源性生物材料及生物制品Reo3的检测。     

东莨菪内酯对朱砂叶螨的驱避和产卵抑制活性

本研究采用叶碟浸渍法测定了东莨菪内酯对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Biosduvals)雌成螨的触杀活性,采用选择性的半叶法测定了驱避活性,同时采用非选择性的全叶法测定了产卵抑制活性。结果表明,东莨菪内酯对朱砂叶螨雌成螨具有较好的触杀活性,采用叶碟浸渍法处理48h后的LC50为0.297mg·mL-1,LC30为0.105mg·mL-1,LC10为0.023mg·mL-1。采用LC50、LC30和LC103个浓度的东莨菪内酯处理雌成螨后,发现东莨菪内酯对雌成螨没有表现出明显的驱避活性,处理区和对照区24h和48h的着螨率均为50%左右;采用LC50和LC102个浓度处理雌成螨后表现出了一定的产卵抑制活性,平均产卵抑制率分别为23.02%和13.23%,而LC30对雌成螨的产卵量表现出了促进作用,平均产卵抑制率为-8.25%,这可能是由于毒物兴奋效应所致。本研究旨在为东莨菪内酯的进一步开发和应用奠定理论基础。     

两种甲状腺功能亢进症动物模型的对比研究

目的：复制两种甲状腺功能亢进症动物模型,对比研究它们成型性及可持续性的异同,为研究治疗甲亢的药物提供良好的评价载体。方法优甲乐模型：大鼠灌胃给予优甲乐50μg/100 g鼠重共21 d,于末次给药后第1、7、14天分别于眼底取血和接取尿液,检测相关指标;小肠结肠炎耶尔森氏菌模型：大鼠尾静脉注射小肠结肠炎耶尔森氏菌,于第0、5、10、15、20天共注射5次,并于末次注射后第5、15、25天大鼠眼底取血和接取尿液,检测相关指标。结果优甲乐模型：造模后T3、T4、FT3、FT4显著升高,但造模型后1周即恢复正常,尿液代谢的PCA图中显示模型组整体代谢网络偏离空白组,2周后恢复正常;小肠结肠炎耶尔森氏菌模型：造模后第15天和25天时T3和T4升高,第25天时TSH显著升高,尿液代谢的PCA图中模型组偏离空白组,而第15天和25天时未回到空白组位置。结论优甲乐甲亢模型成型性好但恢复迅速,作为药效评价时适合预防给药;而小肠结肠炎耶尔森氏菌甲亢模型成型性好并且持续性较好,作为药效评价时可采取治疗给药方式。     

瑞芬太尼复合丙泊酚静脉全麻与异氟醚吸入全麻在小儿眼科手术中比较

目的：比较瑞芬太尼复合丙泊酚静脉全麻用于小儿眼科手术麻醉的安全性、有效性及可控性。方法：选择择期眼科手术的小儿40例,随机分为两组：瑞芬太尼复合丙泊酚静脉全麻组（RP组）和异氟醚吸入全麻组（Ⅰ组）,每组20例。麻醉诱导采用咪唑安定0．05mg·kg^-1,丙泊酚2mg·kg^-1,维库溴胺0．1mg·kg^-1,观察组用瑞芬太尼2μg·kg^-1,对照组用芬太尼3μg·kg^-1,气管插管后机械通气,RP组麻醉维持采用静脉持续输注瑞芬太尼0．1μg·kg^-1min^-1和丙泊酚,Ⅰ组麻醉维持用异氟醚吸入,术中根据麻醉深度调整异氟醚吸入浓度和丙泊酚输注速度。观察围术期两组血流动力学变化、自主呼吸恢复、气管拔管和清醒的时间,苏醒后躁动和恶心呕吐的发生率。结果：两组病人平均动脉压（MAP）变化：两组T1、T2、T3、T4与T0比较,MAP明显降低（P〈0．05）,T5与T0比较,MAP无明显差异（P〉0．05）;组间比较,两组在T0、T1、T2、T3、T4、T5点,MAP无明显差异（P〉0．05）。两组病人心率（HR）变化：Ⅰ组：T3、T4、T5与T0比较,心率显著增快（P〈0．05）,RP组：T1、T2、T3、T4与T0比较,心率明显降低（P〈0．05）,T5与T0比较,心率变化无明显差异（P〉0．05）。组间比较,两组在T0心率无明显差异,T1、T2、L、T4、T5观察组与对照组比较,心率明显降低（P〈0．01）。麻醉苏醒时间比较：RP组与Ⅰ组比较,病人自主呼吸恢复时间、意识恢复时间和拔管时间均明显缩短（P〈0．05）。RP组术后躁动、恶心呕吐发生率,均低于Ⅰ组（P〈0．05）。结论：瑞芬太尼复合丙泊酚静脉全麻可为小儿眼科手术提供稳定血流动力学状态,快速苏醒,适用于小儿眼科手术麻醉。     

高效液相色谱法同时检测棉花根中的多种植物激素

目的：探寻高效液相色谱同时检测棉花根中多种植物激素含量的方法。方法：采用WatersC18反相色谱柱（4.6×250mm,5μm）,在柱温为35℃、流速为1mL.min-1的条件下,以乙腈和三乙胺溶液为流动相梯度洗脱,在每种物质的保留时间附近切换至最大吸收峰（GA3除外）波长作为检测波长,并与254nm同一波长检测多种植物激素含量的方法进行比较,分离和检测棉花根中的玉米素（Z）、玉米素核苷（ZR）、赤霉酸（GA3）、生长素（IAA）和脱落酸（ABA）的含量。结果：切换波长法检测5种植物激素的灵敏度和回收率均较高,检出限均较低。回收率为：Z 96.82%、ZR 94.14%、GA3 92.75%、IAA 93.38%、ABA 95.57%;检出限为：Z 0.1μg.mL-1、ZR 0.1μg.mL-1、GA3 0.5μg.mL-1、IAA 0.3μg.mL-1;ABA 0.05μg.mL-1,能准确检测出棉花根中Z、ZR、GA3、IAA和ABA的含量。结论：采用Waters C18反相色谱柱（4.6×250mm,5μm）,在柱温为35℃、流速为1mL.min-1的条件下,以乙腈和三乙胺溶液为流动相梯度洗脱,结合切换波长法能同时检测出植物组织中多种植物激素含量。     

HPLC测定莪术油葡萄糖注射液中四种成分的含量

采用HPLC法测定了莪术油葡萄糖注射液中四种成分(莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮、呋喃二烯)含量。本法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为甲醇-水(85∶15 V/V),流速为0.8mL/min,柱温:30℃,检测波长为215nm。在该色谱条件下,分别建立莪术二酮、莪术醇、牻牛儿酮、呋喃二烯的线性回归方程。结果表明,该法的精密度、重复性、稳定性良好(RSD<2.0%),平均回收率均大于96%(RSD<3.0%,n=5),通过测定得到莪术油葡萄糖注射液中四种主分的含量分别为67,26,20,45μg/mL。HPLC法准确、可靠、重复性良好,可用于莪术油葡萄糖注射液的质量控制。     

溶血卵磷脂及其受体GPR4对HUVEC的增殖及caspase3前体表达的影响

目的：研究溶血卵磷脂（lysophosphatidylcholine,LPC）及其受体GPR4（G protein-coupled receptor 4,GPR4）相互作用后对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）增殖的影响及其凋亡的诱导。方法：采用脂质体2000将装有GPR4受体基因的pEFneo真核表达载体转染HUVEC,并通过G418（800pg／ml）筛选获得GPR4基因稳定表达细胞株;RT—PCR法检测转染前后GPR4受体的mRNA水平表达情况;MTT法检测细胞的生长活力;AO染色法观察LPC对HUVEC造成损伤后形态的改变;Western blot法检测LPC与其受体相互作用后对caspase-3前体表达的影响。结果：成功获得了GPR4基因稳定表达细胞株;随着LPC浓度的增加（0．5,1,2,4,8pmoH）,抑制率分别增加了3．1％,4．4％,9．3％,17．0％,25．7％;但caspase-3前体的表达却随着浓度的增加先增加后减少。结论：LPC及其受体GPR4相互作用后可抑制HUVEC的增殖,并对HUVEC造成损伤进而诱导凋亡．使caslaase-3前体的表达先增加后减少。